孫利輝，丁 櫻, *，韓姍姍, ，代彥林，徐閃閃，邢亞萍

·數(shù)據(jù)挖掘與循證醫(yī)學(xué)·

基于文獻(xiàn)挖掘探討中藥減輕雷公藤雌性生殖毒性的規(guī)律分析

孫利輝1，丁 櫻1, 2*，韓姍姍1, 2，代彥林1，徐閃閃2，邢亞萍1

1. 河南中醫(yī)藥大學(xué)兒科醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450000 2. 河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450000

基于文獻(xiàn)挖掘探討中藥減輕雷公藤雌性生殖毒性的規(guī)律分析，為臨床合理用藥、規(guī)避藥物不良反應(yīng)提供參考。以“雷公藤、中草藥、生殖”為主題，檢索自1981年1月1日—2022年8月31日中國知網(wǎng)、萬方、維普、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫及PubMed、Cochrane Library、Embase數(shù)據(jù)庫中相關(guān)研究文獻(xiàn)，建立數(shù)據(jù)庫，人工篩選文獻(xiàn)，用Excel 2021數(shù)據(jù)透視表統(tǒng)計中藥的藥味、藥性、歸經(jīng)和功效分類，用SPSS Modeler 18.0及SPSS Statistics 26.0軟件進(jìn)行可視化分析。歸納總結(jié)符合納入標(biāo)準(zhǔn)的43篇文獻(xiàn)，共涉及84味減輕雷公藤雌性生殖毒性的中藥，使用頻率≥1%的有熟地黃、菟絲子、當(dāng)歸、枸杞子等28味中藥，性味歸經(jīng)以甘、辛、苦3味，溫、平、微溫3性，肝、腎、脾3經(jīng)占據(jù)前3，補(bǔ)陽藥占21.88%，補(bǔ)血藥占16.96%，補(bǔ)陰藥占12.50%，補(bǔ)氣藥占10.49%，活血調(diào)經(jīng)藥占9.15%。藥物關(guān)聯(lián)分析得出21個常用藥物組合。對頻率≥1%的28味中藥進(jìn)行聚類分析，得出7個新處方。雷公藤雌性生殖毒性的減毒用藥規(guī)律中，熟地黃-菟絲子是高頻藥物中最常用的制約雷公藤雌性生殖毒性的藥對。

雷公藤；文獻(xiàn)挖掘；中藥減毒；熟地黃；菟絲子；雌性生殖毒性

雷公藤是衛(wèi)矛科植物雷公藤Hook. f. 的干燥根，藥用部位為去皮的根木質(zhì)部，其味苦、辛，性寒，有劇毒，歸肝、腎經(jīng)，具有祛風(fēng)除濕、舒筋活絡(luò)、活血消腫、解毒殺蟲的功效，可治療多種免疫性疾病、結(jié)締組織病、皮膚病、腫瘤等，且療效顯著。然而，隨著雷公藤應(yīng)用的日益廣泛，不良反應(yīng)已成為其臨床用藥中遇到的重大挑戰(zhàn)。《本草綱目拾遺》記載雷公藤：“出江西者力大，土人采之毒魚，凡蚌螺之屬亦死，其性最烈”。可見雷公藤全株有毒，可引發(fā)多種不良反應(yīng)，在臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)其對血液、生殖系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、腎臟等多方面具有毒性，其中對女性生殖系統(tǒng)損害最為嚴(yán)重[1]，可損害卵巢功能使卵泡閉鎖影響女性正常內(nèi)分泌水平，出現(xiàn)月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)等癥狀。

越來越多的文獻(xiàn)研究顯示，在運(yùn)用雷公藤時，結(jié)合中醫(yī)藥的“相畏”“相殺”理論，通過配伍其他中藥可有效減輕雷公藤所致毒性，如五子衍宗丸、六味地黃丸等。鑒于此，本研究檢索1981—2022年40余年來雷公藤及其方藥的雌性生殖毒性的相關(guān)文獻(xiàn)，對中醫(yī)藥數(shù)據(jù)進(jìn)行挖掘，探尋配伍減輕雷公藤雌性生殖毒性的中藥，為預(yù)防和減輕雷公藤的雌性生殖毒性提供線索，為其臨床安全合理用藥提供參考，為開發(fā)雷公藤相關(guān)制劑提供依據(jù)。

1 方法

1.1 數(shù)據(jù)來源及篩選

選取收錄文獻(xiàn)資源最全面、應(yīng)用最廣泛的7大中英文數(shù)據(jù)庫：中國知網(wǎng)（CNKI）、萬方（Wanfang）、維普（VIP）、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫（CBM）和PubMed平臺、Cochrane Library、Embase數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索。主題詞設(shè)定為“雷公藤＋黃藤＋黃藤根＋黃藤木＋黃藤草＋黃臘藤＋黃藥＋水莽草＋水莽兜＋水莽藤＋水腦子根＋紅藥＋紅紫根＋震龍根＋萊蟲藥＋蝗蟲藥＋橫蟲藥＋斷腸草＋爛腸草＋八步倒＋山砒霜＋萊子草＋茅子草＋南蛇根＋三棱花＋旱禾花”AND“中草藥＋中藥＋草藥＋中成藥＋中醫(yī)藥＋方劑＋方藥＋膏＋丸＋散＋湯＋中醫(yī)＋中醫(yī)藥＋中醫(yī)學(xué)＋中西醫(yī)＋顆?！盇ND“生殖＋性腺＋性功能＋性欲＋生育＋雌性＋女性＋卵巢＋不孕＋流產(chǎn)＋排卵＋卵子＋卵泡＋黃體＋性激素＋月經(jīng)＋閉經(jīng)＋經(jīng)量＋經(jīng)期＋經(jīng)間期＋帶下＋妊娠＋胎漏＋胎動不安＋墮胎＋死胎＋胎死＋滑胎＋胎痿”；檢索時限為1981年1月1日—2022年8月31日。共檢索到6449條文獻(xiàn)。

1.2 納入和排出標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 包含臨床隨機(jī)對照試驗或動物實驗同時符合以下①③④⑤或②③④⑤標(biāo)準(zhǔn)：①雷公藤及其制劑同時配伍減輕其生殖毒性的中藥者；②雷公藤及其制劑引起雌性生殖毒性后單用減輕生殖毒性的中藥者；③處方中藥味、劑量、療程、用法明確合理（文獻(xiàn)信息、方藥組成及劑量完整，以中藥內(nèi)服湯劑為主）；④試驗設(shè)計方法可靠，結(jié)果有效（病情得到改善，即中藥治療前后對比或試驗組和對照組相比有明顯改善）；⑤對于同一作者的同一處方2篇以上的文獻(xiàn)以及重復(fù)方劑內(nèi)容雷同的文獻(xiàn)，僅選取數(shù)據(jù)最全的1篇。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①研究對象合并其他可導(dǎo)致生殖損傷的疾病。②實際情況明顯不符者或資料來源不清者。③動物實驗、個人經(jīng)驗、病例報道、理論探討、會議論文及文獻(xiàn)綜述等文獻(xiàn)。④在中藥處方基礎(chǔ)上聯(lián)合其他治療方式，如推拿按摩、針灸治療、理療等，而療效不能排除其他治療方式影響的文獻(xiàn)。⑤僅敘述方名而藥物組成、劑量不完整或者以其他劑型治療為主的文獻(xiàn)。⑥單味中藥處方（無配伍意義的單方以及未注明藥物組成的方劑）。⑦試驗的結(jié)局展示為無效者（無明顯療效或研究結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義）。⑧中藥單體成分或提取物。

1.3 建立數(shù)據(jù)庫

根據(jù)納排標(biāo)準(zhǔn)篩選符合的文獻(xiàn)，將其導(dǎo)入Noteexpress或EndNote軟件中處理。數(shù)據(jù)錄入采用人工雙錄入模式，即1人錄入、另1人核對，將篩選后符合條件的處方錄入Excel 2021表格中。數(shù)據(jù)錄入時以《中國藥典》2020年版為參考標(biāo)準(zhǔn)來規(guī)范中藥名稱，并同時錄入中藥的藥味、藥性、歸經(jīng)和功效（藥物未被《中國藥典》2020年版收錄者，則不納入統(tǒng)計，如紫河車、橘葉、千斤拔、牛大力等）。炮制方法不同但一般統(tǒng)稱為同一藥物者需合并，如制巴戟天、巴戟天統(tǒng)一為巴戟天；藥物名稱不同但實則為同一藥物者需統(tǒng)一，如仙靈脾、淫羊藿統(tǒng)一為淫羊藿；炮制后功效改變較大的中藥歸為不同藥物，如熟地黃、地黃分別錄入。對數(shù)據(jù)庫中每一味中藥使用頻數(shù)、功效分類、藥對總數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用Excel 2021統(tǒng)計中藥的藥味、藥性、歸經(jīng)和功效分類。用SPSS Modeler 18.0及SPSS Statistics 26.0軟件對高頻中藥進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則和系統(tǒng)聚類分析，對得到的高頻藥物組合進(jìn)行可視化展示。

2 結(jié)果

2.1 中藥頻次統(tǒng)計

本研究共納入符合條件的中藥處方43個，涉及中藥84味，總頻次448次。其中使用頻率≥1%的中藥有熟地黃、菟絲子、當(dāng)歸、枸杞子、川芎等28味（表1），這些中藥累計頻次340次，占總頻次的75.89%。

2.2 藥味、藥性、歸經(jīng)及功效分類統(tǒng)計

對84味中藥進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在藥味方面，甘、辛、苦位居前3，累計頻率為79.35%；在藥性方面，以溫、平、微溫3性為主，累計頻率為77.01%；在歸經(jīng)方面，主要歸于肝、腎、脾、心、肺經(jīng)，累計頻率為86.63%；在藥物功效（參照《中藥學(xué)》“十三五”規(guī)劃教材）方面，補(bǔ)陽藥、補(bǔ)血藥、補(bǔ)陰藥、補(bǔ)氣藥和活血調(diào)經(jīng)藥為常用藥（表2、3）。

表1 使用頻率≥1%的中藥

表2 中藥藥味、藥性及歸經(jīng)統(tǒng)計

表3 中藥功效分類統(tǒng)計

2.3 中藥聚類分析

將使用頻率≥1%的28味中藥運(yùn)用SPSS Statistics 26.0軟件采用平均聯(lián)接（組間）和Pearson相關(guān)性進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，生成樹狀聚類圖（圖1）。在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，以類間距為21，將藥物分為7類。Ⅰ類：茯苓、澤瀉、白術(shù)；Ⅱ類：肉蓯蓉、丹參、山茱萸、山藥、地黃、甘草；Ⅲ類：菟絲子、淫羊藿、續(xù)斷；Ⅳ類：益母草、赤芍、覆盆子、五味子、香附、川牛膝、枸杞子；Ⅴ類：女貞子；Ⅵ類：當(dāng)歸、川芎、白芍、熟地黃；Ⅶ類：黨參、黃芪、巴戟天、黃精。

2.4 中藥關(guān)聯(lián)規(guī)則分析

運(yùn)用SPSS Modeler 18.0軟件對28味高頻中藥進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則分析，設(shè)置“弱鏈接上限”為5，“強(qiáng)鏈接下限”為15，結(jié)果得到頻次≥10的藥物組合21個（表4）。頻次排名前6位的藥物組合（強(qiáng)鏈接組合）依次是熟地黃-菟絲子、熟地黃-當(dāng)歸、菟絲子-當(dāng)歸、當(dāng)歸-川芎、當(dāng)歸-枸杞子、菟絲子-淫羊藿。藥物間的關(guān)聯(lián)通過網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行展示（圖2）。利用Apriori建模進(jìn)一步挖掘藥物之間的配伍關(guān)系，設(shè)置支持度為25%，置信度為90%，調(diào)整最大前項數(shù)為5，分析挖掘潛在藥物組合。按支持度排名，結(jié)果得到11個核心藥物組合（表5）。其中當(dāng)歸、川芎、菟絲子、淫羊藿、熟地黃、枸杞子在多個藥物組合中頻繁出現(xiàn)，因此是中藥關(guān)聯(lián)規(guī)則網(wǎng)絡(luò)的核心藥物。

圖1 中藥聚類分析

2.5 中藥因子分析

應(yīng)用SPSS Statistics 20.0軟件對28味高頻中藥（使用頻率≥1%）進(jìn)行因子分析，結(jié)果顯示KMO（Kaiser-Meyer-Olkin）值為0.308＜0.5，Bartlett球形度檢驗值為500.041，且＜0.01，表明本數(shù)據(jù)具有較好的線性關(guān)系，可進(jìn)行因子分析。選擇最大方差法旋轉(zhuǎn)分析，結(jié)果得到11個公因子，其累積方差貢獻(xiàn)率為76.118%。由碎石圖（圖3）可以看出，從第11個因子之后，線條趨于平緩。經(jīng)過因子分析，形成高頻中藥的旋轉(zhuǎn)成分矩陣（表6）。根據(jù)旋轉(zhuǎn)成分矩陣提取藥物因子分析組合（表7），最后產(chǎn)生因子分析圖（圖4）。

表4 頻數(shù)≥10的藥物組合

圖2 藥物關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)圖

3 討論

雷公藤作為我國傳統(tǒng)的中藥，已有2000年的應(yīng)用歷史，又名黃藤、黃藥、莽草、紅藥等，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》中對莽草的描述“味辛，溫。主風(fēng)頭，癰腫，乳腫，疝瘕。除結(jié)氣，疥瘙。殺蟲魚。”雷公藤素有“一味單方，氣死名醫(yī)”“一味雷公藤，功蓋百藥”之說，其在傳統(tǒng)中藥中的地位舉足輕重。研究表明，雷公藤的生物活性由多種成分（二萜類、三萜類、生物堿等）協(xié)同產(chǎn)生，通過多靶點、多維度的路徑發(fā)揮藥理作用，已有20余種含雷公藤成分的中成藥被批準(zhǔn)上市，其臨床常用中成藥制劑有雷公藤多苷片、雷公藤片、金關(guān)片、雷公藤總萜片等?！侗静菥V目》中記述：“此物有毒，食之令人迷罔，故名。山人以毒鼠，謂之鼠莽?！?979年楊惠勤[2]首次報道80例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者服用黃藤合劑出現(xiàn)3例閉經(jīng)，隨后舒滬英等[3]再次報道雷公藤對女性生殖機(jī)能有明顯影響，閉經(jīng)發(fā)生率為69.4%。如何使“大毒有大效”的雷公藤在發(fā)揮療效的同時將其不良反應(yīng)降到最小，是中醫(yī)藥臨床研究極為關(guān)注的問題。

表5 中藥關(guān)聯(lián)規(guī)則分析

圖3 中藥因子分析碎石圖

綜合本研究結(jié)果，根據(jù)關(guān)聯(lián)規(guī)則分析最終可以形成以“熟地黃-菟絲子”為核心的新藥物配伍組合，如熟地黃、菟絲子、當(dāng)歸、川芎和熟地黃、菟絲子、淫羊藿。這些新藥物組合有利于指導(dǎo)雷公藤致雌性生殖損傷的臨床治療及預(yù)防，之后的研究課題將對這些藥物組合進(jìn)行深層次的分子作用機(jī)制研究和實驗驗證。

表6 高頻中藥的旋轉(zhuǎn)成分矩陣

表7 因子分析組合

圖4 中藥因子分析旋轉(zhuǎn)空間成分圖

3.1 雷公藤生殖毒性分析

研究發(fā)現(xiàn)男女服用雷公藤出現(xiàn)的生殖毒性總發(fā)生率為17.9%，可見雷公藤產(chǎn)生的生殖毒性不容忽視[4]。徐穎等[5]通過檢索文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)早期研究重在雷公藤生殖毒性的表現(xiàn)，2010年左右開始重視雷公藤毒性的防治措施研究，將性別分開研究，且以減毒研究為主。雷公藤對女性生殖系統(tǒng)的影響主要表現(xiàn)為月經(jīng)紊亂、經(jīng)量減少、閉經(jīng)、卵巢早衰、排卵障礙、性功能減退等，其毒性發(fā)生率及持續(xù)時間與用藥劑量、療程和患者年齡等有關(guān)[6]。吳克明等[7]報道正常雌性育齡期小鼠以30倍和40倍臨床等效劑量的雷公藤多苷連續(xù)給藥10周后，觀察到動情周期紊亂、生殖激素水平降低或失調(diào)、子宮質(zhì)量減輕及組織形態(tài)學(xué)改變；以20倍臨床等效劑量給予雌性育齡期大鼠10周后，也出現(xiàn)卵泡發(fā)育障礙、卵巢臟器指數(shù)和功能下降等現(xiàn)象。雷公藤通過誘導(dǎo)卵巢細(xì)胞凋亡、抑制卵泡生長發(fā)育、干擾生殖內(nèi)分泌等，涉及到促凋亡蛋白B淋巴細(xì)胞瘤-2相關(guān)X蛋白（B-cell lymphoma-2 associated X protein，Bax）、人美麗線蟲凋亡基因3（human caenorhabditis elegans death gene3，CED-3）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、γ干擾素（interferon-γ，IFN-γ），抗凋亡蛋白B淋巴細(xì)胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、Smad 2（small mothers against decapentaplegic 2）、蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）、增殖標(biāo)記蛋白Ki-67、透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）、ced-9以及磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase，p-Akt）、磷酸化雷帕霉素靶蛋白（phosphorylated mammalian target of rapamycin，p-mTOR）、磷酸化p70核糖體蛋白S6激酶（phosphorylated 70 kDa ribosomal protein S6 kinase，p-p70S6K）等通路信號分子，、生長分化因子-9（growth differentiation factor-9，）mRNA，性激素及其合成關(guān)鍵酶等[8]。

雷公藤所致的生殖毒性因男女不同，故所屬的中醫(yī)病證范圍不同。中醫(yī)文獻(xiàn)中尚無“排卵障礙”“卵巢早衰”等記載，究其證候?qū)儆谥嗅t(yī)的“月經(jīng)先后無定期”“經(jīng)亂”“閉經(jīng)”“不孕”等范疇。在女子“閉經(jīng)”“不孕”等方面，祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為“經(jīng)水出諸腎”，月經(jīng)是臟腑、經(jīng)絡(luò)、氣血協(xié)調(diào)作用于胞宮的生理現(xiàn)象，其中以腎-天癸-沖任-胞宮為軸心，以腎氣為主導(dǎo)，腎通過天癸、沖任二脈主司女性月經(jīng)、孕育?！端貑枴ぴu熱病論》曰：“月事不來者，胞脈閉也，胞脈者屬心而絡(luò)于胞中，今氣上迫肺，心氣不得下通，故月事不來也”。王景尚等[9]認(rèn)為雷公藤所致卵巢儲備功能低下的基本病機(jī)為腎陽不足，沖任虛寒，胞宮失煦，天癸遲至，血海空虛，加之肝氣郁結(jié)，疏泄失常，瘀血內(nèi)停，沖任阻滯，胞脈不通，而致閉經(jīng)、不孕。

3.2 雷公藤生殖毒性的減毒策略

化學(xué)藥配伍減輕雷公藤生殖毒性的措施主要有協(xié)同減量、激素替代、改變給藥途徑等，如雷公藤透皮微乳給藥[10]、雷公藤甲素聚合物膠束治療[11]，存在一定的局限性，且未開發(fā)出減輕雷公藤生殖毒性的特效藥，使得臨床應(yīng)用明顯受限，故找尋其生殖毒性減毒藥物是亟待解決的關(guān)鍵問題。

中藥配伍減輕雷公藤所致生殖毒性已被諸多學(xué)者研究，且療效顯著。曹俊巖等[12]研究雷公藤多苷致大鼠卵巢功能低下模型的中醫(yī)證候?qū)傩詾槟I精腎氣虧虛證，予以新加歸腎湯補(bǔ)腎氣益精血；胡兵等[13]、張宏博等[14]分別用當(dāng)歸芍藥散、六味地黃丸治療雷公藤多苷導(dǎo)致的雌鼠的卵巢功能低下；高慧等[15]用補(bǔ)腎調(diào)沖方干預(yù)雷公藤多苷致大鼠卵巢早衰；何加玕等[16]發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎方可拮抗雷公藤對雌鼠生殖系統(tǒng)的毒性作用，保護(hù)卵巢，從而間接地反映益腎調(diào)經(jīng)中藥對女性性腺的保護(hù)作用；石詠軍等[17]研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤配伍中藥復(fù)方參芪地黃湯合四物湯能拮抗雷公藤導(dǎo)致的女性患者月經(jīng)紊亂；患者可同時口服八珍湯、逍遙丸以對抗雷公藤致女性生育毒性[18]。

綜上可知中藥配伍減輕雷公藤雌性生殖毒性，以補(bǔ)腎益精、補(bǔ)益氣血兼調(diào)肝理脾為主要治療大法，改善生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能，優(yōu)勢顯著。

3.3 高頻藥物及藥對分析

研究結(jié)果顯示，減輕雷公藤生殖毒性的中藥處方使用頻率最高的藥對是熟地黃-菟絲子，較高頻率的是枸杞子、當(dāng)歸、川芎。熟地黃最早記載于《本草圖經(jīng)》，為玄參科植物地黃的新鮮塊根，味甘，性微溫，歸肝、腎經(jīng)，功擅補(bǔ)血滋陰、益精填髓?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究分析，熟地黃的有效成分主要為糖類、谷甾醇、核苷等，具有抗衰老、抗氧化等作用，可下調(diào)生殖相關(guān)基因原癌基因蛋白/活化蛋白1（transcription factor AP-1，）、以減輕雷公藤的生殖毒性[19]。菟絲子來源于旋花科植物南方菟絲子或菟絲子的干燥成熟種子，首載于漢代的《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品，其性平，味辛、甘，歸肝、腎、脾經(jīng)，具有補(bǔ)腎益精、養(yǎng)肝明目、固精縮尿、安胎止瀉等功效，主要化學(xué)成分包括黃酮類、多糖類、生物堿類、萜類、甾體類、揮發(fā)油以及木脂素等[20]，具有雌激素樣活性，能促進(jìn)下丘腦-垂體-性腺軸的相關(guān)功能，可增強(qiáng)免疫力、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、營養(yǎng)神經(jīng)、增加冠脈血流量、降血糖、抗氧化和抗衰老等[21-22]。崔瑞琴等[23]研究發(fā)現(xiàn)菟絲子可以促進(jìn)被雷公藤多苷所抑制的mRNA表達(dá)，表明菟絲子對雷公藤多苷所致卵巢功能損傷具有保護(hù)效應(yīng)。枸杞子是茄科植物寧夏枸杞的干燥成熟果實，性平，味甘，歸肝、腎經(jīng)，具有滋補(bǔ)肝腎、益精明目的功效，富含糖類、生物堿類、黃酮類及酚酸類成分，具有調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、抗衰老、調(diào)血脂、降血糖、抗腫瘤等作用[24]。枸杞多糖為其活性成分，可發(fā)揮雌激素樣作用，保護(hù)卵巢功能[25]。菟絲子-枸杞子配伍的現(xiàn)代研究表明，二者配伍可以治療卵巢早衰、更年期綜合征、不孕癥等疾病，可能通過磷脂酰肌醇-3-羥激酶（phosphatidylinositol-3-hydroxykinase，PI3K）/Akt信號通路、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）等多條通路作用于Akt1、腫瘤蛋白p53（tumor antigen p53，TP53）等多個靶點治療卵巢早衰[26]。當(dāng)歸來源于傘形科植物當(dāng)歸的干燥根，性溫，味甘、辛，歸肝、心、脾經(jīng)，擅于補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便，主要含有揮發(fā)油類、有機(jī)酸類、多糖類、氨基酸及其他化學(xué)成分，具有增強(qiáng)人體免疫力、保護(hù)心血管功能、改善血液循環(huán)系統(tǒng)、抗氧化等作用[27-28]。川芎來源于傘形科植物川芎的干燥根莖，主入肝、膽、心包經(jīng)，辛溫香燥，走而不守，既能行散，上行可達(dá)巔頂；又入血分，下行可達(dá)血海，具有活血行氣、祛風(fēng)止痛的功效，屬活血化瘀藥下屬分類的活血止痛藥，有效成分主要包括酚類和有機(jī)酸類、苯酞類、生物堿類、多糖類等[29]?，F(xiàn)代藥理研究表明，川芎具有抗氧化、神經(jīng)保護(hù)、抗炎、抗菌、抗凋亡和阻滯鈣通道、擴(kuò)張血管、抗血小板聚集、調(diào)節(jié)免疫功能等活性[30-31]。川芎、當(dāng)歸在婦科常用方劑當(dāng)歸芍藥散、四物湯中發(fā)揮巨大的作用，可能通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt/叉頭框轉(zhuǎn)錄因子O3a（forkhead box O3a，F(xiàn)OXO3a）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）/Smads信號通路，上調(diào)、mRNA的相對表達(dá)量，下調(diào)FOXO3a蛋白表達(dá)，起到調(diào)節(jié)卵泡發(fā)育，改善卵巢儲備功能的作用[32]。

以上5種藥物使用頻率最高，表明減輕雷公藤生殖毒性的中藥，首選補(bǔ)腎填精、補(bǔ)血活血、益肝行氣的藥物，臨床用藥與生殖密切相關(guān)的腎虛、肝郁、血瘀的基本病機(jī)相符，也與卵巢早衰、卵巢儲備功能下降的病理結(jié)構(gòu)卵泡數(shù)量稀少，閉鎖卵泡增多且形狀不規(guī)整，顆粒細(xì)胞層次凌亂，排列不規(guī)則等病變相貼合。

3.4 中藥屬性分析

藥物功效分析顯示，補(bǔ)陽藥占21.88%，補(bǔ)血藥占16.96%，補(bǔ)陰藥占12.5%，補(bǔ)氣藥占10.49%，活血調(diào)經(jīng)藥占9.15%，以補(bǔ)藥為主，兼顧氣血陰陽，加之活血調(diào)經(jīng)，以補(bǔ)腎中陰陽、肝中血液和活胞宮脈絡(luò)之血，從肝腎-天癸-沖任-胞宮軸實現(xiàn)腎氣盛、天癸至、任脈通、太沖脈盛等因素共同作用于胞宮表現(xiàn)為女子月經(jīng)來潮和妊娠。這表明中藥減輕雷公藤生殖毒性多用補(bǔ)虛活血類藥物，以補(bǔ)腎養(yǎng)肝、理氣活血為治則，這也合乎女子月經(jīng)病腎虛、肝郁、氣血壅滯的基本病機(jī)?！额惤?jīng)·藏象類》云：“肝腎為子母，其氣相通也。”《格致余論》曰：“主閉藏者腎也，司疏泄者肝也?！痹谂印伴]經(jīng)”“不孕”等方面，祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為“經(jīng)水出諸腎”，月經(jīng)是臟腑、經(jīng)絡(luò)、氣血協(xié)調(diào)作用于胞宮的生理現(xiàn)象，其中以腎-天癸-沖任-胞宮為軸心，以腎氣為主導(dǎo)，腎通過天癸、沖任二脈主司女性月經(jīng)、孕育。明代傅青主云：“婦人受孕，本于腎氣之旺，腎旺是以攝精?！蹦I藏精，主生長發(fā)育生殖，陰精充足在肝的疏泄作用下外泄，促使卵泡成熟破裂排出卵子。腎中陰陽消長、氣血盈虧規(guī)律變化，至腎中精氣旺盛而生天癸，則沖任二脈通盛，胞宮氣血滿溢，月事應(yīng)時而下?！堆κ厢t(yī)案》云：“婦女之不孕，亦有因六淫七情之邪，有傷沖任?！薄毒霸廊珪吩唬骸爱a(chǎn)育由氣血，氣血由情懷，情懷不暢則沖任不充，則胎孕不受?！薄端貑枴ぴu熱病論》曰：“月事不來者，胞脈閉也，胞脈者屬心而絡(luò)于胞中，今氣上迫肺，心氣不得下通，故月事不來也?！薄堆C論·胎氣》載：“故行經(jīng)也，必天癸之水，至于胞中，而后沖任之血應(yīng)之，亦至胞中，于是月事乃下?！爆F(xiàn)代研究表明不孕婦女常有焦慮、敏感等不良情緒，使得肝失條達(dá)，氣機(jī)失調(diào)，氣血逆亂，上擾清竅，導(dǎo)致神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)功能紊亂，“下丘腦- 垂體-卵巢”性腺軸調(diào)控失常，造成女子不孕。

3.5 藥物關(guān)聯(lián)規(guī)則及聚類分析

根據(jù)藥物關(guān)聯(lián)規(guī)則分析，得出6種常用藥物組合：熟地黃-菟絲子、熟地黃-當(dāng)歸、菟絲子-當(dāng)歸、當(dāng)歸-川芎、當(dāng)歸-枸杞子、菟絲子-淫羊藿。以上可知，熟地黃-菟絲子和菟絲子-淫羊藿為補(bǔ)腎填精藥物，熟地黃-當(dāng)歸、菟絲子-當(dāng)歸和當(dāng)歸-枸杞子為補(bǔ)腎養(yǎng)血藥物，與當(dāng)歸-川芎行氣活血藥物強(qiáng)關(guān)聯(lián)。

通過對單味藥頻次統(tǒng)計中頻次前28位的中藥進(jìn)行聚類分析，得出7個新處方：（1）茯苓、澤瀉、白術(shù)；（2）肉蓯蓉、丹參、山茱萸、山藥、地黃、甘草；（3）菟絲子、淫羊藿、續(xù)斷；（4）益母草、赤芍、覆盆子、五味子、香附、川牛膝、枸杞子；（5）女貞子；（6）當(dāng)歸、川芎、白芍、熟地黃；（7）黨參、黃芪、巴戟天、黃精。第1個處方以健脾滲濕為主；第2個處方以補(bǔ)腎養(yǎng)肝、活血化瘀、健脾益氣為主。以上7個新藥物組合具有應(yīng)用價值，可在臨床進(jìn)一步驗證，為臨床提供新思路。

3.6 中藥因子分析

因子分析與關(guān)聯(lián)規(guī)則分析、聚類分析都是數(shù)據(jù)挖掘中常用的統(tǒng)計分析方法，因子分析研究變量之間的內(nèi)部依賴關(guān)系，通過抽象的變量以降維和簡化數(shù)據(jù)。本研究因子分析的結(jié)果與聚類分析結(jié)果有諸多相似之處，如CF1與I類、CF2與IV類、CF3與VI類、CF4與VII類、CF8與III類大體相同，提示這些相似結(jié)果同時具有聚類和因子分析降維的特點。其中CF1可在許多中藥處方中找到，如在補(bǔ)腎名方六味地黃丸中作為“三瀉”中的2味佐藥以瀉腎降濁、滲濕健脾；CF2在清肝止淋湯、大營煎的配伍中出現(xiàn)以補(bǔ)腎利濕、行氣活血，CF3在四物湯、當(dāng)歸芍藥散中配伍以補(bǔ)血活血，CF4在十全大補(bǔ)湯、歸脾湯、并提湯中配伍以補(bǔ)脾腎，CF8中菟絲子平補(bǔ)陰陽，巴戟天和續(xù)斷補(bǔ)陽益精?？梢娨蜃臃治鼋Y(jié)果主要以補(bǔ)脾腎、益氣血為治療方法達(dá)到治療女性生殖相關(guān)的疾病。

4 結(jié)論

隨著全球大數(shù)據(jù)時代的飛速發(fā)展，中醫(yī)藥的數(shù)據(jù)挖掘工作愈加重要，為完善中醫(yī)藥臨床應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支持。本研究整理建立“中藥配伍減輕雷公藤生殖毒性”數(shù)據(jù)庫，通過統(tǒng)計學(xué)方法，為減輕雷公藤生殖毒性尋找最佳藥物，探尋處方配伍規(guī)律、發(fā)現(xiàn)核心藥對，挖掘潛在處方，為中醫(yī)臨床用藥提供參考。本研究尚存在局限性，僅通過文獻(xiàn)研究回顧近40余年來中藥治療的用藥規(guī)律，后期會進(jìn)一步通過實驗驗證或網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分子對接驗證，結(jié)合臨床研究評判挖掘得到的核心組合及新處方的臨床價值。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Analysis of regularity of traditional Chinese medicine for attenuating female reproductive toxicity ofbased on literature mining

SUN Li-hui1, DING Ying1, 2, HAN Shan-shan1, 2, DAI Yan-lin1, XU Shan-shan2, XING Ya-ping1

1. Pediatric Medical College, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450000, China 2. The First Affiliated Hospital of Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450000, China

To explore the regularity of traditional Chinese medicine (TCM) for attenuating the female reproductive toxicity of Leigongteng (Hook. f.) based on literature mining, providing reference for clinical rational drug use and avoidance of adverse drug reactions.The relevant research literatures in CNKI, Wanfang, VIP, China Biomedical Literature Database and PubMed, Cochrane Library and Embase databases were searched from January 1, 1981 to August 31, 2022, with the theme of “, Chinese herbal medicine and reproduction”. The database was established and literatures was manually screened. The classification of flavor, property, meridian tropism and efficacy of TCM were analyzed by Excel 2021. The data were visualized by SPSS Modeler 18.0 and SPSS Statistics 26.0.A total of 43 articles were summarized, 84 kinds of TCMs for attenuating the female reproductive toxicity ofwere involved. 28 kinds of TCMs, such as Shudihuang (), Tusizi (), Danggui () and Gouqizi (), were used more than 1%. The property, flavors and meridian tropism were composed of sweet, pungent and bitter flavors, and warm, flat and mild natures, liver, kidney and spleen meridians occupy the top three. The-reinforcing drugs accounted for 21.88%, the blood-reinforcing drugs accounted for 16.96%, the-reinforcing drugs accounted for 12.50%, the-reinforcing drugs accounted for 10.49%, promoting blood circulation and regulating menstruation drugs accounted for 9.15%. Drug association analysis showed 21 common drug combinations. Cluster analysis was carried out on 28 kinds of TCMs with frequency ≥ 1%, and seven new prescriptions were obtained.andare the most commonly used drug pair in the high-frequency medicine to restrict the female reproductive toxicity of.

Hook. f.; literature mining; toxicity-relieving effect of TCM;;; female reproductive toxicity

R285；R283.21

A

0253 - 2670(2023)06 - 1886 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.06.021

2022-11-19

國家自然科學(xué)基金青年基金面上項目（82205187）；中國博士后科學(xué)基金項目（2021M690940）；中國民族醫(yī)藥學(xué)會科研項目（2021 Z1182-400614）；河南省中醫(yī)藥科學(xué)研究專項（20-21ZY2031）；河南省特色骨干學(xué)科中醫(yī)藥學(xué)科建設(shè)項目（STG-ZYXKY-2002030）；河南中醫(yī)藥大學(xué)科研啟動基金（RSBSJJ2019-23）；河南中醫(yī)藥大學(xué)研究生科研創(chuàng)新項目（2021KYCX047）

孫利輝，碩士研究生在讀，研究方向為中醫(yī)藥防治小兒腎臟疾病。Tel: 18614989310 E-mail: 2918443351@qq.com

丁 櫻 Tel: (0371)96129 E-mail: dingying3236@sina.com

[責(zé)任編輯 潘明佳]