杜 鎮(zhèn),張 玲,曹桂云,于瑞雪,崔 媛,田振華,蔣海強(qiáng)*
薏苡仁多糖的分離純化、單糖組成分析及對(duì)脾氣虛證調(diào)節(jié)作用
杜 鎮(zhèn)1,張 玲2,曹桂云3,于瑞雪2,崔 媛2,田振華2,蔣海強(qiáng)1*
1. 山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥創(chuàng)新研究院,山東 濟(jì)南 250355 2. 山東中醫(yī)藥大學(xué),山東 濟(jì)南 250355 3. 山東宏濟(jì)堂制藥有限公司,山東 濟(jì)南 250100
從薏苡仁中分離純化多糖,分析其單糖組成并通過(guò)血清代謝組學(xué)探討薏苡仁多糖對(duì)脾氣虛證的調(diào)節(jié)作用。石油醚脫脂、熱水抽提、乙醇沉淀、Sevage法除蛋白得到薏苡仁多糖(polysaccharide,CP),經(jīng)過(guò)DEAE-52纖維素離子交換柱、Sephadex G-75柱進(jìn)行分離純化,得到水洗脫多糖CP-W,氣相色譜分析單糖組成;通過(guò)飲食失節(jié)(高脂低蛋白飼料)與勞累過(guò)度相結(jié)合的方法建立大鼠脾氣虛證疾病模型,對(duì)獲得的血清進(jìn)行HPLC-TOF/MS分析,以期從代謝組學(xué)角度闡明薏苡仁多糖對(duì)其脾氣虛證的調(diào)節(jié)作用。從薏苡仁中分離純化得到CP-W多糖,其總碳水化合物含量為97.32%,單糖組成分析表明CP-W多糖由-鼠李糖、-阿拉伯糖、-木糖、-葡萄糖、-半乳糖組成,單糖組成比例為0.4∶0.3∶1.1∶97.7∶0.5。與對(duì)照組相比,模型組在給予CP-W之后,在血清中發(fā)現(xiàn)12種差異代謝物,主要與脂質(zhì)代謝、能量代謝和激素代謝相關(guān)。薏苡仁多糖能改善脾氣虛證模型的生理特征,血清代謝組學(xué)結(jié)果表明薏苡仁多糖能夠調(diào)節(jié)脾氣虛證大鼠紊亂的脂質(zhì)代謝、能量代謝、激素代謝等異常。
薏苡仁;多糖;單糖組成分析;脾氣虛證;代謝組學(xué);脂質(zhì)代謝;能量代謝;激素代謝
薏苡仁為禾本科植物薏苡L. var.(Roman.) Stapf的干燥成熟種仁,性甘、淡、涼,歸脾、胃、肺經(jīng)。具有利水滲濕,健脾止瀉等功效[1]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“脾居中焦,主運(yùn)化,為后天之本,氣血生化之源”。脾氣虛癥是臨床常見(jiàn)的中醫(yī)病癥之一,患者多有氣短懶言、形體消瘦、神疲乏力、不思飲食、脘腹脹滿等癥狀[2]。中醫(yī)臨床常通過(guò)健脾作為主要治療方法,薏苡仁則為常用健脾藥之一?,F(xiàn)代研究表明其主要活性成分包括薏苡仁油、薏苡仁酯、多糖、三萜、黃酮和生物堿等多種類(lèi)化合物,薏苡仁及其化學(xué)活性成分具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、降血糖、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌和抗氧化等藥理作用[3-4]。但目前薏苡仁多糖對(duì)于治療脾氣虛證的作用機(jī)制尚不明確。基于此,本實(shí)驗(yàn)采用石油醚脫脂、熱水抽提、乙醇沉淀、Sevage法除蛋白得到薏苡仁多糖,通過(guò)飲食不節(jié)與勞累過(guò)度相結(jié)合的方法建立大鼠脾氣虛證疾病模型,通過(guò)血清代謝組學(xué)評(píng)價(jià)薏苡仁多糖CP-W對(duì)脾氣虛證大鼠的影響。
SPF級(jí)Wistar大鼠,共21只,體質(zhì)量(150±20)g,購(gòu)自魯抗制藥集團(tuán)有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物許可證編號(hào)SCXK(魯)20130001;所有動(dòng)物研究均按照國(guó)際倫理準(zhǔn)則和國(guó)家衛(wèi)生研究院關(guān)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物關(guān)愛(ài)和使用的指南進(jìn)行。
薏苡仁(產(chǎn)地貴州),批號(hào)20140518,購(gòu)自山東百味堂中藥飲片有限公司,經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)周鳳秦教授鑒定為禾本科薏苡屬植物薏苡L. var.(Roman.) Stapf的干燥成熟種仁。單糖標(biāo)準(zhǔn)品-葡萄糖(批號(hào)Y19F11J108781)、-半乳糖(批號(hào)L11M7Y10892)、-鼠李糖(批號(hào)012A10K95105)、-阿拉伯糖(批號(hào)T05J6C1)、-木糖(批號(hào)B02M6W1)、-甘露糖(批號(hào)A1606L4546)、-海藻糖(批號(hào)Y18M9Y61746)均購(gòu)自源葉公司,質(zhì)量分?jǐn)?shù)>98%。乙酸、醋酸酐、甲醇、正丁醇、三氯甲烷、氫氧化鈉、氯化鈉、溴化鉀、丙酮、濃硫酸、無(wú)水乙醇、鹽酸均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)上?;瘜W(xué)試劑公司(中國(guó),上海);DEAE-52陰離子樹(shù)脂、Sephadex G-75凝膠購(gòu)自上海源葉生物化學(xué)試劑有限公司;吡啶、三氟乙酸、鹽酸羥胺購(gòu)自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。上述化學(xué)品和試劑均為分析級(jí)。乙腈、甲醇、甲酸為色譜純,購(gòu)自美國(guó)Thermo公司。
安捷倫1260型高效液相色譜儀和6230型HPLC-TOF/MS聯(lián)用儀、安捷倫6890N氣相色譜(GC),HP-5毛細(xì)管柱、火焰離子化檢測(cè)器。
取干燥薏苡仁,粉碎過(guò)60目篩,用石油醚回流脫脂2 h,重復(fù)提取3次。棄去廢液,將殘?jiān)鼡]干溶劑后在pH為5的條件下浸泡10 min。以水為提取溶劑,置于80 ℃的水浴中加熱提取2次,料液比為1∶10,提取時(shí)間為2 h;合并濾液,減壓濃縮,加入95%乙醇水溶液過(guò)夜,沉淀多糖,在3500 r/min離心10 min。收集多糖沉淀,沉淀用蒸餾水溶解,經(jīng)Sevage法[5]除蛋白質(zhì),需劇烈搖動(dòng)30 min除去蛋白質(zhì),重復(fù)幾次,直至無(wú)明顯蛋白質(zhì)產(chǎn)生為止。上清液加入80%乙醇水溶液,靜置12 h,離心。沉淀經(jīng)丙酮洗滌、五氧化二磷真空干燥以獲得脫蛋白質(zhì)粗多糖CP。稱取粗多糖加至已平衡好的DEAE-52纖維素柱中,依次用蒸餾水、0~0.6 mol/L NaCl洗脫,體積流量2 mL/min,將收集的水洗脫液經(jīng)Sephadex G-75凝膠色譜柱純化,用1 mL/min的蒸餾水等度洗脫,收集、濃縮、凍干獲得白色蓬松均一多糖CP-W,薏苡仁多糖熱水浸提收率為6.31%。
對(duì)CP-W的理化性質(zhì)進(jìn)行初步研究,利用CP-W在水、乙醇、三氯甲烷、丙酮中的溶解情況判斷其溶解度[6];通過(guò)苯酚-硫酸比色法[7]測(cè)定CP-W的總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù);菲林反應(yīng)、α-萘酚反應(yīng)、碘化反應(yīng)和FeCl3反應(yīng)用于驗(yàn)證CP-W的性質(zhì)[6]。
取CP-W(20 mg)在110 ℃下用三氟乙酸(12 mL,2 mol/L)水解3 h,稱取10 mg鹽酸羥胺、8 mg肌醇六乙酰酯、0.6 mL吡啶、1 mL醋酸酐與10 mg完全酸水解樣品進(jìn)行反應(yīng),取1.0 g肌醇、1.5 g鹽酸羥胺、15 mL醋酸酐、1 mL吡啶,參考文獻(xiàn)方法制備肌醇六乙酰酯,將其作為內(nèi)標(biāo)[8]。取10 mg每種單糖對(duì)照品以制備其相應(yīng)衍生物。氣相色譜操作條件如下:進(jìn)樣口溫度為250 ℃,檢測(cè)器溫度350 ℃,程序升溫:120 ℃保持3 min,以8 ℃/min的升溫速率從120 ℃升溫至250 ℃,于250 ℃維持10 min。
大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后,隨機(jī)分為對(duì)照組(=7)、模型組(=7)和薏苡仁多糖CP-W組(=7)。對(duì)照組給予正常飼料(AIN-76A純化飼料),模型組和CP-W組采用高脂低蛋白飼料(氯化膽堿0.2%、蛋氨酸0.3%、淀粉15%、蔗糖50%、纖維素5%、酪蛋白20%、玉米油5%、多礦3.5%、多維1%),每日下午以10%體質(zhì)量負(fù)重游泳至力竭,連續(xù)6周造脾氣虛證大鼠模型。按毛色、體質(zhì)量消瘦、自主活動(dòng)等指標(biāo)評(píng)分[9-10],評(píng)價(jià)模型。造模成功后[11],給藥劑量參照《中國(guó)藥典》2020年版劑量,CP-W組大鼠ig給予CP-W,劑量為0.911 3 g/(kg·d),每天1次,持續(xù)2周,實(shí)驗(yàn)期間自由飲水。對(duì)照組和模型組大鼠給予相同體積的生理鹽水。
大鼠連續(xù)正常飼養(yǎng)2周,解剖前12 h禁食不禁水,麻醉后下腔靜脈取血,室溫靜置30 min,在4000 r/min離心15 min,獲得血清,將采集的血清置于–80 ℃冰箱保存待用。
所有處理好、待分析血清樣品各移取50 μL,渦旋震蕩,制成質(zhì)量控制(QC)樣本。
2.7.1 色譜條件 Halo-C18色譜柱(100 mm×2.1 mm,2.7 μm,美國(guó)AMT公司),體積流量為0.30 mL/min,柱溫為25 ℃,進(jìn)樣量為5 μL,流動(dòng)相為含0.05%甲酸的水溶液(A)-含0.05%甲酸的乙腈溶液(B);梯度洗脫:0~10 min,10%~65% B;10~20 min,65%~100% B;20~30 min,100% B。
2.7.2 質(zhì)譜條件 采用ESI源,用正離子采集模式,干燥氣溫度和干燥氣流量分別設(shè)置為350 ℃和10 mL/min,毛細(xì)管電壓設(shè)置為4000 V,霧化器壓力設(shè)置為241.325 kPa,碎裂電壓為120 V。全掃描方式,質(zhì)量掃描范圍/100~1000。
2.7.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析 將獲得的質(zhì)譜數(shù)據(jù)(.raw格式)導(dǎo)入R語(yǔ)言軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)校正。校正后的數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA-P 11.5軟件(Umetrics公司,瑞典)進(jìn)行主成分分析(principal component analysis,PCA)和偏最小二乘判別分析(partial least-squares discrimination analysis,PLS-DA)。將變量重要性投影值(variable importance in projection,VIP)>1且值<0.05、FC(fold change)值≥2的變量視為潛在的差異代謝物,通過(guò)人類(lèi)代謝組數(shù)據(jù)庫(kù)(human metabolome database,HMDB)和京都基因與基因組百科全書(shū)(Kyoto encylopaedia of genes and genomes,KEGG)對(duì)得到的差異代謝物進(jìn)行鑒別。共鑒定出12個(gè)差異代謝物。
由圖1可見(jiàn),經(jīng)蒸餾水和NaCl溶液梯度洗脫后,薏苡仁粗多糖分離得到2個(gè)主要組分,分別是蒸餾水洗脫組分CP-W和0.3 mol/L NaCl溶液洗脫組分CP-A,為了將高純度的多糖用于單糖組成分析和活性評(píng)價(jià),通過(guò)Sephadex G-75凝膠色譜柱進(jìn)一步純化保留時(shí)間和峰形穩(wěn)定的水洗脫液,以獲得純多糖(圖2),經(jīng)SephadexG-75凝膠色譜柱純化的多糖流出曲線呈單一峰,說(shuō)明CP-W是相對(duì)分子質(zhì)量分布均一的多糖組分。
圖1 DEAE-52纖維素離子交換柱上CP的洗脫曲線
圖2 CP-W在Sephadex G-75柱上的洗脫曲線
CP-W為白色粉末,無(wú)臭,松散易溶于水,難溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑。菲林反應(yīng)、Molish反應(yīng)、碘呈色反應(yīng)和FeCl3反應(yīng)的結(jié)果表明,CP-W由可還原性多糖組成,CP-W的總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為97.32%。
對(duì)含有-葡萄糖、-半乳糖、-鼠李糖、-阿拉伯糖、-木糖、-甘露糖、-海藻糖的標(biāo)準(zhǔn)單糖混合樣品進(jìn)行GC分析,得到各標(biāo)準(zhǔn)單糖的保留時(shí)間,并對(duì)其定性,結(jié)果見(jiàn)圖3。根據(jù)混和標(biāo)準(zhǔn)品各單糖的保留時(shí)間,由GC分析可知CP-W由5種單糖組成,由峰面積歸一化法計(jì)算其單糖組成比例為鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖為0.4∶0.3∶1.1∶97.7∶0.5。
1-鼠李糖 2-阿拉伯糖 3-巖藻糖 4-木糖 5-甘露醇 6-葡萄糖 7-半乳糖
將血清樣本處理后進(jìn)行正離子模式全掃描,樣品總離子流圖如圖4所示。
血清樣本在分析過(guò)程中共運(yùn)行6個(gè)QC樣本,將獲得的QC數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理后進(jìn)行PCA分析,結(jié)果見(jiàn)圖5,正離子模式下QC樣本明顯聚集,證明此條件下儀器穩(wěn)定,數(shù)據(jù)質(zhì)量可靠。
利用無(wú)監(jiān)督的PCA分析對(duì)預(yù)處理后的模型組、對(duì)照組、CP-W組之間的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,結(jié)果見(jiàn)圖6-a,圖中模型組與對(duì)照組、模型組與CP-W組明顯分離,表明大鼠血清代謝產(chǎn)物具有差異,PLS-DA分析中發(fā)現(xiàn),模型組大鼠血清代謝物與對(duì)照組存在顯著差異,CP-W組大鼠血清代謝物與模型組存在顯著差異。
圖4 對(duì)照組、模型組、CP-W組大鼠血清總離子流圖
圖5 大鼠血清代謝組學(xué)數(shù)據(jù)PCA圖
按照代謝物載荷圖(圖7)中距原點(diǎn)越遠(yuǎn)對(duì)分組差異貢獻(xiàn)(VIP)越大原則,篩選得到VIP>1的代謝物,結(jié)合代謝物峰面積的獨(dú)立樣本檢驗(yàn),確定具有顯著差異的血清代謝物,根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量和質(zhì)譜圖初步鑒定出潛在的生物標(biāo)志物,這些篩選后的生物標(biāo)志物在S-Plot中用紅色標(biāo)記。最終在血清樣本中鑒定出12個(gè)潛在的生物標(biāo)志物,結(jié)果見(jiàn)表1。此外,根據(jù)篩選出的12個(gè)潛在生物標(biāo)志物的相對(duì)豐度構(gòu)建熱圖來(lái)直觀地顯示3組之間的差異,見(jiàn)圖8。
圖6 對(duì)照組、模型組、CP-W組PCA圖(a) 和PLS-DA散點(diǎn)圖(b)
圖7 PLS-DA的S-Plot圖
本研究利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),從代謝組學(xué)角度闡明薏苡仁多糖對(duì)脾氣虛證的調(diào)節(jié)作用,發(fā)現(xiàn)干預(yù)后-棕櫚酰肉堿(-palmitoylcarnitine)、二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid)、睪酮(testosterone)等5種代謝物上調(diào),18∶3 (6,9,12)-溶血磷脂酰膽堿 [18∶3(6,9,12)-lysophosphatidylcholine]、18∶4-磷脂酰膽堿(18∶4-phosphatidyl choline)、18∶0-膽甾醇酯(18∶0-cholesteryl ester)、d18∶1/9-18∶1-神經(jīng)酰胺(d18∶1/9-18∶1-ceramide)等7種代謝物下調(diào)(圖8)。提示脾氣虛證大鼠體內(nèi)能量、脂質(zhì)、激素代謝紊亂。
表1 血清樣本差異代謝物
肉堿是一種在肝臟、腎臟和大腦中合成的類(lèi)維生素化合物,是動(dòng)物脂肪酸代謝的一個(gè)重要因素,主要參與體內(nèi)脂肪酸的氧化過(guò)程。長(zhǎng)鏈脂肪酸與肉堿結(jié)合生成?;鈮A并轉(zhuǎn)移到線粒體[12],在酶的作用下,長(zhǎng)鏈脂肪酸與肉堿結(jié)合發(fā)生β-氧化生成ATP,提供物質(zhì)代謝所需的能量[13-14]。脾氣虛癥大鼠的L-棕櫚酰肉堿含量顯著低于正常大鼠,提示體內(nèi)脂肪酸β-氧化活性降低,線粒體正常供能發(fā)生障礙。膽堿一種對(duì)所有細(xì)胞正常功能都至關(guān)重要的成分,研究報(bào)道溶血磷脂酰膽堿能夠通過(guò)促進(jìn)氧化應(yīng)激,抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)和胰島素介導(dǎo)的葡萄糖代謝,抑制Na+-K+-ATP酶的活性而引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能紊亂[15],薏苡仁多糖CP-W干預(yù)后,溶血磷脂酰膽堿、磷脂酰膽堿下調(diào),提示薏苡仁多糖CP-W可以調(diào)節(jié)體內(nèi)能量代謝改善脾氣虛證引起的代謝紊亂。
圖8 對(duì)照組、模型組和CP-W組之間12種內(nèi)源性差異代謝物的熱圖
鞘磷脂是含鞘氨醇或二氫鞘氨醇的磷脂,是細(xì)胞膜的重要組成成分[16],具有一定調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用[17]。磷脂與肉堿都是參與脂肪代謝的重要物質(zhì),其水平降低與脂肪代謝紊亂有關(guān)。持續(xù)磷脂與肉堿的缺乏會(huì)加重脂肪代謝的紊亂[18]。薏苡仁多糖干預(yù)后鞘磷脂回調(diào),提示可以通過(guò)調(diào)節(jié)大鼠體內(nèi)改善脂質(zhì)代謝紊亂水平達(dá)到保護(hù)機(jī)體作用。二十二碳六烯酸一種長(zhǎng)鏈不飽和脂肪酸,在體內(nèi)主要參與膽固醇的氧化和運(yùn)輸,降低血液中膽固醇及其與脂肪酸酯化所形成的膽固醇酯的量[19],研究表明膳食補(bǔ)充二十二碳六烯酸可以降低小鼠血漿膽固醇[20]。脾氣虛證大鼠體內(nèi)不飽和脂肪酸減少,使之與膽固醇結(jié)合減少,從而是膽固醇代謝產(chǎn)物減少,導(dǎo)致脾氣虛證大鼠機(jī)體膽固醇代謝紊亂。薏苡仁多糖干預(yù)后二十二碳六烯酸呈現(xiàn)上調(diào)趨勢(shì),膽固醇、膽固醇酯等代謝物呈下調(diào)趨勢(shì),可能與薏苡仁多糖通過(guò)調(diào)節(jié)二十二碳六烯酸從而調(diào)節(jié)膽固醇代謝。
激素代謝:睪酮是最主要的雄激素,可以維持第二性征,維持生育能力、促進(jìn)蛋白質(zhì)的形成,而且可以影響血脂、血糖等代謝[21]。睪酮缺乏可表現(xiàn)為肌肉質(zhì)量和力量的減少、血糖和血脂代謝異常、內(nèi)臟脂肪質(zhì)量的增加、骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生、嗜睡、精力不足和情緒變化等[22],CP-W干預(yù)后脾氣虛證大鼠宏觀指標(biāo)恢復(fù)正常,提示薏苡仁多糖CP-W可以通過(guò)調(diào)劑機(jī)體激素代謝紊亂發(fā)揮作用。
綜上所述,脾氣虛證模型可造成大鼠機(jī)體正常生理功能紊亂,脾氣虛證大鼠血清代謝組結(jié)果顯示薏苡仁多糖CP-W可能通過(guò)調(diào)節(jié)能量代謝、脂質(zhì)代謝、激素代謝等途徑發(fā)揮作用,通過(guò)血清代謝組鑒定了血清中與脾氣虛證相關(guān)的12種生物標(biāo)志物。為進(jìn)一步探討脾氣虛證發(fā)病機(jī)制和推斷薏苡仁多糖治療脾虛證的作用機(jī)制,提供了科學(xué)的思路。
利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突
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Isolation, purification and monosaccharide composition analysis ofpolysaccharide and its regulatory effect on spleendeficiency syndrome
DU Zhen1, ZHANG Ling2, CAO Gui-yun3, YU Rui-xue2, CUI Yuan2, TIAN Zhen-hua2, JIANG Hai-qiang1
1. Shandong University of Traditional Chinese Medicine Innovation Research Institute, Jinan 250355, China 2. Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China 3. Shandong Hongjitang Pharmaceutical Co., Ltd., Jinan 250100, China
To isolate and purify polysaccharide from, analyze its monosaccharide composition, and explore the regulatory effect ofpolysaccharide on spleendeficiency syndrome through serum metabolomics.polysaccharide (CP) was obtained by degreasing with petroleum ether, hot water extraction, ethanol precipitation and protein removal by Sevage method. After separation and purification by DEAE-52 cellulose ion exchange column and sephadexg-75 column, the water washed polysaccharide CP-W was obtained, and the monosaccharide composition was analyzed by gas chromatography (GC); The disease model of spleendeficiency syndrome in rats was established by the combination of diet disorder (high-fat and low protein diet) and overwork. The obtained serum was analyzed by the HPLC-TOF/MS, in order to clarify the regulatory effect of CP on spleendeficiency syndrome from the perspective of metabolomics.CP-W polysaccharide was isolated and purified from, and its total carbohydrate content was 97.32%, monosaccharide composition analysis showed that CP-W polysaccharide was composed of-rhamnose,-arabinose,-xylose,-glucose and-galactose, The monosaccharide composition ratio was 0.4∶0. 3∶1.1∶97.7∶0.5. Compared with the control group, 12 different metabolites were found in the serum of the model group after CP-W administration, mainly related to lipid metabolism, energy metabolism and hormone metabolism.CP could improve the physiological characteristics of spleendeficiency syndrome model. The results of serum metabolomics show that CP can regulate the disorder of lipid metabolism, energy metabolism, hormone metabolism and other abnormalities in rats with spleendeficiency syndrome.
; polysaccharide; monosaccharide composition analysis; spleendeficiency evidence; metabolomics; lipid metabolism; energy metabolism; hormone metabolism
R284.1
A
0253 - 2670(2023)06 - 1736 - 07
10.7501/j.issn.0253-2670.2023.06.005
2022-09-05
國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃“973”課題(2013CB531803);山東省青創(chuàng)人才引育計(jì)劃
杜 鎮(zhèn)(1997—),女,在讀碩士研究生,研究方向?yàn)橹兴幖疤烊凰幬锘瘜W(xué)成分。Tel: 17860503757 E-mail: dz03210614@163.com
蔣海強(qiáng),教授,研究方向?yàn)橹兴幖皬?fù)方活性成分與質(zhì)量控制。Tel: 15966050664 E-mail: jhq12723@163.com
[責(zé)任編輯 王文倩]