李文娟，何先林，趙嬋娟，鄢行安，陳亞強，何航，向邦全，廖勤豐

（重慶三峽職業(yè)學(xué)院動物科技學(xué)院 重慶 404155）

口蹄疫（foot and mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒感染引起的一種急性、熱性、接觸性傳染病，主要危害偶蹄獸，常在豬群中發(fā)生大范圍流行，口蹄疫大流行均會對畜牧業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[1]。目前，接種疫苗是控制口蹄疫流行最有效的方法，我國采用強制免疫口蹄疫疫苗的方式對該病進(jìn)行控制。但是，多種原因造成口蹄疫疫苗的臨床免疫效果并不理想，急需開發(fā)增強疫苗免疫效果的藥物。諸多研究報道表明，藥用植物多糖具有免疫增強功能，對機(jī)體的特異性和非特異性免疫均有顯著的增強作用，因多糖易于提取純化，且無毒副作用、使用安全等特點，已成為疫苗佐劑研究的一個熱點[2-4]。本試驗通過3 組復(fù)方多糖配合O 型口蹄疫疫苗免疫小鼠，通過測定FMDV 特異性IgG 水平，和細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-6、TNF-α 水平觀察這3 種復(fù)方多糖對口蹄疫疫苗免疫反應(yīng)的影響，旨在為開發(fā)復(fù)方多糖類免疫增強劑提供技術(shù)資料。

1 材料

1.1 試驗動物

4～7 周齡健康ICR 小鼠36 只，體重18～22g，購自湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司，在動物房飼養(yǎng)1 周后，無異常即可進(jìn)行試驗。

1.2 主要藥物及試劑

黃芪多糖、白術(shù)多糖、黨參多糖、淫羊藿多糖、山藥多糖，何首烏多糖，購于西安雅圖生物科技有限公司；豬口蹄疫O 型滅活疫苗購自中牧實業(yè)股份有限公司；小鼠特異性抗體IgG 及IFN-γ、IL-2、IL-6、FMDV-O IgG、TNF-α ELISA 檢測試劑盒，均購自廈門慧嘉生物科技有限公司。

2 方法

2.1 試驗動物分組及免疫

將小鼠隨機(jī)分成4 組，分別為疫苗（FMDV）組、疫苗+黃芪多糖+白術(shù)多糖（APS+PAMK+FMDV）組，疫苗+黨參多糖+山藥多糖（PPS+RDP+FMDV）組，疫苗+淫羊藿多糖+何首烏多糖（EPS+PPM+FMDV）組、每組9 只小鼠。按表1 進(jìn)行處理.試驗用多糖溶于去離子水中，灌胃給藥，體積0.20mL/只；疫苗采用腹股溝皮下注射，2 次免疫后14d 檢測小鼠免疫反應(yīng)的水平。

表1 動物試驗分組及免疫方法表

2.2 血液采集及免疫因子檢測

第二次免疫后14d，小鼠眼眶采血，分離血清，通過ELISA 檢測FMDV 特異性IgG、IFN-γ、IL-2、IL-6、TNF-α 水平。

2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

使用SPSS 22.0 軟件對試驗結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同復(fù)方多糖對受免小鼠血清IgG 含量的影響

由圖1 可知，（APS+PAMK+FMDV）組和（CPPS+RDP+FMDV）組IgG 含量顯著高于FMDV 組（P＜0.05），（APS+PAMK+FMDV）組IgG含量顯著高于（CPPS+RDP+FMDV）組（P＜0.05）；（EPS+PPM+FMDV）組IgG 含量與FMDV 組比較差異不顯著；說明(APS+PAMK）和（PPS+RDP）復(fù)方多糖均能有效提高手面小鼠血清IgG 含量。

圖1 復(fù)方多糖對血清中IgG 抗體水平的影響

3.2 不同復(fù)方多糖對受免小鼠血清IL-2、IL-6、TNF-α及IFN-γ 含量的影響

由圖2 可知，（APS+PAMK+FMDV）組和（CPPS+RDP+FMDV）組及（EPS+PPM+FMDV）組小鼠血清中IL-2、IL-6、TNF-α 的含量顯著高于FMDV 組（P＜0.05），（APS+PAMK+FMDV）組小鼠血清中IL-2、IL-6、TNF-α 的水平顯著高于其他復(fù)方多糖組（P＜0.05）；(APS+PAMK+FMDV）組和（EPS+PPM+FMDV）組小鼠血清中IFN-γ水平顯著高于FMDV 組（P＜0.05）；（CPPS+RDP+FMDV）組較FMDV組小鼠血清中IFN-γ 水平差異不顯著；說明(APS+PAMK）、（PPS+RDP）和（EPS+PPM）復(fù)方多糖不同程度的提高受免小鼠血清中IL-2、IL-6、TNF-α 及IFN-γ 含量的含量，其中（APS+PAMK）復(fù)方多糖效果最佳。

圖2 復(fù)方多糖對血清中IL-2、IL-6、TNF-α 及IFN-γ 含量的影響

4 討論

多糖又稱多聚糖，是由醛糖或酮糖通過糖苷鍵連接起來的高聚物，分子量為數(shù)萬至數(shù)百萬。多糖是生物體內(nèi)普遍存在的生物大分子，免疫調(diào)節(jié)是其最重要和最主要的生物活性作用[5,6]。近年來，活性多糖生物功能的報道主要包括免疫功能、抗病毒、抗菌、抗寄生蟲、抗腫瘤、抗炎、抗衰老、抗輻射、降低血脂及改善動物生產(chǎn)性能等一系列作用[7]。

中藥多糖，作為佐劑很好地提高了某些疫苗的免疫效果；作為生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑，不僅促進(jìn)多種免疫細(xì)胞的增殖與分化，還促進(jìn)細(xì)胞因子的生成。在免疫應(yīng)答過程中，細(xì)胞因子對于細(xì)胞間相互作用也有重要的調(diào)節(jié)功能[8,9]。本試驗通過口服3 種復(fù)方多糖配合FMDV疫苗免疫小鼠，研究其對FMDV 疫苗免疫反應(yīng)的影響。結(jié)果表明，受試的3 種復(fù)方多糖均能不同程度地提高小鼠血清中的特異性IgG 水平；顯著增強小鼠血清中IL-2、IL-6、IFN-γ 和TNF-α 的水平，表明受試的3 種復(fù)方中藥多糖能夠不同程度增強疫苗的免疫反應(yīng)，但這4 種多糖增強免疫反應(yīng)的具體機(jī)理尚需要進(jìn)一步證實?！?/p>