陳祎,楊太旺,吳劍蘭,陳莉 （.江西省九江市第一人民醫(yī)院,江西 九江 33000;.廣東云浮中醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院,廣東 云浮 57499;3.江西省九江市中醫(yī)醫(yī)院,江西 九江 33900）

姜黃素（curcumin，Cur）是一種多酚類天然活性物質(zhì)，主要存在于姜黃根狀莖中[1]。現(xiàn)代藥理研究表明，姜黃素具有抗炎[2]、抗氧化[3]、抗腫瘤[4-5]及治療神經(jīng)性疾病等多種功效，具有良好的臨床應(yīng)用前景。但因其水溶性極差、容易發(fā)生降解等因素，降低了其在人體中的生物利用度，使其使用范圍受限，無(wú)法廣泛應(yīng)用于臨床[6]，本研究對(duì)姜黃素納米脂質(zhì)體（curcumin nanoliposomes，Cur-np）的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化，采用薄膜分散法制備Cur-np，以載藥量（Drug loading efficiency，DL）及包封率（Entrapment Efficiency，EE）為主要指標(biāo)對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，利用單因素考察和星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法對(duì)制備工藝進(jìn)行優(yōu)化，以期改善姜黃素的水溶性，提高生物利用度，有效擴(kuò)大其臨床應(yīng)用范圍。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 姜黃素（上海阿拉丁，純度＞98%）、卵磷脂（Avanti Polar Lipids公司，純度95%）、膽固醇、乙醚、無(wú)水乙醇、磷酸緩沖鹽溶液（上海博升）、微孔濾膜（德國(guó)CNW公司）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮，RE-2000A）、pH計(jì)（上海儀電，PHS-3C）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 HPLC法測(cè)定樣品中姜黃素的含量 色譜條件為：Kromasii C18柱，MDI檢測(cè)器；流動(dòng)相：甲醇∶水（含4%冰乙酸）=（68∶32）；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為 428nm；柱溫T-30℃；進(jìn)樣量20μL。

1.2.2 薄膜分散法制備Cur-np 精密稱取卵磷脂0.3002g和膽固醇0.1007g于梨形瓶中，加入20mL乙醚，振搖，再加入姜黃素?zé)o水乙醇溶液5mL，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上30℃蒸干成膜，然后加入磷酸緩沖鹽溶液40mL，旋轉(zhuǎn)20min使膜溶解，放置3h使其充分水合，超聲3min，過(guò)0.45μm濾膜，即得Cur-np。

1.2.3 Cur-np包封率（EE）及載藥量（DL）的測(cè)定 精密量取Cur-np樣品2mL置于離心管中，于4500r·min-1條件下離心15min，吸取上清液超聲破乳后，用無(wú)水乙醇定容，搖勻測(cè)定吸光度定為A包封，計(jì)算包封Cur的質(zhì)量記為m包封；從同一樣品中另取Cur-np樣品2mL超聲破乳后，用無(wú)水乙醇定容，搖勻測(cè)定吸光度定為A總，計(jì)算加入Cur的總質(zhì)量記為m總。按如下公式計(jì)算：EE（%）=m包封/m總×100%，DL（%）=m包封/mCur-np×100%。mCur-np是Cur-np的總質(zhì)量。

2 結(jié)果

2.1 單因素考察 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇對(duì)包封率、載藥量影響較大的3個(gè)因素：PBS濃度、PBS的pH值和姜黃素的用量。進(jìn)行3因素5水平正交試驗(yàn)以優(yōu)化處方，結(jié)果顯示各因素對(duì)包封率、載藥量的影響：A＞C＞B；當(dāng)PBS濃度為30mmol·L-1時(shí)，包封率、載藥量較大；當(dāng)PBS的pH值為5.5時(shí)，包封率、載藥量較大；當(dāng)姜黃素用量為1mg時(shí)，包封率、載藥量較大。見表1、表2。

表1 正交設(shè)計(jì)的因素和水平

表2 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)的結(jié)果

2.2 星點(diǎn)設(shè)計(jì)試驗(yàn) 根據(jù)單因素考察結(jié)果，以PBS濃度（A）、PBS的pH值（B）和姜黃素的用量（C）為考察因素，采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)優(yōu)化顯微常數(shù)測(cè)定條件，對(duì)其處方作進(jìn)一步優(yōu)化（水平取值為0、±1、±λ）。各因素水平見表3，結(jié)果見表4。

表3 星點(diǎn)設(shè)計(jì)因素水平表

表4 星點(diǎn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)安排及結(jié)果

2.3 回歸系數(shù)的顯著性檢驗(yàn) 對(duì)星點(diǎn)設(shè)計(jì)結(jié)果進(jìn)行擬合分析，顯示：模型Y1中A、B、AB、AC、A2、B2極顯著（P＜0.001），C、BC顯著（P＜0.05），其他項(xiàng)不顯著；模型Y2中A、C、BC、B2極顯著（P＜0.001），B、AB、AC、C2顯著（P＜0.05），其他項(xiàng)不顯著，見表5。

表5 回歸系數(shù)的顯著性檢驗(yàn)

2.4 最優(yōu)處方驗(yàn)證試驗(yàn) 依據(jù)選定的最優(yōu)處方制備3批Cur-np樣本，測(cè)定其EE、DL，結(jié)果顯示EE平均在93%以上、DL達(dá)7%以上，均較高；3批Cur-np樣本EE、DL的實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值之間的偏差均＜2%，表明本研究設(shè)計(jì)預(yù)測(cè)良好，工藝可復(fù)制性較好，制備工藝穩(wěn)定性高，見表6。

表6 最優(yōu)處方的驗(yàn)證試驗(yàn)

3 討論

由于Cur在水中的溶解性較差，使藥物的生物利用度受到限制，其次，肝臟的第一關(guān)卡效應(yīng)使其發(fā)揮作用的藥量減少，導(dǎo)致Cur的片劑和膠囊等常用制劑的生物利用度進(jìn)一步降低[7]；本研究采用薄膜分散法制備姜黃素納米脂質(zhì)體，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)篩選出影響較大的3個(gè)因素：姜黃素用量、PBS的pH值、PBS濃度，并進(jìn)一步以Cur載藥量及包封率為指標(biāo)，通過(guò)3因素5水平的星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化得到最終處方。星點(diǎn)設(shè)計(jì)所得到的最佳制備處方為：姜黃素用量為1mg、PBS的pH值為5.5、PBS濃度為30mmol·L-1，處方驗(yàn)證試驗(yàn)證實(shí)，包封率在93%以上、載藥量達(dá)7%，均較高，且3批Cur-np樣本EE、DL的實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值之間的偏差均＜2%。表明本研究制備的Cur-np可改善Cur水溶性和化學(xué)穩(wěn)定性，延緩Cur在生物體內(nèi)的釋放速度，提高生物利用度，可為有效擴(kuò)大其臨床應(yīng)用范圍提供參考依據(jù)。同時(shí)多項(xiàng)研究顯示，Cur納米制劑可大幅度改善Cur的溶解性、提升Cur的生物利用度[8]，與本研究結(jié)果具有一定的一致性。

綜上所述，Cur-np的最優(yōu)處方是姜黃素用量為1mg、PBS的pH值為5.5、PBS濃度為30mmol·L-1，根據(jù)優(yōu)化處方工藝制備的Cur-np包封率和載藥量均較高。