袁曉娟 ，吳冬梅，金 鴻，倪定琴，姚 曼，余 瓊，劉銘英

1 貴州省黔東南州動物疫病預(yù)防控制中心，貴州凱里 556000 2 貴州省凱里市動物疫病預(yù)防控制中心，貴州凱里 556600

0 引言

牛傳染病嚴(yán)重威脅養(yǎng)牛業(yè)的健康發(fā)展、公共衛(wèi)生食品安全和人類健康，養(yǎng)殖場必須做好奶牛的免疫接種和防控工作。常見的牛呼吸道類疾病有牛病毒性腹瀉（Bovine Viral Diarrhoea/Mucosal disease，BVD）、傳染性鼻氣管炎（Infectious Bovine rhinotracheitis，IBR）、牛呼吸道合胞體?。˙ovine Respiratory Syncytia，BRS）、牛支原體。臨床癥狀主要有流涕、咳嗽、精神食欲不振、呼吸困難等。單一病原體感染會引起其他病原體的混合感染，由此給牛場防疫帶來巨大挑戰(zhàn)。貴州省凱里市A奶牛場作為黔東南州唯一的規(guī)模奶牛場，本文對其2021—2022年牛呼吸道疫病的感染情況進(jìn)行了初步了解，為該場有效防控上述疾病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

2021—2022年從凱里市A奶牛場采集牛血清142 份，其中犢牛33 份，成年牛109 份。常溫離心保存于-20 ℃冰箱備用。所采牛群均未免疫接種BRSV、BVDV、IBRV、牛支原體疫苗。

1.2 試劑盒

牛呼吸道合胞體病毒IgG抗體檢測試劑盒、傳染性牛鼻氣管炎gB抗體檢測試劑盒、牛病毒性腹瀉病毒抗體檢測試劑盒，元亨IDEXX公司；牛支原體ELISA抗體檢測試劑盒，比利時(shí)Bio-X公司。

1.3 主要試驗(yàn)儀器

酶標(biāo)儀（Multiskan FC型），賽默飛世爾科技（中國）有限公司；離心機(jī)（艾本德-5418），德國艾本德股份公司；摩爾超純水機(jī)（1015a），上海摩勒科學(xué)儀器有限公司；恒溫培養(yǎng)箱（ZHWY-21B），金壇市富華儀器有限公司。

1.4 試驗(yàn)方法

本試驗(yàn)采用ELISA法進(jìn)行抗體水平檢測，根據(jù)試劑盒說明書嚴(yán)格操作。

2 結(jié)果

2.1 A奶牛場4種病原單一感染檢測結(jié)果

結(jié)果顯示，從A奶牛場采集的142 份血清中，檢出牛支原體抗體陽性48 份，陽性率33.8%；IBRV抗體陽性64 份，陽性率45.1%；BRSV抗體陽性59 份，陽性率41.5%；BVDV抗體陽性57 份，陽性率40.1%。從不同生長階段看，犢牛單一感染率為15.1%～45.5%，成年牛單一感染率為38.5%～51.4%，結(jié)果說明該奶牛場存在4 種病原體感染（表1）。

表1 A奶牛場4 種病原抗體檢測結(jié)果

2.2 A奶牛場4 種病原混合感染情況

A奶牛場存在2～4 種病原體混合感染的情況，平均感染率為9.9%～30.2%。二重平均感染率為18.3%～30.2%；以IBRV、BVDV、支原體3 種病原體混合感染為主，陽性率為19.7%；三重平均感染率為12.6%～19.7%；四重平均感染率為9.9%。提示A奶牛場存在多種病原體混合感染（表2）。

表2 A奶牛場IBRV、BRSV、BVDV、牛支原體混合感染情況

3 討論

3.1 單一病原體感染分析

近幾年我國學(xué)者在國內(nèi)多地進(jìn)行相關(guān)呼吸道疫病病原的血清學(xué)調(diào)查，但目前還未見對凱里市多種牛病，特別是呼吸道綜合征方面調(diào)查的報(bào)道。本文對凱里市IBRV、BRSV、BVDV、支原體感染4 種病原體血清學(xué)抗體檢測發(fā)現(xiàn)，A奶牛場存在4 種主要危害牛呼吸道的病原體，單一感染率為33.8%～45.1%。我國牧場BVDV感染較普遍，如江浙部分地區(qū)BVDV感染率為13.1%，且主要為BVDV-1b與BVDV-1m亞型感染[1]。新疆13 個(gè)地區(qū)養(yǎng)殖場BVDV平均陽性檢出率為22.5%～62.5%，總陽性率為40.0%[2]。姜玲玲等[3]調(diào)查貴州省部分縣牛群BVDV抗體陽性率高達(dá)45.95%。陳穎彬等[4]對河北、天津、北京等共8 個(gè)地區(qū)進(jìn)行BVDV血清抗體檢測，平均陽性率為46.95%。山東省11 個(gè)規(guī)模奶牛場BVDV抗體平均陽性率為66.3%[5]。寧夏30 個(gè)規(guī)模奶牛場不容樂觀，BVDV抗體陽性率為87.6%[6]。金一春等[7]對上海市松江區(qū)某奶牛場2016—2019年630 份血清樣品進(jìn)行IBR感染情況調(diào)查，總抗體陽性率為11.0%。曲萍等[8]對我國11 個(gè)牧區(qū)、半牧區(qū)省份的9 668 份牛血清進(jìn)行調(diào)查，IBRV個(gè)體平均陽性率為52.77%，群體陽性率連續(xù)3 年在80%以上。刁彩霞等[9]對黑龍江省農(nóng)墾地區(qū)14 個(gè)奶牛場進(jìn)行IBRV抗體檢測，IBRV血清抗體陽性率為18.64%～73.33%。李媛等[10]對我國2017—2018年西部和北部4 個(gè)省區(qū)（新疆、內(nèi)蒙古、云南、西藏）的8 832 份血清樣品進(jìn)行牛支原體調(diào)查，2017和2018年各地牛支原體血清抗體陽性率平均為8.37%、15.67%，4 省2017—2018年支原體感染率為1.99%～36.32%。張建華等[11]2008—2016年對國內(nèi)12 個(gè)地區(qū)30 個(gè)規(guī)?；膛鲞M(jìn)行牛支原體感染情況調(diào)查，血清抗體陽性率為52.31%（441/843）。目前國內(nèi)對于BRSV的血清流行病學(xué)調(diào)查研究較少，應(yīng)加強(qiáng)對此調(diào)查研究，全面分析各地區(qū)的流行情況。

唐小明等[12]對湖南省14 個(gè)市（州）74 個(gè)規(guī)模牛場進(jìn)行BVDV和IBRV血清學(xué)調(diào)查，BVDV陽性率為23.54%，IBRV陽性率為45.45%。王生梅[13]調(diào)查了2015—2019年青海省海北州牦牛336 份血清，BVDV平均感染率為11.11%～29.76%，IBRV抗體陽性率為8.89%～19.05%，呈現(xiàn)逐年遞增趨勢。王玙等[14]對甘肅省隴東南地區(qū)32 個(gè)規(guī)模牛場進(jìn)行感染情況調(diào)查，IBRV陽性率為9.17%（22/240），牛支原體陽性率為2.38%（4/168）。劉澤余等[15]對吉林省9 區(qū)325 份牛血清樣品進(jìn)行呼吸道疾病調(diào)查，其中BVDV陽性率為74.77%，IBRV陽性率為57.23%，BRSV陽性率為27.69%。蘇姣秀等[16]對廣西7 市共27 家奶牛場進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，BVDV抗體陽性率為36.52%（168/460）、IBRV為26.74%（123/460），BRSV為54.44%（49/90）。

上述血清流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果說明：我國不同地區(qū)牛群與牛場（肉牛場、奶牛場）普遍存在IBRV、BVDV、BRSV和支原體感染，只是嚴(yán)重程度不同，這與養(yǎng)殖模式與飼養(yǎng)管理水平高低有很大關(guān)系，如規(guī)模飼養(yǎng)感染率高于散養(yǎng)的感染率[17]。以上結(jié)果與本文結(jié)果有差別，原因可能是采樣時(shí)間與采樣范圍不同所致。

3.2 混合病原體感染分析

BVDV、IBRV、BRSV、牛支原體等都是引起牛呼吸道綜合征的病原體，BVDV和 IBRV是免疫抑制性疾病，可以使機(jī)體免疫力下降，誘發(fā)其他疾病，嚴(yán)重可致死亡，混合感染時(shí)臨床癥狀更明顯。曲萍等[8]對我國11 個(gè)牧區(qū)、半牧區(qū)省份的9 668 份牛血清進(jìn)行IBRV和BVDV檢測，兩者在2014—2016年混合感染率為38.31%～43.59%。畢玉彧等[18]調(diào)查了山東、河北、甘肅、黑龍江4 省28 家規(guī)?；膛?，發(fā)現(xiàn)存在IBRV、BVDV和BRSV多種病原，2～3 種病原體的混合感染率為7.3%～30.5%。韓林梅等[19]調(diào)查了2016—2017年廣西6 市2 400 份牛血清，IBRV與牛支原體的雙重感染率為12.21%（293/2 400）。劉澤余等[15]調(diào)查了325 份牛血清樣品，BVDV與IBRV混合感染率為31.69%，BVDV與BRSV混合感染率為9.54%，IBRV與BRSV混合感染率為1.85%，IBRV、BVDV與BRSV混合感染率為17.23%。目前國內(nèi)報(bào)道支原體與IBRV、BVDV、BRSV病原混合感染的資料較少，本次調(diào)查首次統(tǒng)計(jì)出貴州省支原體與IBRV、BVDV、BRSV病原體混合感染的情況，為貴州省規(guī)模牛場對牛呼吸道疫病的防控提供了理論依據(jù)。當(dāng)牛感染BVDV后機(jī)體免疫力下降，更易感染IBRV，又因BVDV可導(dǎo)致免疫抑制、持續(xù)性感染與不定期排毒，并與其他呼吸道病原體具有協(xié)同效應(yīng)[20]，極可能引起其他病原體的繼發(fā)感染與混合感染，也是本研究中IBRV、BVDV、BRSV和支原體存在多重混合感染的原因之一。

4 結(jié)論

本調(diào)查表明，凱里市A奶牛場存在IBRV、BVDV、BRSV和支原體流行，多病原體混合感染情況較普遍，雖然感染率不高，但其作為黔東南州唯一的奶源基地，也要加強(qiáng)防控，杜絕潛在隱患。建議相關(guān)部門：一是嚴(yán)格檢疫、避免引進(jìn)隱性感染牛；二是要持續(xù)監(jiān)測IBRV、BVDV、BRSV和支原體的感染情況，清除疑似病牛；三是提高奶牛場飼養(yǎng)管理水平和獸醫(yī)對呼吸道疾病的辨別能力。