黃尚校 黃劍鋒 莫敦昌

廣西南寧市第二人民醫(yī)院放療科 530031

食管癌多發(fā)于食管上皮細(xì)胞，常表現(xiàn)出腹痛、背痛及進(jìn)行性吞咽困難，死亡率較高[1]。食管癌早期癥狀較不明顯，確診時(shí)多為中晚期，外科手術(shù)療效不佳，因此放射治療逐漸成為中晚期食管癌的主要治療手段[2]。但對(duì)食管癌放療療效進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)常規(guī)放療后仍有較大概率出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)，且相同腫瘤類(lèi)型、TNM分期的食管癌患者放療療效仍有差異，同時(shí)，增加放療劑量對(duì)治療結(jié)局的改善程度有限，因此需綜合考慮不同患者放療敏感性差異，以制定并及時(shí)調(diào)整個(gè)體化放療方案[3-4]。腫瘤的發(fā)生與疾病進(jìn)展、血管生成、基因突變有直接聯(lián)系，PDZ 結(jié)合激酶/T-LAK 細(xì)胞來(lái)源的蛋白激酶(PBK/TOPK)在膀胱癌等惡性腫瘤中表達(dá)異常升高[5]，且目前對(duì)于PBK/TOPK mRNA與食管癌之間的關(guān)系研究較少?；诖?，本研究創(chuàng)新性對(duì)食管癌放療不同敏感性患者PBK/TOPK mRNA表達(dá)進(jìn)行分析，并對(duì)食管癌放療敏感性的影響因素進(jìn)行探究，期望可以為食管癌的精準(zhǔn)治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析我院2019年10月—2021年10月收治的94例食管癌患者的臨床資料，所有患者入院后均行放療治療，依據(jù)患者短期療效分為放療敏感組(n=61)與放療抵抗組(n=33)。研究開(kāi)始前獲院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)符合《中國(guó)早期食管癌篩查及內(nèi)鏡診治專(zhuān)家共識(shí)意見(jiàn)(2014年，北京)》中食管癌標(biāo)準(zhǔn)[6]，且經(jīng)穿刺活檢證實(shí)；(2)年齡18～85歲；(3)均行放療治療，且為首次放療治療；(4)TNM分期Ⅱ～Ⅳ期；(5)預(yù)計(jì)生存時(shí)間>3個(gè)月；(6)臨床資料完整。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)未能耐受治療或治療途中退出者；(2)治療前已接受其他方式治療；(3)已出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；(4)合并其他惡性腫瘤；(5)凝血功能障礙或嚴(yán)重肝腎疾??；(6)精神疾??；(7)合并食管穿孔或全身感染。

1.4 治療方法 所有患者入院后參照《中國(guó)食管癌放射治療指南(2019年版)》[7]行放射治療。具體方案為：通過(guò)Volume Zoom CT掃描儀(美國(guó)GE公司)行CT檢查?；颊呖诜蛩徜^，以可見(jiàn)食管黏膜破壞為邊界，左右界外放1.5cm，上下界外放4.0cm，患者前2/3個(gè)療程為：2.2Gy/次，2次/d，5次/周，共4周；劑量達(dá)40Gy后縮野。上下外放3.0cm，左右外放1.0cm，患者后1/3個(gè)療程為；2Gy/次，2次/d，共2周，總劑量為60～64Gy。若放射過(guò)程中出現(xiàn)放射性食管炎給予對(duì)癥治療。

1.5 療效評(píng)估及分組方法 治療結(jié)束后參照實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)1.1版[8]分為完全緩解(病灶消失，鋇劑可以完全通過(guò))、部分緩解(可測(cè)量基線病灶直徑之和縮小≥30%)、疾病穩(wěn)定(可測(cè)量基線病灶直徑之和縮小<30%或增大<20%，食管充盈缺損顯著)、疾病進(jìn)展(可測(cè)量基線病灶長(zhǎng)徑總和較治療前增大≥20%，或有新病灶出現(xiàn))。完全緩解+部分緩解設(shè)為放療敏感組，疾病穩(wěn)定+疾病進(jìn)展設(shè)為放療抵抗組。

1.6 觀察指標(biāo) (1)收集兩組基線資料信息，包括性別、年齡、身體質(zhì)量指數(shù)、腫瘤位置、病變長(zhǎng)度、臨床分期、病理類(lèi)型、卡式(Karnofsky)功能狀態(tài)評(píng)分[9]、最大橫徑。(2)兩組患者入院后(治療前)取外周靜脈血5ml，3 300r/min離心10min，離心半徑10cm，酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)水平，試劑盒由上海邦景實(shí)業(yè)有限公司提供。(3)PBK/TOPK 治療前取癌組織，研磨成粉后以Trizol法提取細(xì)胞總RNA，試劑盒(賽默飛世爾科技公司)行RNA逆轉(zhuǎn)錄。設(shè)計(jì)PBK/TOPK引物經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增，并依據(jù)循環(huán)次數(shù)計(jì)算其mRNA表達(dá)水平。PBK/TOPK正向引物：5’-AGACCCTAAAGATCGTCCTTCTG-3’，反向引物：5’-CTGTTTTAAGTCAGCATGAGCAG-3’，以 β-actin為內(nèi)參；60℃退火30s，共40個(gè)循環(huán)，內(nèi)參β-actin上游引物序列為：5’-TGGCACCCAGCACAATGAA-3’，下游引物序列為：5’-CTAAGTCATACTCCGCCTAG AAGCA-3’，按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作，PBK/TOPK樣本重復(fù)計(jì)算3次，取平均值。

2 結(jié)果

2.1 食管癌放療敏感性的單因素分析 94例患者放療結(jié)束后完全緩解4例，部分緩解57例，疾病穩(wěn)定21例，疾病進(jìn)展12例，放療敏感共計(jì)61例，占64.89%。兩組性別、年齡、身體質(zhì)量指數(shù)、腫瘤位置、病變長(zhǎng)度、臨床分期、病理類(lèi)型、Karnofsky 功能狀態(tài)評(píng)分比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；放療抵抗組患者低分化占比顯著高于放療敏感組，最大橫徑、PBK/TOPK、VEGF水平顯著高于放療敏感組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 食管癌放療敏感性單因素分析

2.2 最大橫徑、PBK/TOPK、VEGF預(yù)測(cè)食管癌放療敏感性的ROC分析 經(jīng)ROC分析，最大橫徑≥4.371cm、PBK/TOPK≥10.282、VEGF≥212.693ng/L是預(yù)測(cè)食管癌放療敏感性的最佳截?cái)嘀?P<0.05)。見(jiàn)表2。最大橫徑、PBK/TOPK、VEGF預(yù)測(cè)食管癌放療敏感性的ROC曲線見(jiàn)圖1。

表2 最大橫徑、PBK/TOPK、VEGF預(yù)測(cè)食管癌放療敏感性ROC分析

圖1 最大橫徑、PBK/TOPK、VEGF預(yù)測(cè)食管癌放療敏感性ROC曲線

2.3 食管癌放療敏感性的多因素Logistic回歸分析 將上述單因素分析中存在差異的變量納入Logistic回歸分析模型，行量化賦值。以放療療效為因變量(有效=0，無(wú)效=1)，自變量為最大橫徑(<4.371cm=0，≥4.371cm=1)、PBK/TOPK(<10.282=0，≥10.282=1)、VEGF(<212.693ng/L=0，≥212.693ng/L=1)、低分化(否=0，是=1)。Logistic回歸分析顯示最大橫徑≥4.371cm、PBK/TOPK≥10.282、VEGF≥212.693ng/L、低分化是食管癌放療敏感性的影響因素(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 食管癌放療敏感性多因素Logistic回歸分析

3 討論

放射治療為中晚期食管癌治療的常用手段，放療手段的更新與進(jìn)步也使得強(qiáng)調(diào)放療的應(yīng)用逐漸普及[10]。強(qiáng)調(diào)放療雖靶區(qū)劑量分布均勻、放療有效率有一定增加，但整體放療效果并不盡如人意，仍有較高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，而放療敏感性差則是導(dǎo)致食管癌療效不盡如人意的重要因素[11-12]。因此，需有效預(yù)測(cè)并評(píng)估食管癌患者放療敏感性，以提升放療效果。目前尚不明確食管癌細(xì)胞放射抗拒性的具體分子學(xué)機(jī)制，但由于腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及發(fā)展均有VEGF參與[13]，且PBK/TOPK與腫瘤生物學(xué)行為有關(guān)[14]，因此本研究選取PBK/TOPK、VEGF等指標(biāo)進(jìn)行觀察。

本研究結(jié)果顯示，94例患者放療結(jié)束后完全緩解4例，部分緩解57例，疾病穩(wěn)定21例，疾病進(jìn)展12例，放療敏感共計(jì)61例，占64.89%，與陳美玲等[15]研究中放療敏感患者占比66.00%，與本研究結(jié)果相似。

本研究結(jié)果顯示，放療抵抗組患者低分化占比顯著高于放療敏感組，最大橫徑、PBK/TOPK、VEGF水平顯著高于放療敏感組，提示腫瘤最大橫徑、分化程度、PBK/TOPK、VEGF可能與食管癌放療敏感性有關(guān)，分析如下：(1)腫瘤最大橫徑、分化程度均為影響食管癌療效的因素，劉洋等[16]比較74例食管癌患者臨床資料，發(fā)現(xiàn)腫瘤最大橫徑及低分化均會(huì)影響放療敏感性，與本研究結(jié)果一致。VEGF則為血管生成旖旎，在腫瘤血管生成與腫瘤進(jìn)展中有直接參與，VEGF水平較高提示腫瘤呈持續(xù)性生長(zhǎng)狀態(tài)，因此臨床療效較差，陳美玲等[15]研究可佐證VEGF與食管癌放療敏感性的關(guān)系。(2)PBK/TOPK為癌睪丸抗原(CTA)家族成員之一，在有絲分裂過(guò)程中被磷酸化，參與紡錘體形成，還作為生長(zhǎng)因子調(diào)控激酶，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞周期進(jìn)程[17]，為腫瘤細(xì)胞提供修復(fù)應(yīng)答，損傷細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白功能，加速腫瘤細(xì)胞增殖。PBK/TOPK水平較高提示患者體內(nèi)DNA 損傷修復(fù)受損嚴(yán)重，導(dǎo)致放射敏感性受到影響，郭佳星等[18]研究表明敲低PBK/TOPK能夠增強(qiáng)結(jié)直腸癌細(xì)胞放射敏感性，可佐證本研究。

為明確食管癌放療敏感性的影響因素，筆者行ROC分析及Logistic回歸分析，證實(shí)最大橫徑≥4.371cm、PBK/TOPK≥10.282、VEGF≥212.693ng/L、低分化是食管癌放療敏感性的影響因素。同時(shí)由于本研究納入食管癌放療抵抗人數(shù)較少，且未對(duì)食管癌放療結(jié)束后不同組別患者PBK/TOPK、VEGF水平進(jìn)行測(cè)定，也未研究PBK/TOPK表達(dá)對(duì)食管癌遠(yuǎn)期生存率的影響，因此仍需擴(kuò)大樣本量行放療前后PBK/TOPK、VEGF水平檢測(cè)，以進(jìn)一步明確PBK/TOPK、VEGF與食管癌放療敏感性的關(guān)系及對(duì)食管癌遠(yuǎn)期生存率的影響。

綜上所述，食管癌放療敏感性與腫瘤最大橫徑、分化程度、PBK/TOPK、VEGF水平有關(guān)，食管癌放療抵抗患者PBK/TOPK水平顯著較高，因此需密切關(guān)注食管癌患者PBK/TOPK、VEGF表達(dá)，同時(shí)也可將PBK/TOPK、VEGF表達(dá)作為食管癌個(gè)體化放療方案制定的依據(jù)。