周倩文 朱圓圓

1 湖北省第三人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，湖北省武漢市 430000； 2 宜興市人民醫(yī)院老年科

腦梗死是一種以高發(fā)病率、高殘疾率和高死亡率為特征的急性缺血性腦血管病，也是導(dǎo)致死亡的第二大原因[1]。近年來(lái)，盡管缺血性卒中的診療有了巨大的進(jìn)步，但大部分患者的預(yù)后依然不盡人意，因此，尋找早期評(píng)估腦梗死預(yù)后的指標(biāo)是卒中領(lǐng)域研究的重點(diǎn)。microRNA(miRNA)在血清中可以穩(wěn)定存在，在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的診斷、預(yù)后評(píng)估中具有良好的潛力。近年研究顯示，miR-142在缺血再灌注小鼠模型中顯著增加[2]，并與神經(jīng)功能障礙程度密切相關(guān)，提示miR-142或可成為評(píng)估缺血性腦卒中病情和預(yù)后的外周血指標(biāo)。本研究在此基礎(chǔ)上，觀察了急性動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死患者血清miR-142的表達(dá)變化，并評(píng)估了其對(duì)腦梗死早期病情相關(guān)性及其對(duì)腦梗死預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取 2018年1月—2021年12月在湖北省第三人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院治療的首發(fā)急性腦梗死患者(腦梗死組)。入組標(biāo)準(zhǔn)：(1)首次發(fā)作，符合中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南中急性腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)CT或MRI證實(shí)為缺血性腦卒中；(2)發(fā)病時(shí)間在24～48h內(nèi)；(3)TOAST分型符合大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)既往有腦卒中、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、癲癇等神經(jīng)系統(tǒng)病史；(2)合并嚴(yán)重的肝腎功能不全、血液系統(tǒng)疾病、腫瘤、自身免疫系統(tǒng)疾病、精神疾病等；(3)存在其他原因?qū)е碌闹w功能障礙，或其他原因不能配合完成量表評(píng)分；(4)合并其他原因經(jīng)研究者判斷不宜入組。所有腦梗死患者接受腦梗死常規(guī)治療，3個(gè)月后進(jìn)行改良Rankin量表(mRS)評(píng)分，mRS≤2分的患者納入預(yù)后良好組(共125例)，mRS>2分納入預(yù)后不良組(共41例)。同時(shí)納入年齡、性別與腦梗死組患者匹配的我院健康體檢人員100例作為對(duì)照組，排除標(biāo)準(zhǔn)同上一致。本研究通過(guò)湖北省第三人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有受試者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 一般資料收集 所有受試者收集一般人口學(xué)資料，包括年齡、性別、吸煙史、飲酒史、高血壓史、糖尿病史。

1.3 血清生化指標(biāo)及miR-142測(cè)定 所有受試者入組后，于次日空腹采取黃色促凝管抽取靜脈血5ml，靜置30min后于3 000r/min離心10min，收集上清液檢測(cè)糖化血紅蛋白、空腹血糖、膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、同型半胱氨酸。取500μl血清樣品，Trizol法提取miRNA，并測(cè)定其RNA濃度。按照FastQuant RT Kit(with gDNase)試劑盒反轉(zhuǎn)錄cDNA。根據(jù)miRcute增強(qiáng)型miRNA熒光定量檢測(cè)試劑盒(SYBR Green)加樣上機(jī)檢測(cè)，以U6為內(nèi)參，采用2-ΔΔct法分析miR-142相對(duì)表達(dá)水平。

1.4 NIHSS量表和mRS量表評(píng)分 所有腦梗死患者入組后由固定的兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)生進(jìn)行NIHSS量表評(píng)定并記錄，并在90d隨訪時(shí)進(jìn)行mRS評(píng)分判斷預(yù)后。

2 結(jié)果

2.1 各組一般資料比較 腦梗死組患者男性比例、吸煙史、高血壓比例、糖尿病比例、糖化血紅蛋白、空腹血糖、甘油三酯、低密度脂蛋白、同型半胱氨酸明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，而年齡、飲酒史、膽固醇、高密度脂蛋白與對(duì)照組比較未見(jiàn)明顯差異(P>0.05)。腦梗死預(yù)后良好組年齡、高血壓比例、糖尿病比例、低密度脂蛋白和同型半胱氨酸明顯低于預(yù)后不良組。見(jiàn)表1。

表1 各組一般資料比較

2.2 腦梗死患者血清miR-142水平表達(dá)變化 腦梗死患者血清miR-142相對(duì)表達(dá)水平為5.37±1.07，對(duì)照組為2.90±1.17，腦梗死組miR-142水平明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。腦梗死預(yù)后良好組miR-142相對(duì)表達(dá)水平為4.79±0.95，預(yù)后不良組為5.91±1.14，預(yù)后良好組miR-142表達(dá)低于預(yù)后不良組(P<0.01)；差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)圖1)。

圖1 腦梗死患者血清miR-142水平表達(dá)情況

2.3 腦梗死患者血清miR-142水平與NIHSS評(píng)分相關(guān)性分析 對(duì)腦梗死患者血清miR-142水平與NIHSS評(píng)分行pearson相關(guān)性分析，結(jié)果顯示血清miR-142水平與NIHSS評(píng)分具有正相關(guān)關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)r=0.576，P<0.001，見(jiàn)圖2。

圖2 腦梗死患者血清miR-142與NIHSS評(píng)分相關(guān)性分析散點(diǎn)圖

2.4 腦梗死患者預(yù)后不良危險(xiǎn)因素的Logistics回歸分析 以腦梗死患者預(yù)后為因變量，對(duì)預(yù)后不良組和預(yù)后良好組的年齡、高血壓、糖尿病、低密度脂蛋白和同型半胱氨酸血清miR-142水平和NIHSS評(píng)分進(jìn)行Logistics回歸分析，結(jié)果顯示，miR-142、低密度脂蛋白和NIHSS評(píng)分為腦梗死預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表2。

表2 腦梗死患者預(yù)后不良危險(xiǎn)因素Logistics回歸分析

2.5 miR-142對(duì)腦梗死診斷和預(yù)后的評(píng)估價(jià)值 分別繪制miR-142應(yīng)用于腦梗死診斷和預(yù)后不良預(yù)測(cè)的ROC曲線，結(jié)果顯示，miR-142在腦梗死診斷的ROC曲線下面積為0.849，敏感性82.00%，特異性74.29%。miR-142在腦梗死預(yù)后預(yù)測(cè)的ROC曲線下面積為0.771，敏感性73.17%，特異性70.40%，而當(dāng)聯(lián)合低密度脂蛋白和NIHSS評(píng)分后，ROC曲線下面積為0.858，敏感性82.93%，特異性76.80%，見(jiàn)圖3。

圖3 miR-142在腦梗死診斷和預(yù)后評(píng)估中ROC曲線分析

3 討論

腦梗死是腦卒中的常見(jiàn)類型之一，其中動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死占約60%，是人類致殘和死亡的主要原因之一[3]。目前臨床上腦梗死的診斷依據(jù)于客觀的影像學(xué)數(shù)據(jù)及顯著的臨床特征，但預(yù)后因個(gè)體化差異仍局限于主觀的臨床經(jīng)驗(yàn)[4]。miRNAs是真核生物中具有調(diào)控基因表達(dá)作用的一類內(nèi)源性非編碼RNA，可參與調(diào)節(jié)各種生理病理過(guò)程，甚至在疾病的早期診斷、治療和預(yù)后評(píng)估中都發(fā)揮著重要作用[5]。既往大量研究顯示，miR-142可參與調(diào)控炎癥反應(yīng)及免疫細(xì)胞功能，而卒中后炎癥反應(yīng)程度已被廣泛認(rèn)為是影響腦梗死預(yù)后的核心要素[6-7]。盡管諸多動(dòng)物和細(xì)胞層面的證據(jù)表明miR-142在參與了腦缺血和再灌注的調(diào)控[8-9]，但miR-142在腦梗死患者中如何變化，能否作為腦梗死病情和預(yù)后評(píng)估的有效生物學(xué)標(biāo)記物，目前尚未明確。在此基礎(chǔ)上，本研究通過(guò)比對(duì)腦梗死患者與健康人群血清miR-142的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)miR-142在AIS患者血清中表達(dá)升高，并且在不同預(yù)后分組中，亦發(fā)現(xiàn)了miR-142存在表達(dá)差異，高度提示了血清miR-142或可應(yīng)用于早期評(píng)估腦梗死患者的預(yù)后。

影響腦梗死預(yù)后的因素眾多，在本研究中，盡管一般資料的收集仍不全面，但腦梗死組與對(duì)照組間的差異因素及不同預(yù)后腦梗死患者間的差異因素均在既往研究中獲報(bào)道[10-11]，而由于樣本量和病例組成的差異，不同研究中呈現(xiàn)的結(jié)果也具有一定的差別。不僅如此，本研究在發(fā)現(xiàn)血清miR-142與腦梗死預(yù)后存在對(duì)應(yīng)關(guān)系的基礎(chǔ)上，分析了miR-142與NIHSS評(píng)分的相關(guān)性，高度提示了miR-142與神經(jīng)功能缺損程度密切相關(guān)，可用于腦梗死早期的病情評(píng)估。隨后跟進(jìn)的Logistics回歸對(duì)組間差異因素進(jìn)行了進(jìn)一步評(píng)估，結(jié)果顯示血清miR-142、低密度脂蛋白和入院的NIHSS評(píng)分均為腦梗死不良預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)合既往文獻(xiàn)報(bào)道，推測(cè)miR-142可能通過(guò)調(diào)控卒中后的炎癥反應(yīng)及免疫細(xì)胞功能從而影響了預(yù)后結(jié)局，這也需要?jiǎng)游锖图?xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探索。此外，ROC曲線分析遞呈的結(jié)果顯示，miR-142在腦梗死的鑒別和預(yù)后結(jié)局的預(yù)測(cè)中均具有良好的應(yīng)用價(jià)值，而在將低密度脂蛋白、入院時(shí)NIHSS評(píng)分和miR-142聯(lián)合分析后，相應(yīng)的ROC獲得更好的曲線下面積、敏感性和特異性，值得臨床推廣和使用。

綜上所述，血清miR-142在腦梗死患者血清中表達(dá)升高，可作為評(píng)估腦梗死病情和預(yù)后的良好外周血標(biāo)記物。但本研究為小樣本單中心研究，樣本量較小，且僅關(guān)注了TOAST分型中的大動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死患者，相關(guān)研究仍待進(jìn)一步完善。