魏萬勇

（四川省蠶絲學校，四川 南充 637000）

白僵菌制劑是我國研究時間最長和應用面積最大的真菌殺蟲劑，也是目前農林業(yè)上防治食葉害蟲非常有效的生物農藥，主要用于防治松毛蟲、玉米螟、大豆食心蟲、菜青蟲、小菜蛾、棉鈴蟲、高粱條螟、甘薯象鼻蟲、馬鈴薯甲蟲、茶葉毒蛾、松針毒蛾、稻苞蟲、稻葉蟬、稻飛虱等多種農林害蟲，特別是對玉米螟和松毛蟲，已經作為常規(guī)手段連年使用[1]。同時白僵菌也用于專門感染昆蟲獲得需要的產品，如生產僵蠶。本文針對白僵菌的分類、生物農藥使用、白僵蠶人工飼養(yǎng)三個方面進行探討研究。

1 白僵菌的分類

白僵菌的研究，最先開始于意大利學者Bassi。白僵菌6 個代表種已被公認，分別是球孢白僵菌（Beauveriabassiana）、布氏白僵菌（Beauveriabrong niartii）、多形白僵菌（Beauveriaamorpha）、蘇格蘭白僵菌（Beauveriacaledonica）、黏孢白僵菌（Beauveriavelata）和蠕孢白僵菌（Beauveriavermiconia）。這6 個種在不同發(fā)育階段具有共同的形態(tài)特征，但也存在一定的差異。在我國目前已發(fā)現(xiàn)的白僵菌有4種，即球孢白僵菌、布氏白僵菌、多形白僵菌和蘇格蘭白僵菌，其中球孢白僵菌和布氏白僵菌比較常見。

真菌分類的主要依據(jù)是有性生殖的各種器官、無性菌絲、孢子和菌落形態(tài)特征等。真菌分類系統(tǒng)較多，目前尚未統(tǒng)一。在真菌傳統(tǒng)分類體系中，一般是基于真菌的形態(tài)學特征、特別是真菌有性生殖特點來進行分類。在各類微生物學教材和眾多研究文獻中，白僵菌營養(yǎng)體是有隔膜的菌絲體，菌落平坦，絨毛狀，形成孢子后呈粉狀，表面白色至淡黃色，分生孢子梗瓶狀，單生或分枝，產生在小梗上，分生孢子球形至卵形。對此類真菌生活史了解不完全，只發(fā)現(xiàn)無性繁殖階段，未發(fā)現(xiàn)其有性階段，故稱為半知菌。因此，白僵菌在傳統(tǒng)的分類學上一直屬于半知菌亞門（Deuteromycontina）絲孢綱（Hyphomycetales）叢梗孢目（Moniliales）叢梗孢科（Moniliaceae）白僵菌屬[2]，但隨著對白僵菌研究的不斷深入，特別是分子進化和系統(tǒng)發(fā)育的研究，有必要將白僵菌重新進行歸類。

近年來趨向采用安斯沃斯（Ainsworth）等人的《真菌學詞典》所介紹的分類系統(tǒng)，認為真菌屬于單獨成立的真菌界（Fungi），界以下分為黏菌門（Myxomycota）和真菌門（Eumycota），通常所稱的真菌即指真菌門菌。真菌門下分為5 個亞門：鞭毛菌亞門（Mastigomycotina）、接合菌亞門（Zygomycotina）、子囊菌亞門（Ascomycotina）、擔子菌亞門（Basidiomycotina）和半知菌亞門（Deuteromycotina）[2]。真菌的現(xiàn)代分類學引入了分子生物學技術，應用較多的主要有核糖體脫氧核酸（rDNA）序列測定，線粒體DNA 限制性片段多態(tài)性（RFLP）分析，隨機擴增多態(tài)性（RAPD）分析及脈沖場凝膠電泳（PFGE）分析等。應用分子生物學技術從遺傳進化角度闡明真菌種群之間和種間內的分類學關系，是目前真菌分類學研究的熱點。最近美國生物技術信息中心（NCBI）將白僵菌歸類于雙核亞界（Dikarya）子囊菌門（Ascomycota）盤菌亞門（Pezizomycotina）糞殼菌綱（Sordariomycetes）肉座菌亞綱（Hypocreomycetidae）肉座菌目（Hypocreales）蟲草菌科（Cordycipitaceae）蟲草屬（Cordyceps）。目前，越來越多的文獻研究采用了NCBI 的分類標準。為了方便交流，避免名稱混亂，排除科學研究和交流的障礙，為科學分類和檢索奠定基礎，筆者建議統(tǒng)一白僵菌的分類標準，并采用美國生物技術信息中心NCBI 的分類標準。

2 生物農藥白僵菌的使用

2.1 白僵菌殺蟲機理

白僵菌可以侵入6 個目15 科200 多種昆蟲及螨蟲的體內大量繁殖，同時產生白僵素（非核糖體多肽類毒素）、卵孢霉素（苯醌類毒素）和草酸鈣結晶，這些物質可打亂昆蟲新陳代謝、引起中毒，以致死亡[3]。白僵菌殺蟲的有效物質是白僵菌的活性孢子。孢子接觸害蟲后，在適宜溫度條件下萌發(fā)，生長菌絲侵入蟲體內，產生大量菌絲和分泌物，使害蟲生病，約4～5 d 后死亡。死亡后蟲體僵硬，體表長滿菌絲及白色粉狀孢子。孢子可借風、昆蟲擴散，再侵染其他害蟲。持續(xù)施用白僵菌后，由于大量活性孢子的存在，感染寄主死亡之后能在體外產孢并再次擴散，在適宜條件下對害蟲形成流行病害，達到一年施藥多年有效的效果。

2.2 主要劑型

最初白僵菌劑型是含有大量載體或培養(yǎng)料的粉劑，運輸不便且效果不穩(wěn)定，隨著研究的深入和生產工藝的改進，逐漸發(fā)展了更為方便的、性能更為穩(wěn)定的純孢粉生產和可濕性粉劑?，F(xiàn)在推行乳劑、油劑和黏膏劑，乳劑和油劑主提高孢子懸液分散度與黏附力，黏膏劑主提高包子貯藏期的微囊劑以及防治蛀干害蟲提高利用率。在各種劑型中，為了增加白僵菌殺蟲劑的活力與殺蟲效果，在制劑中常常添加一些助劑、紫外保護劑和增效劑等[4，5]。

2.3 菌種貯藏

白僵菌應置陰涼干燥避光處貯存，20℃下保質期可達半年。常溫下油劑貯存含水量在5%以下，5 個月活孢率80%；4℃下含水量1.25～9.87%可貯藏18 個月，活孢率90%以上。限氮培養(yǎng)的白僵菌孢子貯藏期要比限碳的長；水浴時間適當延長可以一定程度上延長油劑中后期孢子的活孢率。常溫貯藏的白僵菌適時添加外源營養(yǎng)，對于恢復孢子活力，提高油劑的活孢率有一定效果。色拉油可以作為白僵菌油劑很好的油劑載體[5]。

2.4 使用方法

白僵菌最適pH 6～7，最適培養(yǎng)溫度20～25℃，在寄主昆蟲等孵化盛期，結合氣象條件特別是溫度濕度條件，在陰天、雨后或早晚濕度大時使用，與寄主身體接觸或進入寄主體內，寄生并產生作用。目前使用的是白僵菌原粉或經分離后的白僵菌孢子粉。生產中推薦白僵菌制劑使用濃度為1 億個孢子/mL 或菌粉2 億個孢子/g，同時應結合具體使用方法及防治對象確定使用量。菌液要現(xiàn)配現(xiàn)用，可采用噴粉、噴液、噴霧、撒施、放粉炮、放地炮等多種方法使用。與蘇云金芽孢桿菌、溴氰菊酯、松毛蟲病毒、三唑磷、殺蟲雙、氧化樂果等混合使用，可提高殺蟲效果[6]。

3 僵蠶人工飼養(yǎng)

3.1 僵蠶的藥用價值

家蠶感染真菌病后的病蠶尸體出現(xiàn)僵化，故稱之為僵蠶。在僵蠶的表面長出不同顏色的分生孢子，致使尸體表面形成白、黃、綠、黑、赤、灰等不同顏色的孢子粉被，根據(jù)孢子粉被的顏色，分別稱不同的家蠶真菌病為家蠶白僵病、黃僵病、綠僵病等。傳統(tǒng)的中藥材僵蠶特指蠶蛾科昆蟲家蠶Bombyx mori Linnaeus 4～5 齡的幼蟲感染（或人工接種） 白僵菌Beauveria bassiana（Bals.）Vuillant 而致死的干燥體。白僵蠶作為我國傳統(tǒng)中藥材，具有息風止痙，祛風止痛，化痰散結的功效[7]。隨著現(xiàn)代技術對白僵蠶營養(yǎng)成分及有效成分研究的深入及藥理、藥化、臨床研究，白僵蠶在抗癌、治癌方面的獨特療效逐漸為人所知。此外，白僵蠶含有氨基酸和活性絲光素，有營養(yǎng)皮膚和美容作用；僵蠶蛋白質有刺激上皮脂腺，調節(jié)性激素分泌的作用，因而對女性性激素分泌失調引起的黃褐斑有一定療效；內含維生素E，能清除自由基，抗脂質氧化形成的老年斑；所含的活性絲光素能促使皮膚細胞新生，調節(jié)皮脂，改善皮膚微循環(huán)，可增白防曬，消除色素沉著，保持皮膚彈性等等。

3.2 白僵蠶規(guī)模化飼養(yǎng)

3.2.1 菌種分離和篩選

白僵菌菌種來自僵蠶尸體上的白僵菌孢子，經分離選取優(yōu)質單株菌落移植于斜面培養(yǎng)基上，在25～28℃的恒溫下進行培養(yǎng)，經過10 d 左右，將提純分離得到的純種在5℃低溫下作為母種保存，再用于擴大培養(yǎng)。

3.2.2 菌種的衰退和復壯

球孢白僵菌在繼代培養(yǎng)過程中常發(fā)生不同類型的菌落局變，并產生各種形態(tài)和顏色不同于母株的分離株。與出發(fā)菌株（原始菌株）相比，分離株多表現(xiàn)為菌苔瘠薄或氣生菌絲徒長、產孢量下降和毒力降低等現(xiàn)象，意味生產性狀的退化。一旦出現(xiàn)衰退，應及時進行寄主復壯。

3.2.3 孢子活性及使用濃度

白僵菌的不同菌株，毒力各不相同[8]。作為僵蠶生產接種用濃度，要求具有較高的精確性，生產上常使用濃度為1×107～1×108億個孢子/mL 的孢子懸液作為噴灑接種，以蠶體體表見濕為宜。使用濃度過低會導致感染率、成僵率過低，使用濃度過高不僅浪費菌種資源，也會影響僵蠶品質。

3.2.4 環(huán)境條件控制

白僵菌孢子萌發(fā)、菌絲生長受制于溫度、濕度、光照、空氣等環(huán)境條件，特別是噴藥接種后溫濕度的影響最為顯著，保持最適溫度20～25℃，不能過高或過低，空氣相對濕度85%～90%。在僵蠶菌的培養(yǎng)過程中，注意開窗通風，保持空氣清新，以防止蠶的尸體腐爛。

3.2.5 及時采收加工

把拾取的僵蠶放入烘房高溫滅菌，在90～100℃高溫中烘4～8h，即可以殺死白僵菌，烘干僵蠶。也可以將拾取的僵蠶用石灰吸收水分，曬干或焙干即可。