伍 玲，楊勇波

卵巢癌是一種發(fā)生率較高的婦科惡性腫瘤疾病，其中上皮性卵巢癌是常見類型，占卵巢癌的50%～70%，具有易擴(kuò)散、遠(yuǎn)處臟器組織轉(zhuǎn)移及預(yù)后差等生物學(xué)特性[1]。上皮性卵巢癌病人在疾病早期階段缺乏典型的臨床癥狀及體征，多數(shù)病人就診時(shí)已有腹腔內(nèi)腫瘤細(xì)胞種植現(xiàn)象，致死率較高[2]。近些年盡管針對(duì)上皮性卵巢癌的綜合治療措施得到明顯的提高，但術(shù)后及化療后的復(fù)發(fā)率仍較高，其中化療藥物耐藥是重要的原因[3-4]。因此積極探討上皮性卵巢癌的化療耐藥作用機(jī)制對(duì)于改善病人預(yù)后具有重要的意義。長鏈非編碼RNA(long chain non-coding RNA,LncRNA)是一類長度大于200個(gè)核苷酸的內(nèi)源性單鏈RNA，在腫瘤疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用[5]。LncRNA癌易感性候選基因2(cancer susceptibility candidate 2,CASC2)首先在子宮內(nèi)膜癌組織中被發(fā)現(xiàn)，目前在卵巢癌等較多惡性腫瘤組織中均有所表達(dá)[6-7]。此外國內(nèi)研究[8]證實(shí)，CASC2與微小RNA(microRNA)-155-5p之間存在結(jié)合位點(diǎn)，經(jīng)雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證實(shí)兩者存在靶向關(guān)系。因此本研究擬探究LncRNA CASC2、miR-155-5p與上皮性卵巢癌病人化療敏感性及預(yù)后的相關(guān)性。現(xiàn)作報(bào)道。

1 資料與方法

1.1 一般資料 87例卵巢癌組織標(biāo)本均為重慶市開州區(qū)中醫(yī)院及重慶市開州區(qū)人民醫(yī)院2012年1月至2015年8月期間行外科手術(shù)切除治療的病人，術(shù)后經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診為上皮性卵巢癌；平均年齡為(53.2±7.9)歲；腫瘤大小(2.7±1.2) cm；高、中分化42例，低分化45例；漿液性40例，黏液性47例；有腹腔轉(zhuǎn)移33例，無腹腔轉(zhuǎn)移54例；FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ60例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移51例；有腹水52例，無腹水35例。所有病人均行腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，術(shù)后均予以鉑類藥物為主的化療藥物聯(lián)合治療，根據(jù)病人術(shù)后化療是否出現(xiàn)繼發(fā)耐藥分為化療耐藥組(n=32例)和化療敏感組(n=55例)，繼發(fā)耐藥定義為經(jīng)腫瘤組織減滅術(shù)和含鉑類化療藥物治療獲得臨床完全緩解狀態(tài)，停藥后半年內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)[9]。同時(shí)選擇72例卵巢良性腫瘤病人的卵巢病灶組織作為對(duì)照組。本研究方案已通過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測(cè)上皮性卵巢癌組及對(duì)照組LncRNA CASC2、miR-155-5p的相對(duì)表達(dá)量，首先根據(jù)Trizol試劑盒說明書步驟提取總RNA，然后根據(jù)反轉(zhuǎn)錄酶試劑盒說明書步驟將RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，最后根據(jù)Real Master Mix試劑盒說明書步驟，同時(shí)采用SYBR Green Ⅰ染料檢測(cè)CASC2、miR-155-5p的表達(dá)水平，以U6為內(nèi)參基因，CASC2上游引物序列：5′-TAC AGG ACA GTC AGT GGT GGT A-3′，下游引物序列：5′-ACA TCT AGC TTA GGA ATG TGG C-3′；miR-155-5p上游引物序列：5′-GGG GTT AAT GCT AAT CGT GA-3′，下游引物序列5′-CAG TGC GTG TCG TGG AGT-3′；U6上游引物序列：5′-CTC GCT TCG GCA GCA CA-3′，下游引物序列：5′-AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT-3′。PCR結(jié)果采用2-ΔΔct方法進(jìn)行計(jì)算。

1.3 隨訪 所有病人術(shù)后化療結(jié)束后均接受5年的隨訪，隨訪形式為電話詢問、醫(yī)院門診復(fù)診等，詳細(xì)記錄所有病人總體生存率及中位生存時(shí)間等指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)，采用Pearson法分析上皮性卵巢癌組織中LncRNA CASC2與miR-155-5p的相關(guān)性關(guān)系，采用Kaplan-Meier法分析兩者與上皮性卵巢癌病人的5年生存情況的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 2組病人LncRNA CASC2、miR-155-5p表達(dá)水平比較 上皮性卵巢癌組LncRNA CASC2表達(dá)水平低于對(duì)照組，而miR-155-5p表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(見表1)。

2.2 上皮性卵巢癌病人LncRNA CASC2、miR-155-5p表達(dá)水平與臨床病理特征的相關(guān)性關(guān)系 根據(jù)LncRNA CASC2、miR-155-5p表達(dá)水平(以平均數(shù)為界值)分為高表達(dá)組與低表達(dá)組，上皮性卵巢癌組LncRNA CASC2、miR-155-5p表達(dá)水平與腹腔轉(zhuǎn)移、FIGO分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05～P<0.01)，而與年齡、腫瘤大小、腹水及組織學(xué)類型無關(guān)(P>0.05)(見表2)。

表1 2組病人LncRNA CASC2、miR-155-5p表達(dá)水平比較

表2 上皮性卵巢癌病人LncRNA CASC2、miR-155-5p表達(dá)水平與臨床病理特征的相關(guān)性分析

2.3 LncRNA CASC2、miR-155-5p表達(dá)水平與化療敏感性的關(guān)系 化療敏感組miR-155-5p表達(dá)水平低于化療耐藥組，而LncRNA CASC2表達(dá)水平高于化療耐藥組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(見表3)。

2.4 上皮性卵巢癌病人LncRNA CASC2與miR-155-5p的相關(guān)性關(guān)系 上皮性卵巢癌病人LncRNA CASC2與miR-155-5p呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.637，P<0.05)。

2.5 LncRNA CASC2、miR-155-5p與上皮性卵巢癌病人5年生存情況的關(guān)系 本研究中上皮性卵巢癌病人均獲得隨訪，隨訪時(shí)間為5年，miR-155-5p高表達(dá)者5年內(nèi)總生存率及中位生存時(shí)間均低于miR-155-5p低表達(dá)者(34.0% VS 73.5%，20.0個(gè)月VS 28.0個(gè)月，P<0.05)，而LncRNA CASC2高表達(dá)者5年內(nèi)總生存率及中位生存時(shí)間均高于LncRNA CASC2低表達(dá)者(80.0% VS 22.8%，27.0個(gè)月VS 18.0個(gè)月，P<0.05)(見圖1、2)。

3 討論

腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)是初次治療上皮性卵巢癌病人的標(biāo)準(zhǔn)方法，隨后再采用以鉑類化療藥物為主的綜合治療方案，盡管此方案積極有效，但疾病復(fù)發(fā)率仍較高，且5年生存情況不佳[10]。因此迫切需要尋找預(yù)測(cè)上皮性卵巢癌病人化療敏感性及預(yù)后的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。較多研究[11-12]證實(shí)，卵巢癌組織中miRNA表達(dá)水平呈升高或下降表現(xiàn)，進(jìn)而起到癌基因或抑癌基因的類似作用，也有研究[13-14]發(fā)現(xiàn)LncRNA在卵巢癌細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控方面發(fā)揮作用，多數(shù)為LncRNA靶向調(diào)控處于下游部位的miRNA表達(dá)。

表3 LncRNA CASC2、miR-155-5p表達(dá)水平與化療敏感性的關(guān)系

miR-150-5p屬于miRNA的重要成員，定位于染色體19q13.33。近年研究[15]證實(shí)，其可通過某些特定信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與各種腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展過程。國內(nèi)研究人員抑制鼻咽癌細(xì)胞miR-150-5p表達(dá)水平后，癌細(xì)胞侵襲周圍正常組織的能力也顯著性下降，抑制多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞miR-150-5p表達(dá)水平后，癌細(xì)胞凋亡率明顯升高，增殖能力則顯著性減弱[16-17]。國外研究[12]也發(fā)現(xiàn)，miR-150-5p在胃癌組織及胃癌細(xì)胞株中均呈高表達(dá)水平。LncRNA CASC2在較多腫瘤疾病中均發(fā)揮抑癌基因的生物學(xué)功能，但其作用機(jī)制存在較大的差異性，如宮頸癌組織中CASC2表達(dá)水平明顯下降，可通過結(jié)合miR-21而上調(diào)PTEN的表達(dá)水平，同時(shí)還可明顯增強(qiáng)宮頸癌對(duì)順鉑的化療敏感性[7]。還有研究[18]發(fā)現(xiàn)，CASC2可通過失活絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而起到抑制胃癌細(xì)胞增殖、侵襲周圍正常組織和血管形成的作用。本研究顯示，上皮性卵巢癌組LncRNA CASC2表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組，而miR-155-5p表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，結(jié)果提示上皮性卵巢癌組織LncRNA CASC2低表達(dá)，miR-155-5p高表達(dá)，與上述研究相符。分析上皮性卵巢癌組LncRNA CASC2、miR-155-5p表達(dá)水平與臨床病理特征的相關(guān)關(guān)系，發(fā)現(xiàn)上皮性卵巢癌組LncRNA CASC2、miR-155-5p表達(dá)水平與腹腔轉(zhuǎn)移、FIGO分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示LncRNA CASC2、miR-155-5p兩者均在上皮性卵巢癌增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮著重要作用。分析上皮性卵巢癌組織中LncRNA CASC2與miR-155-5p的相關(guān)性則發(fā)現(xiàn)，兩者表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示LncRNA CASC2可能通過某些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通過負(fù)性調(diào)控上皮性卵巢癌組織中的miR-155-5p表達(dá)水平，進(jìn)而在上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮作用。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)化療敏感組miR-155-5p表達(dá)水平明顯低于化療耐藥組，而LncRNA CASC2表達(dá)水平明顯高于化療耐藥組，miR-155-5p高表達(dá)者5年內(nèi)總生存率及中位生存時(shí)間均明顯低于miR-155-5p低表達(dá)者，而LncRNA CASC2高表達(dá)者5年內(nèi)總生存率及中位生存時(shí)間均明顯高于LncRNA CASC2低表達(dá)者，提示LncRNA CASC2、miR-155-5p與上皮性卵巢癌病人化療敏感性及預(yù)后存在密切相關(guān)性，可作為有效的預(yù)測(cè)指標(biāo)。本研究還存在一些不足之處，如兩者通過何種信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展還需以后的細(xì)胞、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究予以證實(shí)。