宋 輝，于藝冰，郭媛媛

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是成年人白血病中最常見的一種，惡性程度高，病人5年生存率僅30%～40%[1]。深入探討AML的發(fā)病機制并尋找潛在的分子生物學標志物有重要意義。乙?；潜碛^遺傳學研究的熱點，乙酰基轉(zhuǎn)移酶可以調(diào)節(jié)蛋白的乙?；?，進而影響蛋白降解。常見的乙?；D(zhuǎn)移酶包括：GANT(Gcn5-related N-acetyltransferases)超家族、p300/CBP蛋白家族和MYST蛋白家族[2]。N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶10(N-acetyltransferase 10，NAT10)是乙?；D(zhuǎn)移酶GANT超家族成員之一，其最早被發(fā)現(xiàn)可作為人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)基因的轉(zhuǎn)錄激活子，NAT10與細胞增殖、侵襲、凋亡、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和衰老等有關(guān)[3]，在肝細胞癌、乳腺癌和結(jié)直腸癌等的發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用[4-7]。由于乙酰基轉(zhuǎn)移酶參與的表觀遺傳學修飾和白血病關(guān)系密切[8-9]，因此我們推測NAT10可能也參與了AML的發(fā)生和發(fā)展，然而既往少有相關(guān)報道。本研究探討NAT10基因表達與AML預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)對結(jié)果作一報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年9月至2018年1月我院收治的84例初治AML病人(初治組)、20例復發(fā)AML病人(復發(fā)組)和20例AML完全緩解病人(緩解組)，均符合2012年美國國家綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)制定的AML診治指南[10]。另選取20名骨髓捐贈的健康人作為對照組。所有受試者均簽署知情同意書。

表1 4組一般資料比較

1.2 RT-PCR檢測骨髓單個核細胞中NAT10 mRNA的表達 取所有受試者骨髓5 mL，放置于EDTA抗凝管中，用等體積無菌0.9%氯化鈉溶液進行稀釋。隨后用密度梯度離心法分離提取骨髓中單個核細胞，實驗中所用的淋巴細胞分離液購于北京索萊寶公司。用TRIZOL試劑(武漢科昊佳生物科技有限公司)提取總RNA，隨后用RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國THERMO FISHER公司)將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，總反應(yīng)體系20 μL。接下來用SYBR Select Master Mix試劑盒(美國 Roche 公司)進行熒光定量PCR，反應(yīng)體系為：2 μL 10×PCR緩沖液、1.1 μL 探針、0.5 μL cDNA、1 μL Taq酶、0.4 μL dNTP，加水至20 μL。反應(yīng)條件：50 ℃ 120 s；95 ℃ 120 s；95 ℃ 15 s；60 ℃ 60 s，共40個循環(huán)。用2-△△Ct法計算單個核細胞中NAT10 mRNA相對表達量。

1.3 治療和隨訪 84例初治AML病人的治療參考2012年美國國家綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)制定的AML診治指南[10]。用DA(柔紅霉素+阿糖胞苷)或IA(去甲氧柔紅霉素+阿糖胞苷)等標準方案進行誘導化療，緩解后給予大劑量阿糖胞苷進行鞏固治療。隨后根據(jù)病人經(jīng)濟及預(yù)后危險度進行維持治療或者干細胞移植治療等。病人出院后以門診和電話方式進行隨訪，記錄總生存時間：AML病人診斷之日起至末次隨訪或者死亡時間；無事件生存時間：AML病人診斷之日起至死亡、骨髓未緩解、緩解后復發(fā)或者末次隨訪時間[11]。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用t檢驗、單因素方差分析、LSD-t檢驗和χ2檢驗。采用ROC曲線分析NAT10 mRNA早期診斷AML的價值，計算曲線下面積(AUC)。生存預(yù)后的影響因素采用COX多因素分析，Kaplan-Meier法進行生存分析。

2 結(jié)果

2.1 4組NAT10 mRNA表達水平比較 4組NAT10 mRNA表達水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。初治組、復發(fā)組骨髓單個核細胞中NAT10 mRNA相對表達量均高于緩解組和對照組(P<0.05)(見表2)。

表2 4組NAT10 mRNA表達水平比較

2.2 NAT10 mRNA早期診斷AML的價值 NAT10 mRNA早期診斷AML的AUC為0.827(95%CI：0.723～0.930，P<0.01)，當NAT10 mRNA為4.88時約登指數(shù)0.662為最大，即此時診斷價值最高，靈敏度和特異度分別為83.6%和82.6%(見圖1)。

2.3 NAT10 mRNA與AML臨床病理特征的關(guān)系 以中位表達水平(5.15)將84例AML病人分為高表達組和低表達組，所有病人給予DA或IA誘導化療，高表達組一個療程完全緩解率為35.71%，低于低表達組的69.04%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)(見表3)。

表3 NAT10 mRNA高表達組和低表達組一般資料比較

2.4 影響AML病人總生存時間和無事件生存時間的單因素和logistic多因素分析 對84例AML病人進行了2～18個月的隨訪。單因素分析顯示，F(xiàn)LT3-ITD/TKD突變和NAT10 mRNA高表達是AML病人總生存時間和無事件生存時間的影響因素(P<0.05)。COX多因素分析顯示，F(xiàn)LT3-ITD/TKD突變和NAT10 mRNA高表達是AML病人總生存時間的獨立影響因素(P<0.05)，另外，F(xiàn)LT3-ITD/TKD突變和NAT10 mRNA高表達也是AML病人無事件生存時間的獨立影響因素(P<0.05)(見表4～5)。

表4 影響AML病人總生存時間和無事件生存時間的單因素分析[M(P25,P75)]

表5 AML病人總生存時間和無事件生存時間的COX多因素分析

2.5 Kaplan-Meier生存曲線分析NAT10 mRNA與AML病人生存預(yù)后的關(guān)系 NAT10 mRNA高表達組中位總生存時間為4個月，低于低表達組的10個月(χ2=10.00，P<0.01)。NAT10 mRNA高表達組中位無進展生存時間為3個月，低于低表達組的8個月(χ2=8.121，P<0.01)(見圖2)。

3 討論

AML是血液系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病機制目前尚未完全明確，可能與電離輻射、化學物質(zhì)、細胞毒物、病毒感染和遺傳等有關(guān)[12]。探尋AML的發(fā)病機制及生物學標志物有重要臨床意義。NAT10基因定位于11p13染色體上，相對分子質(zhì)量約116 000。NAT10具有乙?；D(zhuǎn)移酶作用，研究[13]證實其在端粒酶活性調(diào)控、核糖體RNA合成調(diào)控、染色體解聚調(diào)控和胞質(zhì)分裂調(diào)控中發(fā)揮重要作用。NAT10與癌癥、衰老密切相關(guān)[6,14-15]。

NAT10基因在人體各組織均有表達，當發(fā)生腫瘤時NAT10的定位和表達均發(fā)生了改變，進而影響腫瘤細胞的生物學行為[16]。TAN等[17]最早發(fā)現(xiàn)，NAT10可作用于細胞微管，影響卵巢癌細胞的增殖。在結(jié)腸癌的研究中發(fā)現(xiàn)，正常組織中NAT10主要定位于細胞核，而結(jié)腸癌組織中NAT10主要定位于細胞膜，NAT10可以通過調(diào)控糖原合成酶激酶3β影響結(jié)腸癌細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[18]。MA等[19]發(fā)現(xiàn)，與上皮型肝癌細胞比較，間充質(zhì)肝癌細胞的NAT10表達水平較高，下調(diào)NAT10的表達后，兩種肝癌細胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換、侵襲、轉(zhuǎn)移能力均明顯下降。

NAT10與AML的關(guān)系既往少有報道，本研究發(fā)現(xiàn)，AML病人骨髓單個核細胞中NAT10 mRNA表達明顯高于健康人，提示NAT10可能參與了AML的發(fā)生，另外本研究ROC曲線分析還發(fā)現(xiàn)NAT10對AML的早期診斷有一定價值，AUC為0.831。NAT10還與腫瘤的治療相關(guān)，例如LIU等[6]發(fā)現(xiàn)，NAT10可以乙?；疢OCR2調(diào)節(jié)乳腺癌細胞周期檢查點，影響癌細胞對放化療的耐受性。本研究中，初治組骨髓單個核細胞中NAT10 mRNA相對表達量為(5.12±0.63)、復發(fā)組為(4.69±0.68)，均高于緩解組的(1.62±0.48)。以中位表達水平將84例AML病人分為高表達組和低表達組，所有病人給予DA或IA誘導化療，高表達組一個療程完全緩解率為35.71%，低表達組為69.05%，組間比較有統(tǒng)計學差異。說明NAT10可能有助于評估ANL的治療效果。

AML預(yù)后的影響因素較多，包括年齡、染色體核型、基因突變和治療方案等[20-21]。FLT3-ITD/TKD突變是AML中最常見的突變類型，與病人近期和遠期預(yù)后密切相關(guān)，本研究結(jié)果與既往報道[22]一致。亦有研究發(fā)現(xiàn)，NAT10與鼻腔鼻竇黏膜黑素瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，NAT10高表達病人的3年和5年生存率較低[23]。本研究COX多因素分析和Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果均顯示，NAT10 mRNA與AML病人的生存預(yù)后有關(guān)，NAT10 mRNA表達水平越高，AML病人的總生存時間和無事件生存時間越低，提示NAT10 mRNA可能成為AML預(yù)后早期評估的指標。

綜上，本研究發(fā)現(xiàn)初治和復發(fā)AML病人骨髓單個核細胞中NAT10 mRNA相對表達量明顯高于AML緩解病人和健康人，提示NAT10對AML的早期診斷及病情評估可能有一定價值。另外，COX多因素分析和Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果均顯示，NAT10 mRNA高表達與AML病人的不良生存預(yù)后有關(guān)。本研究也存在一些局限性，例如樣本量相對較小，因此沒有根據(jù)FAB分型進行分層分析；未檢測AML病人血清中NAT10的表達水平；對AML病人的隨訪時間相對較短。未來需要進一步探討NAT10在AML中的作用及機制。