黃學(xué)文 賈 楠 李 杰 王明瑩

（呼倫貝爾學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古海拉爾 021008）

芍藥（Paeonia lactifloraPall.）屬芍藥科芍藥屬多年生草本植物［1］，是觀賞花卉兼中藥材。芍藥的品種繁多，但作為中藥材的赤芍本源是野生芍藥［2］，其根入藥（藥材名：赤芍），能清熱涼血、活血散瘀，主要分布于我國(guó)東北、河北、山西、寧夏南部、陜西西南部、甘肅東南部，日本、朝鮮、蒙古國(guó)東部和北部、俄羅斯（西伯利亞地區(qū)、遠(yuǎn)東地區(qū)）［3］。芍藥的主要藥用成分是單萜類化合物—芍藥苷［4］，經(jīng)前人研究發(fā)現(xiàn)，芍藥苷對(duì)動(dòng)物的神經(jīng)性疾?。?］、腦損傷疾?。?］有顯著作用，還具有一定的免疫調(diào)節(jié)功能［7］。芍藥作為中藥材原料，市場(chǎng)需求量大；由于環(huán)境和人為等因素，野生芍藥越來(lái)越少。芍藥在我國(guó)栽培歷史悠久，目前黑龍江省和內(nèi)蒙古東部作為經(jīng)濟(jì)作物普遍栽植。呼倫貝爾市林緣和草甸草原是野生芍藥的主要分布生境。筆者通過(guò)對(duì)芍藥栽培試驗(yàn)，為當(dāng)?shù)氐赖厮幉姆乱吧N植示范和產(chǎn)業(yè)化，以及野生芍藥遷地保護(hù)提供實(shí)踐指導(dǎo)和數(shù)據(jù)支撐。

1 自然地理概況

試驗(yàn)地位于鄂溫克旗巴彥托海鎮(zhèn)苗圃。鄂溫克旗巴彥托海鎮(zhèn)屬中溫帶半干旱大陸性草原氣候，年平均氣溫為-1～2 ℃，1月（最冷月）平均低溫為-30.83 ℃，7月（最熱月）平均高溫為25.84 ℃。年平均降水量為350～370 mm，1月平均降水量為3.79 mm，7月平均降水量為99.38 mm。年日照時(shí)數(shù)平均為2 800 h。無(wú)霜期平均100 d，5—9月月均低溫大于0 ℃。土壤類型是栗鈣土。

2 材料與方法

2.1 樣品采集樣品采集地位于鄂溫克旗巴彥托海鎮(zhèn)苗圃。樣品采集時(shí)間：2016年6月至2017年5月。

2.2 材料準(zhǔn)備確定芍藥植株最佳采收器官：取3年果實(shí)成熟期芍藥植株的根、莖、葉，去除泥沙，陰干，粉碎過(guò)60目篩，密封保存?zhèn)溆?。確定芍藥植株最佳采收年份：取采集地1、2、3、4年果實(shí)成熟期芍藥植株的根，去除泥沙，陰干，粉碎過(guò)60目篩，密封保存?zhèn)溆?。確定芍藥植株最佳采收時(shí)期：取3年萌發(fā)期、展葉期、開(kāi)花期、果實(shí)成熟期、枯萎后期芍藥植株的根，去除泥沙，陰干，粉碎過(guò)60目篩，密封保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 測(cè)定方法檢測(cè)芍藥苷常用方法有高效液相色譜法、薄層掃描法、毛細(xì)管電泳法［8］。根據(jù)《中國(guó)藥典（2015版）》［9］采用高效液相色譜法測(cè)定芍藥苷，

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取在P2O5減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品，精密稱取，加甲醇制成1 mL含0.5 mg的溶液［10］。

2.3.2 供試品溶液的制備 精密稱取芍藥材料（過(guò)60目篩）0.5 g，置于塞蓋的錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，浸泡4 h，超聲處理20 min，冷卻，再稱定重量，不足用甲醇補(bǔ)足，搖勻，過(guò)濾，取濾液，即得供試品溶液［11］。

2.3.3 色譜條件 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀流動(dòng)相（40∶60）柱溫：40 ℃；波長(zhǎng)：230 nm；流速：1 mL/min；時(shí)間：15 min；進(jìn)樣量：10 μL［12］。在此條件下芍藥苷保留時(shí)間為10 min左右，繪出標(biāo)準(zhǔn)品與供試品的高效液相色譜圖，如圖1、2。

圖1 芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜

圖2 芍藥苷供試品高效液相色譜

2.3.4 系統(tǒng)適用性檢驗(yàn)

（1）色譜柱理論板數(shù)：用來(lái)評(píng)價(jià)色譜柱的分離效能。根據(jù)《中國(guó)藥典》［13］，芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品的理論板數(shù)是3 000。

（2）精密度：用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示。取各品種下的對(duì)照品各10 μL，進(jìn)樣5次，標(biāo)準(zhǔn)值2.0%。

（3）重復(fù)性：取果實(shí)成熟期的樣品重復(fù)5次，測(cè)得平均含量。重復(fù)性指標(biāo)為3.34%。

（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密稱取芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL用甲醇定容到1 mL，分別得到0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL，進(jìn)樣量為10 μL。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3。

圖3 芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線

3 結(jié)果及分析

3.1 系統(tǒng)適用性檢驗(yàn)結(jié)果芍藥苷供試品的色譜柱理論板數(shù)是6 400，數(shù)值遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)3 000。說(shuō)明芍藥苷峰與其他峰能夠很好地分離；精密度（RSD）為1.7%，小于標(biāo)準(zhǔn)2.0%，說(shuō)明精密度良好；重復(fù)性所測(cè)峰面積RSD為2.2%，小于3.34%，說(shuō)明重復(fù)性良好。標(biāo)準(zhǔn)曲線y=4 150.7x+59 962，R2=0.986 3，試驗(yàn)結(jié)果呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

3.2 不同營(yíng)養(yǎng)器官芍藥苷含量的變化情況取同一年份、同一時(shí)期、不同器官的芍藥，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1，可以發(fā)現(xiàn)不同器官芍藥苷的含量：根（2.65）>葉（1.23）>莖（0.74）。同時(shí)P值小于0.05，不同器官芍藥苷的含量存在差異，具體見(jiàn)表1。

表1 不同器官芍藥苷的含量 單位：%

3.3 不同年份芍藥苷含量的變化情況取同一時(shí)期、不同年份的根進(jìn)行芍藥苷測(cè)定，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)在不同年份中4年植株的芍藥苷含量最大，為3.07%；同時(shí)F檢測(cè)值大于1且大于其臨界值，P值小于0.05，說(shuō)明不同年份中所含芍藥苷的比重存在差異，具體見(jiàn)表2。

表2 不同年份芍藥根中芍藥苷的含量 單位：%

3.4 不同時(shí)期芍藥苷含量的變化情況取同一年份、不同時(shí)期的根測(cè)定芍藥苷的含量，確定最佳的采收期。如圖4所示，各個(gè)時(shí)期芍藥苷含量均呈現(xiàn)高—低—高的趨勢(shì)，其中枯萎后期的芍藥苷含量最多，為3.34%。萌發(fā)期地上部分還沒(méi)有生長(zhǎng)，有效成分在根中積累，因此萌發(fā)期所含芍藥苷較高；到展葉期時(shí)，莖、葉開(kāi)始生長(zhǎng)，根中有效成分轉(zhuǎn)化為其他代謝產(chǎn)物，為莖葉提供能量；到枯萎后期地上部分枯萎，有效成分蓄藏于根中，此時(shí)根中的芍藥苷含量最高。經(jīng)單因素方差分析，同時(shí)F檢測(cè)值大于1且大于其臨界值，P值小于0.05，說(shuō)明不同時(shí)期根中所含芍藥苷的比重存在差異。

圖4 不同時(shí)期芍藥根中芍藥苷含量變化

從不同時(shí)期的折干率方面分析可得，4月下旬是芍藥的萌發(fā)期，5月上旬是展葉期，6月份是花期。7月份是果期，8月份到9月底是營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期，10月份以后是枯萎后期。7、8月份為海拉爾區(qū)雨季，降水較多，因此折干率略有降低，到枯萎后期，氣候干燥折干率明顯上升，具體見(jiàn)圖5。

圖5 芍藥根不同時(shí)期折干率的變化情況

綜上所述，芍藥的最佳采收器官是根，最佳采收年份是4年，最佳采收時(shí)期是枯萎后期。且各時(shí)期平均含量為2.47%，大于2015《中國(guó)藥典》中赤芍作為藥材芍藥苷的含量1.8%，因此鄂溫克旗巴彥托海鎮(zhèn)苗圃中的芍藥符合標(biāo)準(zhǔn)，質(zhì)量良好。

4 結(jié)論與討論

4.1 結(jié)論該研究采用高效液相色譜法對(duì)芍藥苷進(jìn)行測(cè)定，經(jīng)系統(tǒng)性檢驗(yàn)，該方法分離度強(qiáng)，靈敏度及重復(fù)度均良好。標(biāo)準(zhǔn)曲線y=4 150.7x+59 962，R2=0.986 3，試驗(yàn)結(jié)果呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。該研究就鄂溫克旗巴彥托海鎮(zhèn)苗圃中芍藥進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)對(duì)不同器官、不同年份及不同時(shí)期芍藥苷的測(cè)定，研究表明芍藥植株根中芍藥苷含量最高，為2.65%；4年植株芍藥苷含量最高，為3.07%；枯萎后期芍藥苷含量最高，為3.34%。研究發(fā)現(xiàn)4年植株枯萎后期根中芍藥苷的含量最高，說(shuō)明此時(shí)地上莖葉已經(jīng)枯萎，枯萎過(guò)程中芍藥苷等有效成分由莖葉轉(zhuǎn)移到根，主要積累在根中。且枯萎后期折干率為最高，水分含量最低，所以在海拉爾地區(qū)栽培芍藥時(shí)，9月下旬到10月上旬是采收的最佳時(shí)期。

4.2 討論研究也發(fā)現(xiàn)該地區(qū)各時(shí)期芍藥苷平均含量（2.47%）高于《中國(guó)藥典》的標(biāo)準(zhǔn)（1.8%），僅從此方面看，該地區(qū)芍藥品質(zhì)良好，適合作為中藥材進(jìn)行大面積種植，投入藥材市場(chǎng)。若要對(duì)該芍藥進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，需對(duì)其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及藥用價(jià)值進(jìn)行綜合考量。由于條件有限，僅有4個(gè)年份的芍藥，芍藥苷的積累是否與年份的增加一直成正比，有待進(jìn)一步考察。