方 婷，張 迪，陳 浩，郭 瑩，張雯雯，李志強

(合肥金域檢驗實驗室有限公司，安徽 合肥 230088)

亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶還原酶(MTRR)是葉酸代謝過程的關(guān)鍵酶。據(jù)多篇文獻報道，中國南北方地區(qū)MTHFR A1298C、C677T及MTRR A66G位點多態(tài)性分布存在明顯差異[1-2]。但對于葉酸代謝能力與年齡的關(guān)系鮮見明確的數(shù)據(jù)支持。本研究對安徽地區(qū)女性葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性進行了分析，并將MTHFR C677T 位點基因型頻率數(shù)據(jù)與我國其他12個省市進行比較，進一步探討了年齡因素(18～49歲育齡期女性)對葉酸代謝風(fēng)險程度的影響，為育齡女性備孕或孕期補充葉酸提供數(shù)據(jù)參考，同時為研究與相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展機制提供遺傳學(xué)數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年3月10日至8月17日本公司收集的499例女性全血樣本作為研究對象，年齡18～49歲，其中18～49歲育齡婦女全血樣本477例。為區(qū)分安徽地區(qū)女性MTHFR C677T位點基因型頻率與其他地區(qū)的差異，同時收集了既往報道從北至南12個不同省市MTHFR C677T位點相關(guān)資料。本研究已通過金域醫(yī)學(xué)倫理委員會審批(審批編號2022016)。

1.2方法 用全血細胞核酸提取試劑盒(天根生化科技有限公司，中國)進行基因組DNA提取，利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增試劑盒(江西諾德醫(yī)療器械有限公司，中國)特異性擴增MTHFR A1298C、C677T及MTRR A66G位點。擴增PCR程序：60 ℃，30 s(信號收集)；95 ℃，10 min；95 ℃，15 s；60 ℃，40 s(信號收集，40個循環(huán))；60 ℃，30 s(信號收集)。獲得各樣本3個位點的基因分型后對各位點及整體葉酸代謝能力進行風(fēng)險性分析。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 利用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。采用χ2檢驗，分析安徽地區(qū)女性MTHFR C677T位點與既往文獻報道的我國其他12個省市及中國人群基因型頻率的差異；比較不同年齡女性葉酸代謝能力水平(正常，低、中、高度風(fēng)險)所占比例。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1安徽地區(qū)女性MTHFR A1298C、C677T及MTRR A66G位點基因型及等位基因型頻率與中國人群比較 MTHFR A1298C位點中AA、AC及CC基因型頻率分別為65.5%、31.1%和3.4%，突變基因C的基因型頻率為18.9%；MTHFR C677T位點中CC、CT、TT基因型頻率分別為30.7%、49.9%和19.4%，突變基因T的基因頻率為44.4%；MTRR A66G位點中AA、AG、GG基因型頻率分別為55.3%、37.3%和7.4%，突變基因G的基因型頻率為26.1%。安徽地區(qū)女性MTHFR A1298C及MTRR A66G位點基因型及等位基因型頻率與中國人群比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；MTHFR C677T位點基因型及等位基因型頻率與中國人群比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1、2。

表1 安徽地區(qū)女性MTHFR A1298C、C677T及MTRR A66G位點基因型頻率與中國人群比較

表2 安徽地區(qū)女性MTHFR A1298C、C677T及MTRR A66G位點等位基因型頻率與中國人群比較

2.2安徽地區(qū)女性MTHFR C677T位點與中國其他地區(qū)比較 安徽地區(qū)女性MTHFR C677T位點基因型頻率與甘肅[3]、江蘇[4]地區(qū)比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與赤峰[5]、長春[6]、北京[7]、唐山[8]、海陽[2]、河南[1]、溫州[9]、昆明[10]、泉州[11]、惠州[12]地區(qū)比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 安徽地區(qū)女性MTHFR C677T位點基因型頻率與中國其他地區(qū)比較

2.3葉酸代謝能力水平與年齡的相關(guān)性 18～<30歲女性中葉酸代謝能力水平為中、高度風(fēng)險者占12.23%(34/278)，30～49歲年齡中、高度風(fēng)險者占26.13%(52/199)。30～49歲中、高度風(fēng)險者是18～<30歲的2倍以上，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 葉酸代謝能力水平與年齡的相關(guān)性

3 討 論

2020年由中國醫(yī)藥教育協(xié)會臨床合理用藥專業(yè)委員會等發(fā)布的《中國臨床合理補充葉酸多學(xué)科專家共識》指出，圍受孕期葉酸缺乏會顯著增加神經(jīng)管缺陷、流產(chǎn)、死胎及巨幼細胞貧血等風(fēng)險。葉酸的缺乏在普通人群中同樣與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，如動脈粥樣硬化、冠心病、急性心肌梗死、腦卒中、認知障礙、自帶孤獨癥譜系障礙、抑郁癥、慢性腎臟病及風(fēng)濕免疫等。值得注意的是，長期大劑量(>1 mg/d)補充葉酸同樣也可能產(chǎn)生健康風(fēng)險，如一些葉酸敏感的癌癥(結(jié)直腸癌、前列腺癌等)、掩蓋維生素B12缺乏、加重神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變、降低免疫力等[13]。因此，合理、個性化地補充葉酸顯得尤為重要。

從表3可見，以河南省為界，TT基因型頻率由北至南呈依次遞減趨勢。一大樣本人群數(shù)據(jù)表明，我國山東地區(qū)TT基因型頻率最高[14]，本研究中山東海陽市和河南省比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。緯度的差異與規(guī)律的基因型頻率變化的內(nèi)在聯(lián)系還需進一步探討。本研究中安徽地區(qū)女性TT基因型頻率(19.4%)低于全國水平(28.0%)，但明顯高于南方地區(qū)(溫州、昆明、泉州、惠州等)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但與江蘇地區(qū)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。這種現(xiàn)象可能與兩地人群流動較大密切相關(guān)，提示兩地育齡女性應(yīng)加大推廣合理補充葉酸的力度，以降低各種不良事件的發(fā)生。值得注意的是，兩地育齡女性葉酸補充量不能直接參照北方人群的補充標準，以避免過量補充葉酸導(dǎo)致的疾病風(fēng)險，如葉酸敏感性癌癥(結(jié)直腸癌、前列腺癌)等[13]。

SONG[15]指出，對于每天葉酸攝入量大于335 μg/d的女性患卵巢癌的風(fēng)險較低[校正后比值比(OR)為0.50]，但MTHFR A1298C位點CC和C677T位點TT基因型人群會增加患卵巢癌風(fēng)險(校正后的OR分別為1.76和2.14)。高葉酸攝入量者對卵巢癌發(fā)展及預(yù)后可能具有一定的保護作用。關(guān)注MTHFR A1298C及C677T位點基因多態(tài)性可為臨床治療葉酸缺乏相關(guān)疾病提供更多的診療思路。

從表4 可見，30～49歲女性中葉酸代謝能力水平為中、高度風(fēng)險者是18～<30歲的2倍以上。洪為勝[16]研究表明，29～49歲孕婦葉酸依從率為73.8%，低于18～24、25～28歲孕婦葉酸依從率(分別為74.6%、82.3%)，不同年齡孕婦葉酸依從率比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

綜上所述，安徽地區(qū)女性高年齡者中葉酸代謝能力水平為高度風(fēng)險者比例高于低年齡者中，但其葉酸依從率卻低于低年齡組，故對于該類人群必須加強葉酸增補相關(guān)工作的宣傳，從而減少新生兒出生缺陷和其他不良事件的發(fā)生。理論上講，以葉酸代謝相關(guān)基因型為依據(jù)的代謝風(fēng)險評估應(yīng)不隨年齡的變化而改變，但本研究結(jié)果顯示，30～49歲女性中葉酸代謝能力水平為中、高度風(fēng)險者是18～<30歲的2倍以上，尚有待于進一步探究其原因。