王 爽 張亞男 李凱潮 夏偉光 黃雪冰 王勝林 陳 偉 鄭春田

(廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物科學(xué)研究所，畜禽育種國家重點實驗室，農(nóng)業(yè)部動物營養(yǎng)與飼料(華南)重點開放實驗室，廣東省動物育種與營養(yǎng)公共實驗室，廣東省畜禽育種與營養(yǎng)研究重點實驗室，廣州510640)

煙酸又名尼克酸，參與體內(nèi)脂質(zhì)代謝、組織呼吸氧化和糖類無氧分解等過程[1-4]，是生物體不可或缺的一類營養(yǎng)素，具有抗炎、抗氧化和調(diào)節(jié)脂類代謝等多重功效[5]。煙酸缺乏會使處于生長期的家禽生產(chǎn)性能降低、皮膚損傷、腿骨縮短，成年蛋雞的產(chǎn)蛋量和孵化率也會下降[6]。Parsons[7]早年研究發(fā)現(xiàn)，補充煙酸可以降低人體血液中膽固醇和脂類含量；Gaylor等[8]、文杰等[9-10]對于雞的研究以及劉晨龍等[11]對于產(chǎn)蛋期種鵝的研究均指出煙酸可以顯著降低雞和鵝血液中膽固醇的含量。不過，煙酸在蛋鴨上的研究較少[12]，產(chǎn)蛋高峰期煙酸缺乏對蛋鴨產(chǎn)蛋是否會產(chǎn)生影響，以及對于脂類代謝的調(diào)控是否和其他動物一樣，還是存在一定差異，仍需要進一步研究。因此，本試驗以福建龍巖山麻鴨為研究對象，通過在飼糧中梯度添加煙酸，研究煙酸對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)和脂類代謝的影響，為探討煙酸在蛋鴨生產(chǎn)上的實際應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計及飼糧

采用單因素完全隨機試驗設(shè)計，將1 050只體重一致的24周齡福建龍巖山麻鴨分為7個組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)25只鴨。試驗采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，各組飼糧煙酸添加水平分別為0(對照)、15、30、45、60、75和90 mg/kg。煙酸(有效成分99%)購于湖北某化工有限公司，與預(yù)混料混合后使用?；A(chǔ)飼糧的代謝能、粗蛋白質(zhì)和氨基酸水平等參考國家標準《蛋鴨營養(yǎng)需要量》，其組成及營養(yǎng)水平見表1。依照GB/T 5009.197—2003檢測基礎(chǔ)飼糧煙酸含量。試驗鴨地面平養(yǎng)，限制飲食，自由飲水。試驗期為16周。

1.2 測定指標及方法

1.2.1 產(chǎn)蛋性能測定

試驗期間，定量飼喂(每只鴨160 g/d)，07：00和16：00各喂料1次。以重復(fù)為單位記錄產(chǎn)蛋量和蛋重，統(tǒng)計產(chǎn)蛋率、平均蛋重、日產(chǎn)蛋重和料蛋比。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

續(xù)表1項目 Items含量 Content總磷 TP0.60可利用磷 AP0.35色氨酸 Try0.20煙酸 Niacin/(mg/kg)32

1.2.2 蛋品質(zhì)測定

試驗第16周，每個重復(fù)選取接近平均蛋重的4枚鴨蛋，測定蛋形指數(shù)、蛋黃顏色、哈氏單位、蛋白高度、蛋殼強度、蛋殼厚度以及蛋黃中脂肪和游離脂肪酸(FFA)含量。蛋形指數(shù)等檢測參考王爽等[12]的測定方法；采用索氏提取法測定蛋黃中脂肪含量，計算蛋黃脂肪比例(蛋黃脂肪重量/蛋黃重)及全蛋脂肪比例(蛋黃脂肪重量/蛋重)；蛋黃中游離脂肪酸含量采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒測定。

1.2.3 血漿生化指標測定

試驗第16周，每個重復(fù)隨機選取2只試驗鴨，翅靜脈采血10 mL，肝素鈉抗凝，4 ℃下3 000 r/min離心制備血漿。血漿尿酸(UA)、葡萄糖(GLU)、膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒測定。

1.2.4 肝臟脂類代謝指標測定

試驗鴨采血后屠宰，打開腹腔采集肝臟樣品，于-80 ℃凍存，測定肝臟脂肪含量及肝臟中膽固醇和甘油三酯含量。肝臟脂肪含量采用索氏提取法測定；肝臟勻漿后采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒測定膽固醇和甘油三酯含量。

1.2.5 肝臟脂類代謝相關(guān)基因表達測定

根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫中鴨過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferators-activated receptor γ，PPARγ)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase，F(xiàn)AS)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1(sterol regulatory element binding protein 1，SREBP1)及載脂蛋白A1(apolipoprotein A1，ApoA1)序列，利用Primer 6.0和Oligo 7.0設(shè)計實時熒光定量PCR(qRT-PCR)引物，并由生工生物工程(上海)股份有限公司完成引物合成，引物序列見表2。采用TRIzol Reagent提取肝臟總RNA，采用Fermentas反轉(zhuǎn)錄試劑盒，以O(shè)ligo dT為引物合成cDNA第1鏈，分別對肝臟中PPARγ、FAS、ApoA1和SREBP1進行qRT-PCR。PCR反應(yīng)在MxPro 3500 qRT-PCR系統(tǒng)中進行，以β-肌動蛋白(β-actin)為內(nèi)參基因，每個樣本重復(fù)3次，采用2-ΔΔCt法計算目的基因的mRNA相對表達量。

表2 引物序列

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SAS 9.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行方差分析，方差分析差異顯著的再進行Duncan氏法多重比較，試驗結(jié)果以平均值和均值標準誤(SEM)形式表示，以P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨產(chǎn)蛋性能的影響

由表3可知，飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨產(chǎn)蛋率、平均蛋重、日產(chǎn)蛋重和料蛋比均無顯著影響(P>0.05)。當(dāng)飼糧煙酸添加水平為90 mg/kg時，產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨平均蛋重比對照組高0.94 g，料蛋比比對照組低0.03，但差異不顯著(P>0.05)。

表3 飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨產(chǎn)蛋性能的影響

2.2 飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨蛋品質(zhì)的影響

由表4可知，隨著飼糧中煙酸添加水平的提高，產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨蛋黃中脂肪含量逐漸下降(P<0.05)，全蛋脂肪比例也逐漸下降(P<0.05)，同時蛋黃中游離脂肪酸含量逐漸升高(P<0.05)；其中，與對照組相比，飼糧添加75和90 mg/kg煙酸顯著降低蛋黃中脂肪含量(P<0.05)，飼糧添加75 mg/kg煙酸顯著降低全蛋脂肪比例(P<0.05)，飼糧添加45、60、75和90 mg/kg煙酸顯著提高蛋黃中游離脂肪酸含量(P<0.05)。飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨蛋形指數(shù)、蛋白高度和哈氏單位等其他蛋品質(zhì)指標無顯著影響(P>0.05)。

表4 飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨蛋品質(zhì)的影響

2.3 飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨血漿生化指標的影響

由表5可知，飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨血漿葡萄糖含量有顯著影響(P<0.05)，隨著飼糧煙酸水平的提高，血漿葡萄糖含量先降低后升高；其中，當(dāng)飼糧煙酸添加水平為60 mg/kg時，血漿葡萄糖含量顯著高于對照組(P<0.05)。飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨血漿尿酸、膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇含量均無顯著影響(P>0.05)。

表5 飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨血漿生化指標的影響

2.4 飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨肝臟脂類代謝指標及其相關(guān)基因表達的影響

由表6可知，飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨肝臟脂肪和甘油三酯含量無顯著影響(P>0.05)，但顯著影響肝臟膽固醇含量(P<0.05)，當(dāng)飼糧煙酸添加水平為15 mg/kg時，肝臟膽固醇含量顯著高于其他組(P<0.05)。飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨肝臟脂類代謝相關(guān)基因FAS、SREBP1和ApoA1的mRNA相對表達量有顯著影響(P<0.05)，當(dāng)飼糧煙酸添加水平為15 mg/kg時，肝臟FAS、SREBP1和ApoA1的mRNA相對表達量最高。

表6 飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨肝臟脂類代謝指標及其相關(guān)基因表達的影響

3 討 論

3.1 飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨產(chǎn)蛋性能的影響

本試驗中，飼糧煙酸水平并未對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨產(chǎn)蛋性能產(chǎn)生顯著影響，各組間產(chǎn)蛋率、日產(chǎn)蛋重及料蛋比相差較小，對照組試驗鴨也并未出現(xiàn)產(chǎn)蛋性能下降及煙酸缺乏等癥狀。目前對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨煙酸的相關(guān)研究很少，在蛋雞[9]及肉雞[10]上的研究結(jié)果與本試驗結(jié)果相一致，在基礎(chǔ)飼糧中添加不同水平煙酸發(fā)現(xiàn)，飼糧煙酸水平對蛋雞和肉雞的生產(chǎn)性能均無顯著影響。Kü?ükersan[13]研究表明，與對照組相比，飼糧添加50 mg/kg煙酸對蛋雞產(chǎn)蛋量和飼料轉(zhuǎn)化效率無顯著影響。Kurtoglu等[14]研究指出，特定階段超過200 mg/kg煙酸可以得到最佳飼料轉(zhuǎn)化效率，改善蛋雞產(chǎn)蛋性能，但在其他階段，各組之間差異不顯著。在產(chǎn)蛋初期蛋鴨的研究中也表明，飼糧煙酸添加水平對其產(chǎn)蛋性能沒有顯著影響[15]。而在種鵝的研究中，飼糧煙酸水平顯著影響種鵝的料蛋比，但對平均日采食量、產(chǎn)蛋率及平均蛋重?zé)o顯著影響[11]。這與本試驗結(jié)果不同，種鵝的體型和飼糧成分與蛋鴨存在一定差異，可能與物種及生理結(jié)構(gòu)不同有關(guān)。由此可知，飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨產(chǎn)蛋性能無顯著影響，因此，本試驗未添加煙酸組山麻鴨并未出現(xiàn)煙酸缺乏癥或產(chǎn)蛋性能下降等情況。

3.2 飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨蛋品質(zhì)的影響

本研究中，飼糧添加不同水平煙酸并未對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨蛋品質(zhì)產(chǎn)生影響。孟連德等[16]研究表明，飼糧添加煙酸對蛋雞蛋殼厚度無顯著影響，這與本試驗結(jié)果相一致。但對蛋鴨產(chǎn)蛋初期的研究發(fā)現(xiàn)，煙酸可以顯著提高蛋鴨蛋殼厚度[15]；劉晨龍等[11]在種鵝上的研究也發(fā)現(xiàn)，煙酸對產(chǎn)蛋期種鵝蛋形指數(shù)、蛋白高度、蛋黃顏色、蛋黃比率和哈氏單位等蛋品質(zhì)指標無顯著影響，但顯著提高蛋殼厚度，上述結(jié)果與本試驗結(jié)果不一致。產(chǎn)蛋初期蛋鴨的試驗周期為4周，種鵝的試驗周期為10周，而本試驗周期為16周，試驗結(jié)果不同可能與試驗周期及物種的不同有關(guān)，隨著煙酸在蛋鴨體內(nèi)的積累，煙酸缺乏導(dǎo)致蛋殼厚度降低的影響逐漸消失。

3.3 飼糧煙酸水平對產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨脂類代謝的影響

本研究中，隨著飼糧煙酸添加水平的提高，產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨血漿甘油三酯、膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量有升高趨勢(差異不顯著)，但血漿葡萄糖含量有顯著變化(先降低后升高)。這一結(jié)果與以往的試驗結(jié)果存在一定差異。劉政等[17]對肉雞的研究中發(fā)現(xiàn)，隨著飼糧煙酸水平的升高，血漿葡萄糖含量有升高的趨勢，但差異不顯著。劉晨龍等[11]在種鵝的研究中也發(fā)現(xiàn)，飼糧煙酸水平并未對血漿葡萄糖含量產(chǎn)生顯著影響。在人體的研究中，煙酸主要發(fā)揮降低血液膽固醇和脂類含量的功效[7]。劉偉等[18]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加1 000 mg/kg 煙酸可以顯著降低吉富羅非魚血清甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇和游離脂肪酸含量。Kurtoglu等[14]和Zhang等[19]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加煙酸可以降低蛋雞和種鵝血液中的甘油三酯和膽固醇含量。文杰等[9]研究指出，蛋雞飼糧添加20 mg/kg煙酸可以顯著降低血漿膽固醇、β-脂蛋白、甘油三酯和游離脂肪酸含量。李春燕等[20]對獺兔的研究表明，飼糧煙酸添加水平對血漿甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇含量無顯著影響，但影響血清膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇和游離脂肪酸含量。不過，在馬廣興等[21]對北京鴨的研究中，飼糧煙酸水平可能影響血液總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇和高密度脂蛋白膽固醇含量，但各組之間差異不顯著，這與本試驗結(jié)果一致。蔣瑞瑞[22]對肉雞的研究也發(fā)現(xiàn)，飼糧添加120 mg/kg煙酸能夠顯著提高56日齡血漿膽固醇、甘油三酯和游離脂肪酸含量，并且不同品種間存在差異。以上結(jié)果表明，煙酸對血漿甘油三酯及膽固醇的作用可能因物種及添加水平不同而存在差異。

目前對于蛋禽的研究中，煙酸對蛋黃中脂肪及游離脂肪酸的影響的研究較少。Kurtoglu等[14]研究表明，煙酸顯著降低蛋雞蛋黃重量，但未測定蛋中脂肪和游離脂肪酸含量。本研究中，飼糧煙酸添加水平顯著影響山麻鴨蛋黃中脂肪含量及全蛋脂肪比例，并影響蛋黃中游離脂肪酸含量，且在飼糧煙酸添加水平為15 mg/kg時，肝臟膽固醇含量及脂類代謝相關(guān)基因FAS、SREBP1和ApoA1的mRNA相對表達量最高。PPARγ參與調(diào)控脂類代謝相關(guān)基因的表達，如可以促進脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白、脂肪酸結(jié)合蛋白及脂蛋白質(zhì)等促進脂肪酸存儲基因的表達[23]，抑制如過氧化物酶體脂肪酸氧化酶系、脂酰輔酶A去飽和酶等促脂解和脂肪酸釋放的基因表達，但本研究中煙酸并未對蛋鴨肝臟PPARγ基因表達產(chǎn)生影響。FAS是脂肪酸合成過程中的關(guān)鍵基因[24]。SREBP1是位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的細胞內(nèi)膽固醇敏感器，通過胰島素誘導(dǎo)基因-固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白(Insig-Srebp-Scap)途徑與FAS和ApoA1共同對細胞內(nèi)膽固醇進行反饋調(diào)節(jié)，其表達量的升高與肝臟膽固醇的含量升高相一致。以上結(jié)果表明，飼糧中的煙酸通過對相關(guān)基因表達的影響調(diào)控肝臟膽固醇含量，但煙酸促進蛋黃中脂類分解的作用機理仍需進一步研究。

4 結(jié) 論

① 綜合本試驗產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)結(jié)果，玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧中不添加煙酸對地面平養(yǎng)產(chǎn)蛋高峰期山麻鴨產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)無負面影響。

② 當(dāng)玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧中煙酸添加水平超過75 mg/kg時，鴨蛋蛋黃中脂肪分解增加，蛋黃中脂肪含量下降。