薛 銀，吳贇竑，袁 璐，柴 娟，朱 琳，吳雪軍，張紅麗，謝榮輝，陳 潔，張傳亮，趙靈燕

(浙江省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，浙江 杭州 311119)

在“人病獸防、關(guān)口前移”的大背景下[1]，動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)作用愈發(fā)凸顯。獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室作為動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)的重要組成部分，承擔(dān)著重大動(dòng)物疫病(包括人獸共患病)的監(jiān)測(cè)、檢測(cè)、診斷、流行病學(xué)調(diào)查、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和疫情信息的收集、匯總、分析、上報(bào)等技術(shù)性工作[2]，在動(dòng)物疫病的預(yù)防和控制方面具有舉足輕重的作用。獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的建立是有效維護(hù)動(dòng)物健康、保持畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)收益的重要建設(shè)，同時(shí)對(duì)動(dòng)物疫病進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)是遏制動(dòng)物疫病傳播的有效方式[3]。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部加強(qiáng)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室管理的主要抓手，也是科學(xué)評(píng)價(jià)和提高實(shí)驗(yàn)室管理水平和檢測(cè)能力的重要手段[4]。為加強(qiáng)浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)，提升動(dòng)物疫情監(jiān)測(cè)預(yù)警水平，自2011年開(kāi)始，浙江省每年組織市本級(jí)和縣(市、區(qū))兩級(jí)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展動(dòng)物疫病預(yù)防控制系統(tǒng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)，作為檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力的重要依據(jù)之一[5，6]，了解和掌握各實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平，并分析原因，查找不足，逐步改進(jìn)，進(jìn)一步提升檢測(cè)能力水平。本文分析了2018—2021年浙江省的市、縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)結(jié)果，希望通過(guò)此項(xiàng)工作進(jìn)一步加強(qiáng)浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)，提升動(dòng)物疫情監(jiān)測(cè)預(yù)警水平。

1 材料與方法

1.1 比對(duì)項(xiàng)目 2018—2021年浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)共設(shè)置檢測(cè)項(xiàng)目20個(gè)(表1)，其中非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)、布魯氏菌病抗體檢測(cè)分別涉及3次、A型口蹄疫抗體檢測(cè)涉及2次。各設(shè)區(qū)市的市本級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室參加全部項(xiàng)目，各縣(市、區(qū))實(shí)驗(yàn)室每3年至少參加1次能力比對(duì)，具有非洲豬瘟檢測(cè)授權(quán)的實(shí)驗(yàn)室至少參加非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)項(xiàng)目，每次選擇2～3個(gè)比對(duì)項(xiàng)目。

表1 2018—2021年浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)項(xiàng)目

1.2 比對(duì)方法、標(biāo)準(zhǔn)和試劑 2018—2021年不同比對(duì)項(xiàng)目選取的方法、依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)和所用試劑見(jiàn)表2。

表2 2018—2021年浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)項(xiàng)目方法、標(biāo)準(zhǔn)和試劑

1.3 比對(duì)樣品 由國(guó)家參考實(shí)驗(yàn)室提供或相應(yīng)試劑公司生產(chǎn)，由浙江省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證、編號(hào)和分裝，每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目設(shè)5～6份盲樣，各參考值樣品數(shù)目不定。

1.4 比對(duì)樣品和檢測(cè)試劑盒遞送 為保證檢測(cè)的有效性，比對(duì)樣品存放于-20 ℃低溫冰箱，試劑盒按照要求存放。2018—2020年，比對(duì)樣品均由各實(shí)驗(yàn)室專業(yè)人員到省疫控中心實(shí)驗(yàn)室領(lǐng)取。2021年由于新冠肺炎疫情影響，比對(duì)樣品由省疫控中心于24 h內(nèi)寄到各參加比對(duì)實(shí)驗(yàn)室。

1.5 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1 高致病性禽流感H5亞型Re-8株抗體檢測(cè)、高致病性禽流感H7亞型抗體檢測(cè)、O型口蹄疫抗體檢測(cè)、H5亞型禽流感Re-11株抗體檢測(cè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 全部比對(duì)樣品效價(jià)檢測(cè)值在參考值±1(包括參考值±1)范圍內(nèi)，判為結(jié)果正確；有1個(gè)及以上樣品效價(jià)檢測(cè)值偏離參考值±2及以上，判為結(jié)果存在較大偏差。

1.5.2 A型口蹄疫抗體檢測(cè)、布魯氏菌病抗體檢測(cè)(試管凝集試驗(yàn)方法)、新城疫抗體檢測(cè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 全部比對(duì)樣品效價(jià)檢測(cè)值在參考值±1(包括參考值±1)范圍內(nèi)，判為結(jié)果正確；有1個(gè)及以上樣品效價(jià)檢測(cè)值偏離參考值±1以上，判為結(jié)果存在較大偏差。

1.5.3 高致病性H7亞型禽流感病毒核酸鑒別檢測(cè)、豬瘟病毒核酸檢測(cè)、口蹄疫病毒和塞內(nèi)卡病毒核酸鑒別檢測(cè)、非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)、小反芻獸疫病毒核酸檢測(cè)、H5亞型禽流感病毒核酸檢測(cè)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸通用型檢測(cè)、口蹄疫病毒核酸檢測(cè)、布魯氏菌病抗體檢測(cè)(c-ELISA方法)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 全部比對(duì)樣品檢測(cè)值與參考值完全一致，判為結(jié)果正確；與參考值不一致，判為結(jié)果存在較大偏差。

2 比對(duì)結(jié)果

2.1 總體情況 2018年，共有52個(gè)市、縣級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室(10個(gè)市級(jí)、42個(gè)縣級(jí))參加比對(duì)。2019年，共有50個(gè)市、縣級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室(11個(gè)市級(jí)、39個(gè)縣級(jí))參加比對(duì)。2020年，共有67個(gè)市、縣級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室(11個(gè)市級(jí)、56個(gè)縣級(jí))參加比對(duì)。2021年，共有77個(gè)市、縣級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室(11個(gè)市級(jí)、66個(gè)縣級(jí))參加比對(duì)，參加比對(duì)的實(shí)驗(yàn)室數(shù)量整體呈上升趨勢(shì)。2018—2021年參加比對(duì)實(shí)驗(yàn)室共檢測(cè)盲樣4 775份，檢測(cè)結(jié)果正確樣品4 649份，樣品平均檢測(cè)正確率為97.34%，2018—2020年樣品正確率逐步提升，2020年達(dá)到97.83%，2021年樣品正確率略有下降，為97.19%，見(jiàn)表3。

表3 2018—2021年各年度檢測(cè)能力比對(duì)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

2.2 不同檢測(cè)項(xiàng)目比對(duì)結(jié)果 2018—2021年共開(kāi)展了15個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的比對(duì)，不同檢測(cè)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室正確率介于78.57%～100%，見(jiàn)表4。

表4 2018—2021年獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室不同檢測(cè)項(xiàng)目比對(duì)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

續(xù)表

2.3 不同檢測(cè)方法比對(duì)結(jié)果 根據(jù)檢測(cè)的樣品不同，檢測(cè)類型分為血清學(xué)檢測(cè)和病原學(xué)監(jiān)測(cè)。血清學(xué)檢測(cè)包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、血凝抑制試驗(yàn)(HI)、試管凝集試驗(yàn)(SAT)。病原學(xué)檢測(cè)方法主要包括反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法和熒光RT-PCR。以上檢測(cè)方法基本涵蓋了市縣實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的常用方法，不同檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果正確率平均值介于87.86%～93.36%，見(jiàn)表5。

表5 2018—2021年各年度不同檢測(cè)方法比對(duì)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3 討論

2018—2021年，參加比對(duì)實(shí)驗(yàn)室數(shù)量不斷增加，由于檢測(cè)項(xiàng)目不同，實(shí)驗(yàn)室正確率在73.08%～82.00%波動(dòng)。與2015年實(shí)驗(yàn)室正確率55%[7]、2016年實(shí)驗(yàn)室正確率82.81%[8]、2017年實(shí)驗(yàn)室正確率56.36%[6]相比，總體的實(shí)驗(yàn)室正確率在不斷提升，說(shuō)明各級(jí)系統(tǒng)內(nèi)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力和水平在不斷提升。

從檢測(cè)項(xiàng)目來(lái)看，浙江省每年設(shè)置的檢測(cè)能力比對(duì)項(xiàng)目緊緊圍繞農(nóng)業(yè)農(nóng)村部關(guān)于重大動(dòng)物疫病防控要求和浙江省實(shí)際情況，重點(diǎn)突出禽流感、非洲豬瘟、口蹄疫等重大動(dòng)物疫病，同時(shí)又結(jié)合市、縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)工作，既突出重點(diǎn)又貼近實(shí)際。禽流感、口蹄疫、新城疫等抗體檢測(cè)項(xiàng)目是各級(jí)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的檢測(cè)項(xiàng)目，各參與比對(duì)實(shí)驗(yàn)室正確率保持在較高水平。2019—2021年連續(xù)3年，浙江省獲得非洲豬瘟檢測(cè)能力授權(quán)的所有市縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室均參加了非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)比對(duì)，2019年全部正確，2020年和2021年各有3個(gè)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果出現(xiàn)偏差，經(jīng)分析可能與操作不當(dāng)、陽(yáng)性對(duì)照樣品污染其他樣品有關(guān)。隨著非洲豬瘟檢測(cè)量加大，實(shí)驗(yàn)室污染風(fēng)險(xiǎn)也隨之增加，需進(jìn)一步加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室生物安全防范。2018年和2020年都進(jìn)行了A型口蹄疫抗體的檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)室正確率分別為96.15%和89.66%。

從檢測(cè)方法來(lái)看，各檢測(cè)項(xiàng)目選取的檢測(cè)方法與國(guó)家疫控中心對(duì)各省級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)所用方法一致[4,9]。PCR類的檢測(cè)樣品結(jié)果正確率平均值達(dá)92.38%，其中熒光PCR的檢測(cè)正確率最高，2020年H5亞型禽流感病毒核酸檢測(cè)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室正確率達(dá)到100%。這可能與熒光PCR檢測(cè)為定性檢測(cè)，儀器直接讀取數(shù)據(jù)，人為干擾因素較少有關(guān)[10]。2020年新城疫抗體檢測(cè)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室正確率為86.67%，2021年H5亞型禽流感Re-11株抗體檢測(cè)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室正確率僅為78.57%，這與HI試驗(yàn)所用紅細(xì)胞、血凝抗原需要實(shí)驗(yàn)室自行制備，結(jié)果需要操作人員人為判定，存在主觀差異有關(guān)[11]。2018年和2020年布魯氏菌病抗體檢測(cè)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室正確率分別為97.83%和88.89%，這與SAT需要操作人員主觀判定結(jié)果，受操作熟練程度影響較大有關(guān)[12]。HI和SAT作為實(shí)驗(yàn)室常用檢測(cè)技術(shù)，大部分實(shí)驗(yàn)室操作比較熟練，結(jié)果符合率穩(wěn)定性較好，但仍有部分實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)問(wèn)題，這是由于定量檢測(cè)需要實(shí)驗(yàn)室人員的綜合判定能力和經(jīng)驗(yàn)，而機(jī)構(gòu)改革后，實(shí)驗(yàn)室人員流動(dòng)性較大、部分新進(jìn)實(shí)驗(yàn)室人員工作經(jīng)驗(yàn)不足，影響結(jié)果判定。2020年A型口蹄疫抗體檢測(cè)有6個(gè)實(shí)驗(yàn)室的部分樣品檢測(cè)值與參考值存在較大偏差，這可能是由于ELISA檢測(cè)方法又分為競(jìng)爭(zhēng)ELISA、液相阻斷ELISA等眾多種類，部分實(shí)驗(yàn)室對(duì)不同檢測(cè)方法檢測(cè)熟練度欠缺、檢測(cè)規(guī)范性和準(zhǔn)確性不夠，導(dǎo)致ELISA檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定性不高[13]。

通過(guò)近4年的檢測(cè)能力比對(duì)工作，部分實(shí)驗(yàn)室還存在一些問(wèn)題，主要表現(xiàn)在：一是部分實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測(cè)規(guī)范性和準(zhǔn)確性有待提高；二是部分實(shí)驗(yàn)室的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)需要加強(qiáng)；三是原始記錄和報(bào)告填寫(xiě)有待改進(jìn)，參加比對(duì)的部分實(shí)驗(yàn)室存在檢測(cè)結(jié)果報(bào)告表填報(bào)不規(guī)范，原始記錄填寫(xiě)不完整、不準(zhǔn)確、沒(méi)有可追溯性，檢測(cè)報(bào)告中檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)引用錯(cuò)誤、缺少關(guān)鍵信息等問(wèn)題，需進(jìn)一步改進(jìn)提升。

下一步工作建議：一是加強(qiáng)人員力量培訓(xùn)，針對(duì)比對(duì)工作出現(xiàn)偏差的實(shí)驗(yàn)室，選派人員參加省級(jí)技術(shù)和理論知識(shí)輪訓(xùn)，切實(shí)提升實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力水平；二是開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力飛行檢查，在比對(duì)工作開(kāi)展期間，省級(jí)選派相關(guān)技術(shù)人員抽檢市、縣實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行指導(dǎo)監(jiān)督，幫助提升實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力；三是進(jìn)一步加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室管理，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力提升需要強(qiáng)大的軟件和硬件支撐，建議進(jìn)一步加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系和生物安全體系建設(shè)，以適應(yīng)新要求、新任務(wù)。

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室是動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)工作的核心能力之一，統(tǒng)計(jì)近4年的比對(duì)結(jié)果，浙江省基層獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室整體檢測(cè)水平不斷提升，說(shuō)明浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室整體檢測(cè)能力水平穩(wěn)步提升，對(duì)浙江省動(dòng)物疫病防控以及食品安全和公共衛(wèi)生安全起到了重要技術(shù)支撐作用。同時(shí)要進(jìn)一步查缺補(bǔ)漏，進(jìn)一步提升檢測(cè)能力和水平。