楊愛龍，韓雪，于波，闞成國，喻少雷

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150000；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150000；3.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150000）

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為創(chuàng)面愈合是一個“正邪相爭，腐去肌生，煨膿長肉”的過程[1-2]。近年來諸多學(xué)者在研究應(yīng)用外用中藥促進(jìn)創(chuàng)面愈合方面作了許多工作，尤其是在感染性創(chuàng)面愈合方面進(jìn)行了大量研究。中醫(yī)藥在促進(jìn)創(chuàng)面愈合方面療效確切[3-4]。創(chuàng)面感染常見致病菌主要為金黃色葡萄球菌及大腸桿菌，其中大腸桿菌感染多與腹腔消化道相關(guān)，研究相對較少，但其對肛腸疾病術(shù)后創(chuàng)面的愈合意義重大[5]。馬勃屬真菌類中藥，最早載于《名醫(yī)別錄》。馬勃味辛，性平，具有清肺利咽、止血等功效，外用治療創(chuàng)傷出血、惡瘡效果較佳。研究證實(shí)，馬勃藥材對于大腸桿菌具有明確的抑制作用[6]。馬勃具有明顯的抗炎、抑菌、止血、抗氧化、促進(jìn)創(chuàng)面愈合等藥理活性[7]，臨床常用于壓瘡、褥瘡、凍瘡、糖尿病壞疽等難治性創(chuàng)面的修復(fù)[8]?；诖?，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院將其制成油膏劑，用于肛腸病術(shù)后感染性創(chuàng)面的外敷治療，效果顯著。為進(jìn)一步驗(yàn)證其療效并探討其抗炎、抑菌的作用機(jī)制，故本實(shí)驗(yàn)基于NLRP3/Caspase-1炎癥通路探討馬勃油膏對兔大腸桿菌感染性創(chuàng)面愈合情況及炎癥因子表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 馬勃藥材（安徽普仁中藥飲片有限公司，批號：2020142），由王爽主任藥師鑒定藥材為正品；紫草生肌搽劑（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院院內(nèi)制劑，批準(zhǔn)文號：黑藥制字Z20110185）。IL-1β ELISA檢測試劑盒（批號：WL210530）、TNF-α ELISA檢測試劑盒（批號：WL201104）、HE染色試劑盒（批號：WL200428）均購自沈陽萬類生物科技有限公司；組織裂解液（批號：202004311）、ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒（批號：20210307）均購自上海翌圣生物科技股份有限公司；BCA總蛋白定量測定試劑盒（批號：20200972）購自南京建成生物工程研究所；兔抗NLRP3 抗體（批號：ab205084）、兔抗Caspase-1抗體（批號：ab205316）、HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗（批號：ab210372）均購自英國Abcam公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 XDW-6J型中藥超微粉碎機(jī)（濟(jì)南達(dá)微機(jī)械有限公司）；BKQ-Z501型高壓蒸汽滅菌器（山東博科消毒設(shè)備有限公司）；Labtrip RZ-40型離心機(jī)（南京貝登醫(yī)療股份有限公司）；Stuart SHM2型組織勻漿器（英國Bibby-Stuart公司）；DH36001型電熱恒溫培養(yǎng)箱（天津泰斯特公司）；BX53型顯微鏡（日本OLUMPUS公司）；RM2235型石蠟切片機(jī)（德國Leica公司）；Multiskan FC型其酶標(biāo)儀（美國BIOTEK公司）；SDS-PAGE凝膠電泳儀（美國Bio-rad公司）；NW10LVF型超純水系統(tǒng)（香港healforce公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物 新西蘭大白兔24只，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK（黑）2018-003，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號：SCXK-（黑）2019-0011。6個月齡，雌雄各半，體質(zhì)量為（2.50±0.25）kg，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。飼養(yǎng)條件：單籠喂養(yǎng)，溫度為18～22 ℃，濕度為40%～70%，每12 h晝夜交替循環(huán)，自由飲水、攝食。本研究經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會審批通過，倫理批號：20170514-23。

1.4 馬勃油膏的制備 取馬勃藥材適量，以中藥超微粉碎機(jī)粉碎成約為300目的馬勃超微粉，將凡士林隔水加熱融化后倒入無菌空玻璃瓶中，在60 ℃加熱狀態(tài)下，少量多次加入馬勃超微粉，并用攪拌匙充分?jǐn)嚢?，至全部藥粉與凡士林油充分融合，即得馬勃油膏（馬勃超微粉與凡士林的質(zhì)量比為1∶5），熱壓滅菌（115 ℃，67 kPA）30 min后進(jìn)行后續(xù)研究。

1.5 感染性創(chuàng)面模型制備與分組 將24只兔隨機(jī)分為空白對照組、模型組、馬勃油膏組和紫草生肌搽劑組，每組6只。大各組給予10%水合氯醛腹腔注射麻醉，剃凈兔背部毛，面積大約20 cm×15 cm，碘伏常規(guī)消毒，在距兔脊柱旁開2 cm處，用直徑1.5 cm打孔器切割圓形創(chuàng)面3個，深達(dá)皮下深筋膜，傷口厚度約0.3 cm，壓迫充分止血?？瞻讓φ战M創(chuàng)面涂1 mL生理鹽水，其余3組在創(chuàng)面涂配制好的大腸桿菌PBS溶液（1×109CFU/mL）1 mL，以凡士林敷料、膠帶固定預(yù)防創(chuàng)面干燥，實(shí)驗(yàn)動物自由飲水、攝食，48 h后去除覆蓋物，觀察見瘡緣周圍紅腫，表面膿苔附著，紅外線測溫儀測試局部溫度明顯升高，則為造模成功[9]。

1.6 給藥方法 各組兔自造模成功后第2天開始用藥，馬勃油膏組兔每日換藥時先用生理鹽水清洗創(chuàng)面，再以馬勃油膏1 mL外敷，用敷料包扎固定，每日換藥1次；紫草生肌搽劑組兔每日先用生理鹽水清洗創(chuàng)面，再以浸潤紫草生肌搽劑的紗條1塊外敷，用相同敷料包扎固定，每日換藥1次；空白對照組和模型組兔每日僅用生理鹽水清洗創(chuàng)面1次，用相同敷料包扎固定，每日換藥1次。連續(xù)給藥14 d。

1.7 觀察指標(biāo)

1.7.1 創(chuàng)面形態(tài) 每日換藥時觀察兔的創(chuàng)面大小、顏色、有無滲出、有無紅腫及結(jié)痂、出血情況。

1.7.2 創(chuàng)面愈合率 分別于造模后第3、7、14天使用滌綸投影膜描出創(chuàng)面形態(tài)并裁剪創(chuàng)面紙，創(chuàng)面紙用電子分析天平稱量，計算創(chuàng)面愈合率。創(chuàng)面愈合率（%）=[（原始創(chuàng)面紙片質(zhì)量-愈合創(chuàng)面紙片質(zhì)量）/原始創(chuàng)面紙片質(zhì)量]×100%。

1.7.3 創(chuàng)面組織病理變化 于造模后第3、7、14天分別切取兔創(chuàng)面組織，經(jīng)包埋切片、脫蠟至水、蘇木素染色、鹽酸酒精分化、自來水返藍(lán)、伊紅染色、梯度酒精脫水、透明、封片等步驟處理后，置顯微鏡下觀察各組兔創(chuàng)面組織的病理形態(tài)變化。

1.7.4 創(chuàng)面組織中的白介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量 造模后第3、7、14天，在1%利多卡因局部麻醉后，在無菌條件下沿兔每個創(chuàng)面外緣約0.1 cm處切下少量創(chuàng)面組織，精密稱量后剪碎，放入5 mL小燒杯內(nèi)，加入預(yù)冷的0.9%氯化鈉溶液適量，以組織勻漿器勻漿后，3 000 r/min離心10 min，取上層勻漿液，采用ELISA法測定創(chuàng)面組織勻漿液中IL-1β、TNF-α含量，參照ELISA試劑盒說明書嚴(yán)格操作。

1.7.5 創(chuàng)面組織中NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá) 采用Western blotting檢測創(chuàng)面組織中NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)。造模后第3、7、14天分別切取兔創(chuàng)面組織，以PBS溶液清洗干凈，剪碎，加入足量新鮮配制的組織裂解液，4 ℃下勻漿30 min使組織充分裂解，4 000 r/min離心15 min，取上清液，BCA試劑盒測定總蛋白濃度。SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白，濕法轉(zhuǎn)至PVDF膜，5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，TBST洗滌1次×10 min，滴加稀釋的NLRP3、Caspase-1一抗（1∶500），4 ℃過夜，TBST洗滌3次，10 min/次，滴加HRP標(biāo)記的二抗（1∶1 000），室溫孵育1 h，TBST洗滌3次，10 min/次，ECL顯色、曝光、定影，采用Image J凝膠成像分析軟件分析膠片，以NLRP3、Caspase-1蛋白與內(nèi)參GAPDH的光密度比值表示蛋白的相對表達(dá)量。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 26.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料符合正態(tài)分布且方差齊，以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（±s）表多組比較，采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。重復(fù)測量計量資料采用重復(fù)測量方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 創(chuàng)面觀察 各組兔的精神狀態(tài)尚可、進(jìn)食情況正常、無死亡?？瞻讓φ战M兔創(chuàng)面紅腫較輕，隨時間消退最快，滲血、滲液較少，肉芽組織生長旺盛，創(chuàng)面結(jié)痂、愈合速度最快；模型組兔創(chuàng)面紅腫明顯，隨時間消退緩慢，滲血、滲液較多，后期可見明顯化膿，肉芽組織生長緩慢，創(chuàng)面未見結(jié)痂，愈合速度最慢；馬勃油膏組和紫草生肌搽劑組兔創(chuàng)面紅腫較輕，隨時間消退較快，滲血、滲液較少，未見化膿，肉芽組織生長旺盛，創(chuàng)面結(jié)痂、愈合的速度較快。（見表1）

表1 各組兔創(chuàng)面的一般情況

2.2 各組兔創(chuàng)面愈合率比較 所有兔創(chuàng)面愈合率在不同時間點(diǎn)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），即存在時間效應(yīng)，4組均如此；4組兔創(chuàng)面愈合率均呈逐漸升高趨勢（P＜0.05）。4組兔創(chuàng)面愈合率總體比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），即存在分組效應(yīng)；在第3、7、14天，模型組、馬勃油膏組和紫草生肌搽劑組兔創(chuàng)面愈合率均明顯低于空白對照組（P＜0.05）；馬勃油膏組和紫草生肌搽劑組兔創(chuàng)面愈合率均明顯高于模型組（P＜0.05）；馬勃油膏組兔創(chuàng)面愈合率與紫草生肌搽劑組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。時間因素與分組因素存在交互效應(yīng)（P＜0.05），各組兔的創(chuàng)面愈合率均隨時間延長呈現(xiàn)增高趨勢。（見表2、圖1）

表2 各組兔創(chuàng)面愈合率比較（±s，%）

表2 各組兔創(chuàng)面愈合率比較（±s，%）

注：F時間主效應(yīng)=10.387，P時間主效應(yīng)=0.000；F分組主效應(yīng)=225.176，P分組主效應(yīng)=0.000；F交互效應(yīng)=106.547，P交互效應(yīng)=0.000；與空白對照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與第3天比較，cP＜0.05；與第7天比較，dP＜0.05

圖1 創(chuàng)面愈合率交互效應(yīng)輪廓圖

2.3 各組兔創(chuàng)面組織病理學(xué)突發(fā)情況 HE染色結(jié)果顯示：造模后第3天，空白對照組可見新生表皮及少量肉芽組織生長，皮下組織炎癥細(xì)胞浸潤較少；其余各組皮下組織均可見大量炎癥細(xì)胞浸潤，新生表皮及肉芽組織均不明顯。造模后第7天，空白對照組可見創(chuàng)面新生表皮增厚及少量增生，皮下炎癥細(xì)胞浸潤較之前減少，創(chuàng)面內(nèi)可見大量新生肉芽組織、纖維細(xì)胞及小血管規(guī)則排列；模型組皮下組織仍可見大量炎癥細(xì)胞浸潤，少量肉芽組織生成并伴小膿腫；馬勃油膏組和紫草生肌搽劑組均可見表皮增厚及增生，皮下炎癥細(xì)胞明顯減少，肉芽組織及毛細(xì)血管生長明顯，創(chuàng)面表面可見少量炎性滲出物。造模后第14天，空白對照組表皮基本接近正常上皮，皮下纖維細(xì)胞及小血管排列整齊；模型組皮下炎癥細(xì)胞增多，表皮膿腫及滲出較之前更明顯；馬勃油膏組和紫草生肌搽劑組創(chuàng)面新生表皮較正常稍厚，皮下炎癥細(xì)胞較少見，粗大纖維細(xì)胞增多。可見，隨著時間的延長，模型組創(chuàng)面的炎癥細(xì)胞浸潤程度逐漸嚴(yán)重，其余各組均明顯減輕。（見圖2）

圖2 各組兔創(chuàng)面組織HE 染色圖（200×）

2.4 各組兔創(chuàng)面組織中IL-1β、TNF-α含量比較 所有兔創(chuàng)面組織中IL-1β、TNF-α含量在不同時間點(diǎn)比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），即存在時間效應(yīng)，4組均如此；模型組兔創(chuàng)面組織中IL-1β、TNF-α含量呈逐漸升高趨勢（P＜0.05），其余3組兔創(chuàng)面組織中IL-1β、TNF-α含量呈先升高再降低趨勢（P＜0.05）。4組兔創(chuàng)面組織中IL-1β、TNF-α含量總體比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），即存在分組效應(yīng)；在第3、7、14天，模型組、馬勃油膏組和紫草生肌搽劑組兔創(chuàng)面組織中IL-1β、TNF-α含量均明顯高于空白對照組（P＜0.05）；馬勃油膏組和紫草生肌搽劑組兔創(chuàng)面組織中IL-1β、TNF-α含量均明顯低于模型組（P＜0.05）；馬勃油膏組兔創(chuàng)面組織中IL-1β、TNF-α含量與紫草生肌搽劑組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。時間因素與分組因素存在交互效應(yīng)（P＜0.05）。（見表3～4、圖3～4）

圖3 創(chuàng)面組織中IL-1β 含量交互效應(yīng)輪廓圖

表3 各組兔創(chuàng)面組織中IL-1β 含量的比較（±s，ng/L）

表3 各組兔創(chuàng)面組織中IL-1β 含量的比較（±s，ng/L）

注：F時間主效應(yīng)=44.083，P時間主效應(yīng)=0.000；F分組主效應(yīng)=365.407，P分組主效應(yīng)=0.000；F交互效應(yīng)=267.152，P交互效應(yīng)=0.000；與空白對照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與第3天比較，cP＜0.05；與第7天比較，dP＜0.05

表4 各組兔創(chuàng)面組織中TNF-α 含量的比較（±s，ng/L）

表4 各組兔創(chuàng)面組織中TNF-α 含量的比較（±s，ng/L）

注：F時間主效應(yīng)=23.076，P時間主效應(yīng)=0.000；F分組主效應(yīng)=189.722，P分組主效應(yīng)=0.000；F交互效應(yīng)=125.301，P交互效應(yīng)=0.000；與空白對照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與第3天比較，cP＜0.05；與第7天比較，dP＜0.05

圖4 創(chuàng)面組織中TNF-α 含量交互效應(yīng)輪廓圖

2.5 各組兔創(chuàng)面組織中NLRP3、Caspase-1 蛋白表達(dá)比較 所有兔創(chuàng)面組織中NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)在不同時間點(diǎn)比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），即存在時間效應(yīng)，4組均如此；模型組兔創(chuàng)面組織中NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)呈逐漸升高趨勢（P＜0.05），其余3組兔創(chuàng)面組織中NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)呈逐漸降低趨勢（P＜0.05）。4組兔創(chuàng)面組織中NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)總體比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），即存在分組效應(yīng)；在第3、7、14天，模型組、馬勃油膏組和紫草生肌搽劑組兔創(chuàng)面組織中NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)均明顯高于空白對照組（P＜0.05）；馬勃油膏組和紫草生肌搽劑組兔創(chuàng)面組織中NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)均明顯低于模型組（P＜0.05）；馬勃油膏組兔創(chuàng)面組織中NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)與紫草生肌搽劑組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。時間因素與分組因素存在交互效應(yīng)（P＜0.05）。（見表5～6、圖5～7）

圖5 各組兔創(chuàng)面組織中NLRP3、Caspase-1 蛋白表達(dá)Western blotting圖

表5 各組兔創(chuàng)面組織中NLRP3 蛋白表達(dá)比較（±s）

表5 各組兔創(chuàng)面組織中NLRP3 蛋白表達(dá)比較（±s）

注：F時間主效應(yīng)=32.405，P時間主效應(yīng)=0.000；F分組主效應(yīng)=283.152，P分組主效應(yīng)=0.000；F交互效應(yīng)=185.076，P交互效應(yīng)=0.000；與空白對照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與第3天比較，cP＜0.05；與第7天比較，dP＜0.05

圖6 創(chuàng)面組織中NLRP3 蛋白表達(dá)交互效應(yīng)輪廓圖

表6 各組創(chuàng)面組織中Caspase-1 蛋白表達(dá)比較（±s）

表6 各組創(chuàng)面組織中Caspase-1 蛋白表達(dá)比較（±s）

注：F時間主效應(yīng)=37.102，P時間主效應(yīng)=0.000；F分組主效應(yīng)=266.052，P分組主效應(yīng)=0.000；F交互效應(yīng)=153.471，P交互效應(yīng)=0.000；與空白對照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與第3天比較，cP＜0.05；與第7天比較，dP＜0.05

圖7 創(chuàng)面組織中Caspase-1 蛋白表達(dá)交互效應(yīng)輪廓圖

3 討 論

肛門直腸疾病在臨床上多以手術(shù)為主要治療方式，切口一般為開放性創(chuàng)面，加之術(shù)后腸道菌群的失衡及糞便刺激，易導(dǎo)致創(chuàng)面切口發(fā)展為慢性感染創(chuàng)面，影響創(chuàng)面的愈合[10]。在肛腸術(shù)后創(chuàng)面愈合的過程中，最為常見的細(xì)菌感染是大腸桿菌感染，由其引發(fā)的創(chuàng)面炎癥反應(yīng)會進(jìn)一步加劇創(chuàng)面感染，導(dǎo)致切口愈合緩慢[11]。針對感染性創(chuàng)面，徹底清潔創(chuàng)面、及時給予藥物治療干預(yù)、有效抗感染，避免細(xì)菌對傷口的進(jìn)一步破壞對于促進(jìn)創(chuàng)面早日愈合尤為關(guān)鍵[12-13]。近年來，中藥外用在促進(jìn)感染性創(chuàng)面愈合方面越來越體現(xiàn)出其價值和優(yōu)勢[14-15]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，感染性創(chuàng)面多為外感邪毒入里化熱，熱盛肉腐成膿而來，正如《靈樞·癰疽》所云：“營氣稽留于經(jīng)脈之中，則血泣而不行，不行則衛(wèi)氣從之而不通，壅遏而不得行，故熱。大熱不止，熱勝則腐肉，肉腐則為膿”。故治療應(yīng)以外治祛毒為主，兼以內(nèi)治調(diào)理正氣。馬勃屬于真菌類中藥，具有清肺利咽、止血療瘡等功效?！吨腥A人民共和國藥典》中記載馬勃為治療創(chuàng)傷的直接外用中藥之一[16]。馬勃用于治療惡瘡的記載最早見于《名醫(yī)別錄》：“味辛，平，無毒。主惡瘡、馬疥?！盵17]《本草從新》謂之：“外用敷諸瘡、良?！盵18]馬勃已逐漸成為臨床治療各種外傷出血、鼻衄、咽喉腫痛、惡瘡、潰瘍的常用藥物。臨床實(shí)踐證實(shí)，馬勃在壓瘡、臁瘡、凍瘡的治療中，治愈率均在90%以上[7,19-20]。其在創(chuàng)傷愈合方面的應(yīng)用研究愈來愈受到重視。然而，馬勃作為直接外用治療創(chuàng)面的天然藥物，其在肛腸科術(shù)后創(chuàng)面愈合中的作用研究較為少見，尤其是對大腸桿菌引起的感染性創(chuàng)面的修復(fù)作用及其作用機(jī)理研究?；诖耍狙芯繑M制備兔大腸桿菌感染性創(chuàng)面模型，以馬勃油膏進(jìn)行干預(yù)，探討馬勃油膏治療大腸桿菌感染性創(chuàng)面的效果，并基于NLRP3/Caspase-1炎癥通路進(jìn)一步探索其可能的作用機(jī)制。

炎癥反應(yīng)是感染性創(chuàng)面的形成與發(fā)展過程中最為重要的病理環(huán)節(jié)[21]。NOD樣受體蛋白3（NLRP3）炎癥小體是一種重要的細(xì)胞內(nèi)多蛋白復(fù)合體，由NLRP3、凋亡相關(guān)顆粒樣蛋白（ASC）及半胱氨酸蛋白水解酶前體（pro-Caspase-1）等共同構(gòu)成[22-23]。在創(chuàng)面的持續(xù)感染下，NLRP3炎癥小體可被激活，并促進(jìn)Caspase-1及下游IL-1β、TNF-α等促炎性細(xì)胞因子的釋放，激發(fā)機(jī)體的免疫炎癥反應(yīng)，造成炎癥損傷的進(jìn)一步擴(kuò)大，導(dǎo)致創(chuàng)面久不愈合[24-25]。以NLRP3炎性小體為治療靶點(diǎn)，靶向干預(yù)NLRP3、Caspase-1蛋白及其下游炎癥信號因子的生成、釋放，抑制其活性及過度表達(dá)，以調(diào)控炎癥反應(yīng)，有望成為感染性創(chuàng)面損傷修復(fù)的新策略[26-27]。

本實(shí)驗(yàn)選取兔作為研究對象，以創(chuàng)面組織中的NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)及創(chuàng)面組織中IL-1β、TNF-α含量作為評價兔大腸桿菌感染性創(chuàng)面炎癥程度的指標(biāo)。每只兔身上取3個創(chuàng)面，可以保證實(shí)驗(yàn)不受單個因素免疫力的影響，減少實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏倚。模型組兔造模后創(chuàng)面組織中的IL-1β、TNF-α含量及NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)均明顯高于空白對照組（P＜0.05）；給予馬勃油膏干預(yù)后，馬勃油膏組兔創(chuàng)面組織中的IL-1β、TNF-α含量及NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)均明顯低于模型組（P＜0.05），且創(chuàng)面愈合率明顯高于模型組（P＜0.05）。表明馬勃油膏能促進(jìn)兔大腸桿菌感染性創(chuàng)面愈合，作用機(jī)制可能是通過抑制NLRP3/Caspase-1炎癥通路激活以降低創(chuàng)面炎癥因子表達(dá)。然而，創(chuàng)面愈合是一個復(fù)雜的多因素共同促進(jìn)的結(jié)果，創(chuàng)面組織毛細(xì)血管的重建、機(jī)體的免疫系統(tǒng)情況等因素均可能影響馬勃油膏促進(jìn)創(chuàng)面愈合的效果。未來關(guān)于馬勃油膏是否通過促進(jìn)血管生成及增強(qiáng)機(jī)體免疫力來影響創(chuàng)面愈合，還需進(jìn)一步的研究。