王大鵬 陳艷青 謝明珠

胸腹水細胞計數是臨床區(qū)分胸水性質的手段之一，利于鑒別滲出液和漏出液，同時對多發(fā)性漿膜炎、結核性積液、化膿性感染、病毒感染等診斷有著重要的意義[1]。改良Neubauer計數板（手工法）和希森美康XN血球儀體液模式（儀器法）是目前臨床較為常用的細胞計數方法，改良Neubauer計數板通過顯微鏡對細胞進行計數，而無需其他輔助設備，但其操作較為繁瑣，重復性低，檢測效率不高[2]；伴隨自動化檢測技術發(fā)展，血球儀被廣泛用于臨床檢測中，具有高效、便捷、重復性好的優(yōu)點[3]。相關研究表明血球儀除了能夠對血液標本細胞分類計數進行檢測外，還可對體檢標本進行檢測，為胸腹水細胞計數奠定了基礎[4]，但其并未進行臨床論證和推廣，諸多因素可能會對其準確性產生影響。但目前很少有研究探究希森美康XN血球儀體液模式和改良Neubauer計數板何種更有利于檢測胸腹水細胞計數，值得深入研究。因此本研究主要是對比希森美康XN血球儀體液模式和改良Neubauer計數板在胸腹水細胞計數中的應用效果，旨在為胸腹水細胞的臨床檢測提供更為科學的依據。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2020年5月—2021年11月汕頭市澄海區(qū)人民醫(yī)院60份胸腹水標本，分別進行手工和儀器計數，手工組采用改良Neubauer計數板進行胸腹水細胞計數細胞計數，儀器組采用希森美康XN血球儀體液模式進行胸腹水細胞計數。本研究已通過倫理審查，并獲得患者知情同意。

1.2 方法

手工組采用改良Neubauer計數板：由兩名職稱在中級以上的檢驗師于顯微鏡下通過改良Neubauer計數板對有核細胞和紅細胞進行計數，最終結果為兩者鏡檢結果均值，參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[5]進行細胞計數。

儀器組采用希森美康XN-10（B3）血球儀體液模式：首先對希森美康XN-10（B3）全自動血球儀進行校準，同時對室內進行質量控制，于質控在控的情況下對標本進行檢測，根據希森美康XN-10（B3）全自動血球儀中文操作手冊對新鮮標本進行操作，于2 h內完成檢測，且每份標本進行兩次檢測，最終結果為兩次的平均值。

儀器與試劑：雙目顯微鏡（L1100A）；改良Neubauer計數板；希森美康XN-10（B3）全自動血球儀及配套試劑、質控品和標準品（日本SYSMEX）。

1.3 觀察指標

（1）比較兩組胸腹水細胞計數。（2）比較兩組細胞計數批內精密度：隨機選取兩份高（白細胞＞1×109/L）、低值（白細胞＜1×109/L）細胞計數胸腹水標本，分別采用手工法和儀器法對每份標本進行連續(xù)10次計數，繼而對變異系數（coefficient of variation，CV）進行計算[CV=標準差/平均數（s/x）]，CV≤30%則精密度在允許范圍內，同時重復性良好。（3）觀察儀器組儀器的攜帶污染率：通過儀器法對高值樣本進行連續(xù)3次檢測（分別記為i1、i2、i3），之后對低值樣本進行連續(xù)3次測定（分別記為j1、j2、j3），之后計算攜帶污染率=[（j1-j3）/（i3-j3）]×100%。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 兩組胸腹水細胞計數的比較

儀器組經全自動血細胞分析儀檢驗，其細胞總數、單個核細胞的計數統計結果均稍高于手工組，但兩組結果對比差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。儀器組紅細胞、白細胞、多個核細胞的計數結果顯著高于手工組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組胸腹水細胞計數的比較（×106/L， ）

表1 兩組胸腹水細胞計數的比較（×106/L， ）

組別 份數 細胞總數 紅細胞 白細胞 單個核細胞 多個核細胞手工組 60 12.143±0.690 8.966±0.503 0.863±0.235 0.348±0.027 0.520±0.066儀器組 60 13.286±1.113 11.843±0.577 1.408±0.322 0.435±0.122 0.974±0.076 t值 - 6.76 29.11 10.59 5.39 34.94 P值 - ＞0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05

2.2 兩組細胞計數批內精密度的比較

在白細胞＞1×109/L的高值細胞計數樣本中，兩組批內精密度均在允許范圍內，且儀器組變異程度小于優(yōu)于手工組，差異有統計學意義（P＜0.05）；在白細胞＜1×109/L的低值細胞計數胸腹水標本中，兩組批內精密度均在允許范圍內，且儀器組變異程度小于優(yōu)于手工組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組細胞計數批內精密度的比較

表2 （續(xù)）

2.3 儀器組儀器的攜帶污染率

除多個核細胞外，儀器組儀器的攜帶污染率均較低，見表3。

表3 儀器組儀器的攜帶污染率

3 討論

胸腹水細胞計數以及應用對疾病的診斷、療效觀察、病情預測等有著重要的參考價值和臨床意義。手工檢驗方式在具體操作步驟和流程上相對較繁瑣，檢驗工作效率相對較低，同時可能會因為人為因素造成檢驗結果出現誤差，且操作者的操作水平和經驗等也可能會影響檢驗結果的準確性和可靠性。改良Neubauer計數板是目前檢查胸腹水細胞計數的“金標準”，但其耗費時間較長、影響因素較多，導致檢查的結果準確性和重復性低，這是不利于患者疾病的診斷，甚至耽誤患者的治療[6-7]，因此尋找一種高效且快捷的檢測方法至關重要。隨著相關臨床檢驗技術的不斷發(fā)展和進步，近年來越來越多先進的檢驗儀器以及檢驗技術開始被引入到胸腹水白細胞計數等臨床檢驗工作中，而全自動血細胞分析儀的應用率也在逐步提高，有研究證實通過全自動血細胞分析儀實施胸腹水細胞計數可提高檢驗效率和質量，應用效果好。希森美康XN血球儀體液模式檢測原理為采用核酸熒光染色法和半導體流式細胞術于新溶血素作用下對細胞進行計數，能夠有效實現體液標本標準化和自動化[8-9]，能夠針對白細胞進行科學、快速計數以及分類，同時分析儀設有相應的體液標本檢測通道，能夠針對胸腹水實施專門、科學、有效檢測，同時能夠避免檢驗過程中的人為因素等的影響，可提高檢測工作效率和準確性。但目前關于希森美康XN血球儀體液模式與改良Neubauer計數板在胸腹水細胞計數中應用效果的對比研究尚少。

呼延武等[10]研究結果表明，當標本為血性體液時，儀器法檢測結果與顯微鏡計數法檢測結果無明顯差別，但希森美康XN-10（B3）血球儀體液模式對胸腔積液、腹水、腦脊液細胞計數的重復性高、可信度更高；在本研究中，選擇60份胸腹水標本通過手工計數和一起計數進行分析比較，兩組細胞總數、單個核細胞比較差異無統計學意義（P＞0.05），而儀器組紅細胞、白細胞、多個核細胞明顯較對照組高，差異有統計學意義（P＜0.05），與呼延武研究結果基本相符。另外本研究還發(fā)現，兩組CV值均低于30%，其精密度均在允許范圍內，而相較于手工組，儀器組批內精密度更高，差異有統計學意義（P＜0.05），綜合上述研究結果表明在一定程度上，希森美康XN血球儀體液模式在胸腹水細胞計數中的應用效果較改良Neubauer計數板更佳。改良Neubauer計數板很容易受檢驗者影響，一旦檢驗者不熟悉細胞形態(tài)、操作規(guī)范性不夠、經驗不足等均可對結果準確性產生影響[11]。而希森美康XN血球儀體液模式則能夠對有核紅細胞進行自動識別，同時對白細胞計數進行修正，而巨型血小板、脂肪滴、有核紅細胞等則不會對白細胞計數產生影響，由于細胞中核酸水平不同，可對側向熒光進行檢測，進而對細胞核酸水平、細胞內容物的復雜程度進行有效反映，最終對體液白細胞進行計數及分類，另外希森美康XN血球儀體液模式不受檢驗者操作影響[12-13]。

康晨等[14]研究結果顯示，對患者行血常規(guī)檢查給予靜脈血采樣并行希森美康血液分析儀檢驗可有效提高對患者檢驗準確率；在本研究中，除多個核細胞外，儀器組儀器的攜帶污染率均較低，其原因可能為本研究所選取的低值標本量遠遠少于高值標本量，使得高低值多個核細胞的計數相差了3倍之多，微量細胞殘留使得多個核細胞升高，在檢測中可于高低值標本檢測間隙開展空白清洗進行避免。

希森美康XN血球儀具有精密度高、效率高、誤差小、適于大批量檢測等特點，適用于臨床檢測，但目前希森美康XN血球儀體液模式對白細胞的分類僅限于單個核與多個核，對于體液中的可疑腫瘤細胞，由于其巨大的胞核，即便是散光圖的高熒光區(qū)域有提示，但也不能進行明確分類[16]。臨床檢驗工作中若僅通過希森美康XN血球儀對結果進行檢測，而對高熒光細胞的報警信息加以忽略，則很容易忽略分類不明的部分細胞，繼而對胸腹水的病因診斷產生影響，故改良Neubauer計數板在胸腹水標本的檢測中仍起到了重要的作用，在檢驗工作中可聯合兩種方法進行共同檢測移位臨床診療工作提供更準確的科學依據。

研究結果顯示希森美康XN血球儀體液模式在胸腹水細胞計數中的應用效果明顯優(yōu)于改良Neubauer計數板，希森美康XN血球儀體液模式不僅有利于檢測紅細胞計數，而且批內精密度更高，儀器攜帶污染率低，值得臨床參考，為精確計數胸腹水細胞以及后期為患者的治療提供更準確的治療標準，提供了可借鑒內容。