龍昌志 綜述，路會俠 審校

(1.大理大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，云南 大理 671000;2.大理大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院婦產(chǎn)科教研室，云南 大理 671000)

卵巢癌(ovarian cancer)是嚴重威脅婦女健康的惡性腫瘤之一，發(fā)病率在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中位居第三，病死率居婦科惡性腫瘤之首。卵巢癌的發(fā)病機制尚不完全明確，癌細胞的過度增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致復(fù)發(fā)率和病死率高的主要原因[1]。卵巢癌的一線療法是手術(shù)切除，能否改善生存率存在爭議[2]。二線療法為化療，長期使用順鉑等存在嚴重不良反應(yīng)，并出現(xiàn)腫瘤耐藥性。索拉菲尼(Sorafenib)、帕唑帕尼(Pazopany)等血管內(nèi)皮細胞生長因子受體(VEGFR)類靶向藥物，則有中性粒細胞減少等不良反應(yīng)。

中醫(yī)藥可以輔助化療，減輕不良反應(yīng)并有效改善預(yù)后?？鄥⒙?lián)合紫杉醇及順鉑治療卵巢癌，肝腎功能損害及周圍神經(jīng)毒性較小[3]。香菇多糖聯(lián)合順鉑腹腔灌注治療晚期卵巢癌，有效率及生活質(zhì)量明顯提高[4]。喙尾琵琶甲(Blaps rynchopetera fairmaire)是云南民間常用藥用昆蟲，具有抑菌、抗氧化、抗腫瘤等多種作用。有研究報道，喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物可抑制卵巢癌細胞的增殖。賡迪等[5]體外實驗發(fā)現(xiàn)，喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物對人乳腺癌細胞MD-A- MB-231和SKBR3、人胰腺癌細胞ASPC1、人前列腺癌細胞PC3具有顯著抑制作用，對人卵巢癌細胞SKOV3最為敏感，可能通過促進細胞凋亡來實現(xiàn)。為探索喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物治療卵巢癌提供了理論基礎(chǔ)。本文對喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物治療卵巢癌的作用做一綜述。

1 乙酸乙酯提取物生物特性

喙尾琵琶甲隸屬鞘翅目(Coleoptera)，擬步甲科(Tenebrionidae)，琵琶甲屬，在云南彝族長期作為一種傳統(tǒng)用藥。喙尾琵琶甲具有以下生物特性。

1.1抑菌活性 施貴榮等[6]發(fā)現(xiàn)喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物對白色葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、變形桿菌、白念珠菌等均有不同程度的抑菌作用，其中對白色葡萄球菌的作用最強。王奎[7]發(fā)現(xiàn)喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物對金黃色葡萄球菌和藤黃微球菌具有顯著的抑制效果。

1.2抗氧化活性 喙尾琵琶甲體內(nèi)有多種有效活性成分，主要為酚類化合物、環(huán)肽和氨基酸類化合物、油脂等，蟲體防御液及甲殼素中也含有有效活性成分[8]。昆蟲體內(nèi)的多酚類物質(zhì)具有顯著的抗氧化作用，喙尾琵琶甲乙醇提取物的乙酸乙酯部位是酚類物質(zhì)的富集部位，鮮蟲體內(nèi)的多酚類成分含量高于干燥蟲體[9]。崔文博等[10]用乙醇浸泡喙尾琵琶甲活體成蟲，經(jīng)石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，獲得四個極性部位粗提物，通過 1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH)和 2,2′-聯(lián)氮-雙-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)檢測清除自由基的能力并計算 IC50(50%抑制濃度)，發(fā)現(xiàn)5種提取物均有一定的自由基清除效果，其中乙酸乙酯的抗氧化作用最強，可能主要通過清除DPPH及ABTS實現(xiàn)。

1.3抗腫瘤特性 喙尾琵琶甲體內(nèi)有多種有效成分，在云南民間作為驗方長期用于腫瘤治療[11]。取蟲體粉碎物與鮮嫩木賊研碎后和鮮雞脯爆炒與稀飯共服，對晚期肝癌患者有顯著效果；與雞蛋蒸熟后一起食用可以治療乳腺癌，與金果攬、壁虎研碎開水送服以治療食管癌等[12]。肖懷[13]發(fā)現(xiàn)，喙尾琵琶甲乙酸乙酯萃取物能夠顯著抑制人結(jié)直腸腺癌細胞CaCo-2和人肺癌細胞A549增殖，基于現(xiàn)有的研究成果，為下一步的研究提供了理論思路。

2 中醫(yī)藥治療卵巢癌現(xiàn)狀

中醫(yī)藥在抗腫瘤增殖方面中頗有成效，不僅可通過抑制新生血管形成，還可通過影響細胞周期、誘導(dǎo)細胞凋亡等多種途徑來實現(xiàn)。

一方面通過影響血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)信號通路起到抗腫瘤作用。李航等[14]發(fā)現(xiàn)，復(fù)方丹參滴丸可通過降低大鼠卵巢癌組織VEGF水平，直接抑制下游非受體型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白(STAT3)信號通路，抑制增殖，誘導(dǎo)卵巢癌細胞的凋亡。理沖生髓飲(LCSSY)通過抑制VEGF的表達，影響卵巢癌血管的新生，抑制卵巢癌組織的生長，其機制可能通過JAK/STAT信號通路實現(xiàn)[15]。

另一方面通過影響細胞周期相關(guān)信號通路，促進細胞凋亡抗腫瘤。羥基紅花黃色素(HSYA)可能通過促進多發(fā)性內(nèi)分泌腺瘤致病因子1(MEN1)基因編碼核蛋白(menin)表達，導(dǎo)致β-連環(huán)蛋白(β-catenin)降解，抑制下游癌基因抑制基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)和生存素(Survivin)的表達，阻止卵巢癌細胞株 HO-8910PM由G1期進入S期，其機制可能通過Wnt/β-catenin信號通路抑制卵巢癌細胞的增殖，促進凋亡[16]。藥牡丹皮的有效成分丹皮酚，可提高G0/G1期比例，減少S期細胞比例，抑制人卵巢癌細胞A2780增殖并促進凋亡的作用，呈劑量依賴性及時間依賴性，可能與抑制Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)[17]。

根據(jù)中醫(yī)藥抗腫瘤增殖的機制，對活性成分進一步改進，增加靶向性功能，減小或避免損害正常組織，使中醫(yī)藥在腫瘤治療中發(fā)揮重要作用。

3 乙酸乙酯提取物的抗腫瘤特性

眾多含有乙酸乙酯成分的中醫(yī)藥為研究卵巢癌治療提供了理論基礎(chǔ)。樺褐孔菌乙酸乙酯提取物能有效抑制食管癌細胞EC-109和EC-9706的增殖[18]，減弱細胞克隆形成能力，可能通過影響細胞周期及凋亡抑制癌細胞增殖。草胡椒屬乙酸乙酯萃取部位能夠誘導(dǎo)人單核細胞白血病U937細胞凋亡，可能通過使G2/M期細胞比例明顯減少、S期增多、G1期減少而抗腫瘤[19]。任玉瑩等[20]研究表明，紅菇乙酸乙酯提取物促進乳腺癌細胞MDA-MB-231凋亡，且在一定范圍內(nèi)隨濃度增大抑制作用增強。蔡振輝等[21]研究發(fā)現(xiàn)，海蛾乙酸乙酯提取物通過誘導(dǎo)子宮頸癌HeLa細胞凋亡途徑抑制細胞增殖，從而抑制子宮頸癌細胞 HeLa的生長。王佳芷[22]研究發(fā)現(xiàn)，深綠卷柏乙酸乙酯部位能抑制肝癌HepG2細胞凋亡，隨著濃度增高細胞凋亡率增加。

現(xiàn)有研究表明，喙尾琵琶甲主要通過阻滯細胞周期誘導(dǎo)細胞凋亡，起到抑制癌細胞生長[23]。賡迪等[24]改進喙尾琵琶甲提取物水提緩沖液，保留水溶性大分子和熱敏小分子物質(zhì)，將宮頸癌HeLa細胞阻滯在S期，影響細胞DNA復(fù)制、抑制細胞增殖。屈瑤[8]對人乳腺腺癌細胞(SKBR3)、人胰腺癌細胞(ASPC1)以及人前列腺癌細胞(PC3)進行抗腫瘤活性測試，當乙酸乙酯萃取相濃度為25 μg/mL時，所有腫瘤細胞增殖量基本為零。

許多天然酚類化合物具有抗氧化及自有基清除的作用。大量的實驗結(jié)果表明，酚類化合物具有抗氧化特性，即抑制癌變的作用[25]。在體內(nèi)外環(huán)境中，致癌因子產(chǎn)生自由基，并以自由基形式富集在脂質(zhì)細胞膜周圍，引起脂質(zhì)過氧化，破壞細胞DNA結(jié)構(gòu)而誘發(fā)癌細胞產(chǎn)生，多酚作為自由基的猝滅劑，能有效阻止脂質(zhì)過氧化而起到抗腫瘤作用[26]。李原[27]研究發(fā)現(xiàn)，鳳眼果殼乙酸乙酯相中多酚含量最高，并在DPPH自由基清除能力實驗中顯示出具有最好的抗氧化活性，乙酸乙酯萃取相通過阻滯HepG2細胞的細胞周期，同時誘導(dǎo)HepG2細胞凋亡，發(fā)揮抗腫瘤特性，其具體機制可能與其抗氧化活性有關(guān)。李亞嫻[28]研究發(fā)現(xiàn)，褐藻作為天然多酚的重要來源，以乙酸乙酯對多酚粗品進行分級萃取得到乙酸乙酯相；體外抗腫瘤活性研究表明，乙酸乙酯相對HepG2細胞和人肺癌A549細胞均有抑制作用，其具體機制可能是通過提高機體的抗氧化活性，從而間接實現(xiàn)抗腫瘤特性。

喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物作為喙尾琵琶甲活體成蟲中酚類物質(zhì)最富集的部位，具有DPPH自由基清除的功能，抗氧化能力最強[8]。徐發(fā)[29]采用高速逆流色譜法結(jié)合柱色譜分離技術(shù)對喙尾琵琶甲乙酸乙酯部位進行細分及篩選，得到活性單體化合物4-乙基間苯二酚，其對DPPH自由基清除率的IC50值分別為0.038 mg/mL，具有較強的抗氧化活性。作者前期體外實驗免疫組織化學(xué)結(jié)果表明，喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物處理組VEGF表達水平較對照組明顯減少，并呈時間依賴性，具體機制可能是喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物中的酚類通過清除DPPH自由基阻斷HIF-1，減少VEGF的表達；并通過調(diào)控STAT3/VEGF信號通路，阻斷STAT3活化，減少新生血管形成，顯著抑制卵巢癌細胞的生長，從而發(fā)揮抗腫瘤特性(結(jié)果暫未發(fā)表)。

Wnt/β-catenin信號通路由Wnt配體觸發(fā)，而β-catenin是此信號通路途徑的“中樞”，可以激活下游蛋白Cyclin D1、c-Myc等基因的表達，而這些蛋白具有負責(zé)細胞周期、增殖和存活的功能。Wnt/β-catenin信號通路異常激活與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可通過調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號通路為卵巢癌的預(yù)防和治療提供新的治療方案[30]。陳茹等[31]研究表明，淫羊藿苷處理卵巢癌CAOV3細胞后，細胞中的β-catenin、細胞周期蛋白D1(Cyclin D1)，c-Myc的mRNA水平下調(diào)，抑制CAOV3 細胞的增殖，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。Cyclin D1是Wnt信號通路中重要的靶基因[32]。Cyclin D1是β-catenin下游的作用靶點之一，抑制Cyclin D1的表達可阻滯細胞周期從G0/G1期進入S期，激活腫瘤免疫，控制代謝功能和調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平[33]。作者前期在卵巢癌細胞SKOV3中分別加入不同濃度的喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物并用CCK-8實驗動態(tài)觀察，喙尾琵琶甲能顯著抑制卵巢癌細胞SKOV3的活性，隨著作用時間增加，增殖抑制率明顯升高。Western blot表明喙尾琵琶甲可下調(diào)β-catenin、Cyclin D1蛋白表達。上述實驗結(jié)果表明喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物能夠下調(diào)β-catenin、Cyclin D1蛋白的表達，阻止細胞質(zhì)內(nèi)的游離β-catenin進入細胞核，從而阻斷Wnt信號通路的活性，減少下游靶基因Cyclin D1的轉(zhuǎn)錄活性，阻止卵巢癌細胞SKOV3由G0/G1期進入S期，從而有效抑制癌細胞的增殖，起到治療卵巢癌的效果(結(jié)果暫未發(fā)表)?，F(xiàn)有研究成果證實，喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物可以抑制人卵巢癌SKOV3細胞株的增殖，具有一定的體外抗腫瘤效果。

4 結(jié) 論

喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物的抗腫瘤特性，目前國內(nèi)外的研究較少，一方面喙尾琵琶甲活體成蟲成分復(fù)雜，具體的抗腫瘤機制尚不明確；另一方面喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物發(fā)揮抗腫瘤作用的藥效緩慢，需對活性成分進一步研究，提高療效。喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物在卵巢癌的治療上有其獨特的優(yōu)點，不良反應(yīng)小、腫瘤細胞產(chǎn)生抗藥性概率低等，在醫(yī)藥新品種研究開發(fā)方面具有廣闊的前景。