劉 剛,劉金梅,穆開朗,劉育辰,孫慶文,張永萍
2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類對(duì)照提取物在白及質(zhì)量控制中的應(yīng)用研究
劉 剛,劉金梅#,穆開朗,劉育辰*,孫慶文,張永萍
貴州中醫(yī)藥大學(xué),貴州 貴陽 550025
建立以2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類對(duì)照提取物為對(duì)照的白及質(zhì)量控制方法。采用ZORBAX Eclipse Plus C18(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)色譜柱,流動(dòng)相為0.05%磷酸水溶液(A)- 乙腈(B),梯度洗脫,柱溫35 ℃,體積流量0.15 mL/min,進(jìn)樣體積為2 μL,檢測波長為220 nm。分別采用對(duì)照品法和對(duì)照提取物法測定17批白及飲片中1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-葡萄糖苷(2--葡萄糖基白及苷)、1-[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯(手參苷Ⅰ)、1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸-2-(6--乙?;? 葡萄糖苷(手參苷Ⅲ)、1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯(白及苷)4個(gè)成分的含量,并進(jìn)行比較。2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類對(duì)照提取物中2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷線性關(guān)系良好(≥0.999 9),進(jìn)樣精密度RSD值在0.001%~0.58%,重復(fù)性RSD值在0.27%~0.53%,4種成分的加樣回收率在98.42%~101.53%,樣品溶液在24 h內(nèi)各成分穩(wěn)定性良好。兩種方法測定結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn),>0.05,說明兩種方法無顯著差異,兩種檢測方法結(jié)果具備一致性。驗(yàn)證了2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類對(duì)照提取物可代替單體對(duì)照品的可行性,可應(yīng)用于白及及其制劑的質(zhì)量控制研究。
白及;2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類;對(duì)照提取物;質(zhì)量控制;2--葡萄糖基白及苷;手參苷Ⅰ;手參苷Ⅲ;白及苷
白及為蘭科植物白及(Thunb.) Reiehb. f.的干燥塊莖,具有收斂止血、消腫生肌的功效[1]。白及中主要含有白及多糖、2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類、聯(lián)芐類、菲類、黃酮類、苯丙素類、甾體、三萜等成分[2-6]。近年來許多學(xué)者對(duì)白及質(zhì)量控制技術(shù)方法進(jìn)行了研究和探索,從單一指標(biāo)成分定量測定到多指標(biāo)成分定量測定結(jié)合指紋圖譜等[7-9]這些研究成果無疑對(duì)白及質(zhì)量評(píng)價(jià)和控制水平的提高起到了極大的促進(jìn)作用,但是仍存在的對(duì)照品價(jià)格貴、不易得、檢測成本高,質(zhì)控指標(biāo)與藥效關(guān)聯(lián)性不強(qiáng)等問題。
《中國藥典》2020年版首次以1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯(白及苷)作為單一指標(biāo)成分進(jìn)行定量測定,白及苷為2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類化合物,除白及多糖成分外,此類化合物是白及中主要成分[10-12],除了白及苷,此類成分中其他幾個(gè)化合物均難以獲得。由于中藥成分的多樣性,僅以單一成分作為檢測指標(biāo)的檢測方法,其專屬性遠(yuǎn)低于多指標(biāo)檢測方法,且也無法體現(xiàn)中藥整體性概念。而使用對(duì)照提取物作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),相對(duì)于難獲得、高成本的單體對(duì)照品而言,其制備工藝更簡便易行。同時(shí),使用對(duì)照提取物代替單一對(duì)照品可以實(shí)現(xiàn)同時(shí)測定多個(gè)成分的含量,更能反映中藥的整體質(zhì)量[13-15]。
對(duì)照提取物系指經(jīng)特定提取工藝制備的含有多種主要有效成分或指標(biāo)性成分,用于中藥材(飲片)、提取物、中成藥等鑒別或含量測定用的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[16]。同時(shí),規(guī)定對(duì)照提取物選取應(yīng)從基原明確的中藥材(飲片)或其他動(dòng)植物中提取獲得[17]。對(duì)照提取物相比單一對(duì)照品制備方法更簡單、檢測成本更低、適用性更好[18]。
在前期的研究中,本課題組優(yōu)選了2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類白及對(duì)照提取物的制備工藝,對(duì)照提取物中1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-葡萄糖苷(2--葡萄糖基白及苷)、1-[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯(手參苷Ⅰ)、1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸-2-(6--乙酰基) 葡萄糖苷(手參苷Ⅲ)、1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯(白及苷)4個(gè)成分總含量超過70%,符合對(duì)照提取物的要求[19],本研究以2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類對(duì)照提取物為對(duì)照,應(yīng)用于白及藥材的質(zhì)量控制,試圖構(gòu)建高效、易行、科學(xué)的白及質(zhì)量評(píng)價(jià)新模式。
超高效液相色譜儀(Agilent 1290 infinity II,美國Agilent公司);FA2204B型電子天平(上海天美天平儀器有限公司);AG135型電子天平(瑞士Mettler-Toledo公司)。
乙腈為色譜純(美國TEDIA公司);其他試劑均為分析純;純凈水(貴陽娃哈哈食品有限公司);硅膠GF254薄層板(青島譜科分離材料有限公司,批號(hào)20210717);PRP-512B型反相樹脂(北京聚福樹脂廠)。白及苷(批號(hào)CHB180528)購于成都克洛瑪生物科技有限公司;手參苷Ⅲ(批號(hào)PRF10102503)購于成都普瑞法科技開發(fā)有限公司,質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于98%;手參苷Ⅰ和2--葡萄糖基白及苷由本實(shí)驗(yàn)室從白及中分離得到,質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于98%。17批不同來源的白及飲片經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)孫慶文教授鑒定為蘭科植物白及(Thunb.) Reichb. f.,詳細(xì)信息見表1。
精密稱取白及粉末(過三號(hào)篩),按1∶40料液比加入55%乙醇,超聲(功率344 W、頻率40 kHz)提取56 min,濾過,取上清液減壓濃縮,得藥材浸膏;按浸膏與PRP-512B型反相樹脂1∶150比例稱取PRP-512B型反相樹脂做好預(yù)處理(用95%的乙醇浸泡24 h后裝柱,使填料占總柱長約1/2,用95%乙醇沖洗至流分與水1∶5混合不渾濁,再用水洗至流分不含醇,即可),干法上樣,以水(3個(gè)柱體積)、20%乙醇(2個(gè)柱體積)、40%乙醇(3個(gè)柱體積)進(jìn)行梯度洗脫,收集40%乙醇段的流分,減壓濃縮,真空干燥得對(duì)照提取物。
表1 17批白及飲片來源信息
以2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷對(duì)照品為對(duì)照,測定白及對(duì)照提取物中4個(gè)2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類化合物的含量。
2.2.1 色譜條件 ZORBAX Eclipse Plus C18(100 mm×2.1mm,1.8 μm)色譜柱;流動(dòng)相為0.05%磷酸水溶液(A)- 乙腈(B);梯度洗脫,洗脫程序:0~2 min,18%~20% B;2~3 min,20%~20% B;3~6 min,20%~22% B;6~7 min,22%~23% B;7~9 min,23%~24% B;9~12 min,24%~26% B;12~16 min,26%~28% B;16~20 min,28%~100% B;20~24 min,100% B;進(jìn)樣量2 μL;體積流量0.15 mL/min;柱溫35 ℃;檢測波長220 nm。混合對(duì)照品、飲片和白及對(duì)照提取物色譜圖見圖1。
2.2.2 混合對(duì)照品溶液的配制 分別精密稱取2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷對(duì)照品適量,加50%乙醇溶解,配制成質(zhì)量濃度分別為0.200 4、0.400 0、0.105 0、1.210 0 mg/mL的混合對(duì)照品溶液A。
1-2-O-葡萄糖基白及苷 2-手參苷Ⅰ 3-手參苷Ⅲ 4-白及苷
2.2.3 對(duì)照提取物供試品溶液配制 精密稱取白及對(duì)照提取物5.12 mg,置10 mL量瓶中,加50%乙醇溶解并定容至刻度、搖勻,經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。
2.2.4 線性關(guān)系考察 將上述混合照品溶液A分別稀釋10倍、50倍得到混合對(duì)照品溶液B、C;按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件,混合對(duì)照品溶液A分別進(jìn)樣1、2、3、4、5 μL,混合對(duì)照品溶液B分別進(jìn)樣1、3、5 μL,混合對(duì)照品溶液C分別進(jìn)樣1、2、3 μL,測定各成分的峰面積,以各成分的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(),峰面積為縱坐標(biāo)(),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:相關(guān)系數(shù)()均大于0.999 9,線性關(guān)系良好,結(jié)果見表2。
表2 4個(gè)指標(biāo)成分的回歸方程及線性范圍
2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液,按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,測定2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷的峰面積,計(jì)算峰面積的RSD值,結(jié)果分別為0.13%、0.20%、0.38%、0.11%,表明儀器精密度良好。
從香港到東莞,已有46年歷史的金杯印刷一直堅(jiān)守著要成為綠色印刷先驅(qū)的使命,并化身為“大使”,毫無保留傳授己身經(jīng)驗(yàn)。
2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取白及對(duì)照提取物按“2.2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份白及對(duì)照提取物供試品溶液,按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣,記錄峰面積。計(jì)算供試品溶液中2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù),其平均值分別為15.21%、4.47%、9.50%、58.22%,RSD值分別為1.08%、1.26%、1.08%、0.91%。
2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備白及對(duì)照提取物供試品溶液1份,按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件,分別于0、2、6、8、10、24 h進(jìn)樣測定,記錄峰面積。計(jì)算供試品溶液中2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷的峰面積的RSD值,分別為0.35%、0.14%、0.39%、0.28%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批已知含量的白及對(duì)照提取物5.25 mg,精密稱定,置10 mL量瓶中,平行6份,分別精密加入不同濃度的2--葡萄糖基白及苷(0.767 00 mg/mL)、手參苷Ⅰ(0.220 0 mg/mL)、手參苷Ⅲ(0.484 80 mg/mL)、白及苷(2.984 00 mg/mL)對(duì)照品溶液各1 mL,再加入50%乙醇定容至刻度,搖勻,經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過。按“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣,記錄各成分峰面積,計(jì)算2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷的加樣回收率分別為97.16%、97.78%、104.10%、96.10%,RSD分別為2.23%、2.99%、2.02%、1.17%,表明該方法準(zhǔn)確度良好。
2.2.9 2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類對(duì)照提取物標(biāo)定結(jié)果 取9批白及對(duì)照提取物,按“2.2.3”項(xiàng)下制備供試品,取適宜供試品按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測,測定9批白及對(duì)照提取物中2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷,含量結(jié)果見表3,4個(gè)指標(biāo)成分的含量之和均大于70%,9批對(duì)照提取物的平均值為81.95%,說明該制備方法具備良好的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。
表3 9批對(duì)照提取物含量標(biāo)定
以2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類對(duì)照提取物為對(duì)照,測定白及飲片中2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷共4個(gè)成分的含量,并與單體對(duì)照品測得的結(jié)果進(jìn)行比較,考察對(duì)照提取物用于飲片質(zhì)量控制的科學(xué)性和可行性。
2.3.1 薄層鑒別 取白及飲片粉末(過三號(hào)篩)0.20 g,加入50%乙醇10 mL,超聲處理(功率400 W、頻率40 kHz)30 min,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)尤? mL甲醇溶解,作為供試品溶液。取白及2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類對(duì)照提取物配制成33 mg/mL的溶液。對(duì)照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)。吸取供試品溶液、對(duì)照提取物溶液各5 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水(6.5∶3.5∶0.1∶1)下層為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照提取物色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
1-對(duì)照提取物(A-手參苷Ⅰ B-白及苷 C-手參苷Ⅲ D-2-O-葡萄糖基白及苷) 2~18-不同批次白及飲片
2.3.2 含量測定
(1)對(duì)照提取物溶液制備:精密稱取白及對(duì)照提取物5.12 mg,置10 mL量瓶中,加50%乙醇溶解并定容至刻度,搖勻,制成2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷質(zhì)量濃度分別為0.079 9、0.023 1、0.049 5、0.302 0 mg/mL的對(duì)照提取物溶液A;將上述對(duì)照提取物溶液A分別稀釋10、50倍,作為白及對(duì)照提取物溶液B、C。
(2)白及飲片供試品溶液制備:取白及飲片粉末約0.20 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%乙醇溶液10 mL,稱定質(zhì)量,超聲(400 W、40 kHz)處理30 min,放冷。再稱定質(zhì)量,用50%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,將提取液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。
(3)色譜條件:同“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件。
(4)線性關(guān)系考察:將“(1)”項(xiàng)下的對(duì)照提取物溶液A分別進(jìn)樣1、2、3、4、5 μL;對(duì)照提取物溶液B分別進(jìn)樣1、2 μL;對(duì)照提取物溶液C進(jìn)2 μL;以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(),峰面積為縱坐標(biāo)(),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:相關(guān)系數(shù)()均大于0.999 9,線性關(guān)系良好,結(jié)果見表4。
表4 4個(gè)指標(biāo)成分的回歸方程及線性范圍
(5)精密度試驗(yàn):精密吸取“(1)”項(xiàng)下的對(duì)照提取物溶液,按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,測定2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷的峰面積,計(jì)算峰面積的RSD,結(jié)果分別為0.28%、0.32%、0.58%、0.001%,表明儀器精密度良好。
(6)穩(wěn)定性試驗(yàn):取白及飲片粉末,按“(2)”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液,按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件,分別于0、2、6、8、24、48 h進(jìn)樣測定,記錄峰面積。計(jì)算供試品溶液中2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷的峰面積RSD,分別為0.66%、0.66%、0.67%、0.35%,表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。
(7)重復(fù)性試驗(yàn):取同一批白及飲片粉末,按“(2)”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液,按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣,記錄峰面積。計(jì)算供試品溶液中2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù),其平均值分別為5.03、1.39、3.55、19.95 mg/g,RSD分別為0.48%、0.27%、0.53%、0.30%,表明該方法重復(fù)性良好。
(8)加樣回收率試驗(yàn):取已知含量的同一批白及飲片粉末約0.10 g,精密稱定,置于10 mL具塞錐形瓶中,精密加入50%乙醇溶液9 mL,稱定質(zhì)量,超聲(400 W,40 kHz)處理30 min,放冷。再稱定質(zhì)量,用50%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,再精密加入配制好的白及對(duì)照提取物溶液1 mL,搖勻,平行制備6份。按“2.2.1”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣,計(jì)算2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷的加樣回收率分別為101.53%、98.42%、101.44%、99.59%;RSD分別為1.06%、1.25%、1.47%、0.75%。表明該方法準(zhǔn)確度良好。
(9)白及飲片含量測定:取17批購買的白及飲片,精密稱定,按“(2)”項(xiàng)下方法制備白及供試品溶液,按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件,進(jìn)樣測定峰面積,分別采用白及對(duì)照提取物法和單體對(duì)照品法計(jì)算樣品中的(2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷)4個(gè)成分的含量,結(jié)果見表5。
根據(jù)表5中的結(jié)果,取2種方法測定的不同來源飲片中4個(gè)成分含量及4個(gè)成分含量總和的平均值(對(duì)照提取物法:0.60%、0.21%、0.35%、3.10%、4.26%;單體對(duì)照品法:0.57%、0.20%、0.32%、2.94%、4.04%),用SPSS 25.0進(jìn)行配對(duì)樣本檢驗(yàn),在配對(duì)樣本相關(guān)性結(jié)果中<0.05,兩組數(shù)據(jù)有顯著的相關(guān)性,可進(jìn)行配對(duì)檢驗(yàn)。由配對(duì)樣本檢驗(yàn)的結(jié)果知=0.102,>0.05,說明兩組數(shù)據(jù)無顯著差異,兩種檢測方法結(jié)果具備一致性,進(jìn)一步驗(yàn)證了白及對(duì)照提取物可替代單體對(duì)照品進(jìn)行白及飲片含量測定的可行性。
表5 17批白及飲片含量測定
本實(shí)驗(yàn)考察供試品和對(duì)照品在相同條件下使用不同展開系統(tǒng)的分離情況。分別考察三氯甲烷-甲醇-甲酸(3∶1∶0.1)、二氯甲烷-甲醇-甲酸(2.5∶1∶0.5)、乙酸乙酯-甲醇-甲酸(4∶1∶0.1)、三氯甲烷-甲醇-水(6.5∶3.5∶1)下層、三氯甲烷-甲醇-甲酸-水(6.5∶3.5∶0.1∶1)下層等5個(gè)展開劑下分離的情況。結(jié)果顯示以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水(6.5∶3.5∶0.1∶1)下層為展開劑的分離效果最好。此外,還考察不同硅膠薄層板對(duì)供試品和對(duì)照品分離效果的影響。取硅膠G薄層板、硅膠GF254薄層板、硅膠H薄層板、硅膠HF254薄層板在相同條件下對(duì)樣品進(jìn)行展開,結(jié)果以硅膠GF254薄層板分離效果最好。
本實(shí)驗(yàn)考察了乙腈-0.1%磷酸水、乙腈-0.2%磷酸水、乙腈-0.05%磷酸水、乙腈-0.05%甲酸水、乙腈-0.05%醋酸水、乙腈-水、甲醇-0.05%磷酸等流動(dòng)相系統(tǒng),結(jié)果表明,乙腈-0.05%磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫時(shí)色譜峰峰形較好,分離較好??疾炝薝PLC色譜柱在25、30、35 ℃溫度下各成分的分離效果,結(jié)果顯示在35 ℃下各個(gè)色譜峰分離較好??疾炝嗽?.3、0.2、0.12、0.15、0.1、0.08 mL/min下各成分間的分離效果,結(jié)果顯示在0.15 mL/min下各個(gè)色譜峰分離較好。
白及藥材經(jīng)過超聲提取,經(jīng)過一次柱色譜即可制備得到符合標(biāo)準(zhǔn)的以4個(gè)(2--葡萄糖基白及苷、手參苷Ⅰ、手參苷Ⅲ、白及苷)2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類成分作為總控成分的對(duì)照提取物。對(duì)照提取物制備簡單,相對(duì)于單體化合物的制備節(jié)約了成本和時(shí)間。在對(duì)照提取物與單體對(duì)照品就含量測定結(jié)果的驗(yàn)證中,其兩者結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)具有高度一致性,說明將制備得到的對(duì)照提取物,作為白及藥材含量的測定指標(biāo)具有可行性。在白及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究中,對(duì)照提取物法的操作步驟更為簡便,在一定程度上降低了操作誤差,其重復(fù)性及可靠性更高。
藥物或組分的有效性是臨床應(yīng)用的基本要求,有研究報(bào)道2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類對(duì)照提取物中的白及苷還具有改善慢性腦缺血大鼠的認(rèn)知功能障礙及減輕腦白質(zhì)缺血性損傷[20]、體外抗炎活性[21]、對(duì)PM 2.5誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞損傷有保護(hù)作用[22];2--葡萄糖基白及苷對(duì)HIV有潛在的抑制作用[23];手參苷Ⅰ還可縮短肝素化小鼠的出血時(shí)間和凝血時(shí)間[24]。綜上,制備得到的2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類對(duì)照提取物可代替單體化合物作為對(duì)照品進(jìn)行含量測定的基礎(chǔ)上,還可與安全性、有效性密切相關(guān),可為后期開發(fā)應(yīng)用及臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
基于2-異丁基蘋果酸葡萄糖氧基芐酯類對(duì)照提取物建立的白及UPLC含量測定方法,可為白及質(zhì)量控制評(píng)價(jià)方法進(jìn)一步的完善提供參考。
利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突
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Study on application of glucosyloxybenzyl 2-isobutylmalates reference extract in quality control of
LIU Gang,LIU Jin-mei, MU Kai-lang, LIU Yu-chen, SUN Qing-wen, ZHANG Yong-ping
Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550025, China
To establish of a quality control method forwith glucosyloxybenzyl 2-isobutylmalates reference extract as a control.A ZORBAX Eclipse Plus C18(100 mm×2.1 mm, 1.8 μm) column was used with the mobile phase of 0.05% phosphoric acid aqueous solution (A)-acetonitrile (B), gradient elution, column temperature of 35oC, flow rate of 0.15 mL/min, injection volume of 2 μL, detection wavelength of 220 nm. The contents of dactylorhin A, gymnoside I, gymnoside III and militarine in 17 batches oftablets were determined by the control method and the control extract method, respectively, and compared.The linearity of dactylorhin A, gymnoside I, gymnoside III and militarine in the reference extract of glucosyloxybenzyl 2-isobutylmalates was good (≥0.999 9), the precision of the injection RSD values were in the range of 0.001%—0.58%, the reproducibility RSD values were in the range of 0.27%—0.53%. The recoveries of the four components ranged from 98.42% to 101.53%, and the stability of the sample solutions was good within 24 h. The results of the two methods were determined by-test,>0.05, indicating that there was no significant difference between the two methods and the results of the two assays were consistent.This study verified the feasibility of glucosyloxybenzyl 2-isobutylmalates reference extract as a substitute for the monomeric control, which can be applied to quality control studies ofand its preparations.
(Thunb.) Reiehb. f.; glucosyloxybenzyl 2-isobutylmalates; reference extract; quality control; militarine;gymnoside I; militarine; gymnoside III; dactylorhin A
R286.12
A
0253 - 2670(2023)04 - 1260 - 07
10.7501/j.issn.0253-2670.2023.04.027
2022-08-09
國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(U1812403);貴州省科技計(jì)劃項(xiàng)目(黔科合基礎(chǔ)[2019]1027號(hào));國家公益性行業(yè)科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目(201507002)
劉 剛(1979—),男(漢族),吉林白城人,高級(jí)實(shí)驗(yàn)師,碩士研究生導(dǎo)師,研究方向?yàn)橹兴庂Y源學(xué)和中藥鑒定學(xué)。E-mail: liugang888_2000@163.com
劉育辰(1982—),女(漢族),吉林長春人,教授,博士,碩士研究生導(dǎo)師,研究方向?yàn)橹兴幖懊褡逅庂Y源分類鑒定與質(zhì)量控制。E-mail: lyc8564732@163.com
#共同第一作者:劉金梅(1997—),女(苗族),貴州貞豐人,碩士研究生,研究方向?yàn)橹兴幖懊褡逅幓瘜W(xué)及中藥新藥的研究。E-mail: 1943456442@qq.com;
[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]