劉朝波，聞偉鍔，李肇高，羅婷婷，徐德林，錢 剛*，何芋岐，李 林*

不同產(chǎn)地鐵皮石斛莖中內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)與農(nóng)藝性狀差異相關(guān)性分析

劉朝波1，聞偉鍔1，李肇高1，羅婷婷1，徐德林1，錢 剛1*，何芋岐2，李 林1*

1. 遵義醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)教研室，貴州 遵義 563099 2. 遵義醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴州 遵義 563099

對(duì)不同產(chǎn)地鐵皮石斛莖中的內(nèi)生真菌群落與農(nóng)藝性狀進(jìn)行分析，為內(nèi)生真菌與鐵皮石斛差異農(nóng)藝性狀形成的相關(guān)性研究提供基礎(chǔ)。對(duì)采自安徽霍山（AHHS）、貴州獨(dú)山（GZDS）、云南孟連（YNML）的112份鐵皮石斛進(jìn)行農(nóng)藝性狀測(cè)量，ITS測(cè)序分析內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)，R語(yǔ)言分析不同產(chǎn)地內(nèi)生真菌豐度與宿主農(nóng)藝性狀的相關(guān)性。差異性分析發(fā)現(xiàn)3個(gè)產(chǎn)地的鐵皮石斛在株高、莖長(zhǎng)、莖粗均具有顯著性差異（＜0.05）。內(nèi)生真菌ITS檢測(cè)共獲得923條特征序列，可注釋到3個(gè)門、138個(gè)屬，產(chǎn)地間的鐵皮石斛內(nèi)生真菌在屬水平上存在差異，其中AHHS的真菌群落多樣性與其他產(chǎn)地具有顯著性差異。相關(guān)分析表明，內(nèi)生真菌與宿主的株高、莖長(zhǎng)、莖粗呈顯著負(fù)相關(guān)（＜0.05）。不同產(chǎn)地鐵皮石斛莖的差異農(nóng)藝性狀形成與共有內(nèi)生真菌的豐度的改變密切相關(guān)。

鐵皮石斛；內(nèi)生真菌；ITS測(cè)序；多樣性分析；農(nóng)藝性狀；相關(guān)性分析

鐵皮石斛Kimura et Migo是重要的蘭科石斛屬藥用植物，具有養(yǎng)胃生津、滋陰清熱的功效[1]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，鐵皮石斛具有抗氧化、抗癌、降血糖等多種藥理作用，受到市場(chǎng)廣泛關(guān)注[2]。由于自然環(huán)境下繁殖率較低，加上民間過(guò)度采挖，鐵皮石斛野生資源已近枯竭，利用人工種植方式生產(chǎn)成為當(dāng)前解決鐵皮石斛供需矛盾的重要方式[3-4]。受種植方式、光照、微生物等因素的影響，不同產(chǎn)地人工種植鐵皮石斛在有效藥用成分含量、農(nóng)藝性狀、生物量等方面差異較大[5]。

已有研究表明，內(nèi)生真菌是影響植物生長(zhǎng)發(fā)育、次生代謝產(chǎn)物積累的重要生物因子，與植物的根系發(fā)育、植株形態(tài)建成等具有密切關(guān)系[6-7]。Waqas等[8]從大田種植黃瓜根中分離得到2株能分泌赤霉素（gibberellins）和吲哚乙酸（indoleacetic acid）的內(nèi)生真菌（LWL2、sp. LWL3），與黃瓜植株共培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌處理組的植株莖長(zhǎng)顯著高于未處理組。Qin等[9]將植物內(nèi)生真菌與植物共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)在提供有機(jī)氮源的條件下，多數(shù)內(nèi)生真菌能將有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)氮，從而促進(jìn)植物生長(zhǎng)，提高植物株高。任穎[10]發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌定殖后可增加黃芪葉片數(shù)、株高、地下干質(zhì)量，有利于黃芪抗旱能力提高。因此，內(nèi)生真菌與植物的農(nóng)藝性狀改變具有密切的關(guān)系，同時(shí)在以株高、莖長(zhǎng)等農(nóng)藝性狀為產(chǎn)量指標(biāo)的藥用植物研究中具有重要的意義。

對(duì)玄參[11]、杜仲[12]等多種藥用植物研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)生真菌廣泛的存在于藥用植物各組織器官中，且同種植物不同產(chǎn)地的內(nèi)生真菌的種群結(jié)構(gòu)組成、相對(duì)豐度及優(yōu)勢(shì)類群均存在差異。內(nèi)生真菌的種群結(jié)構(gòu)組成與宿主對(duì)不同環(huán)境的適應(yīng)等密切相關(guān)[13]，其核心菌群、豐度變化也被證實(shí)與不同產(chǎn)地間藥用植物次生代謝產(chǎn)物含量差異積累、道地性形成等密切相關(guān)[14]。但這些真菌的群落結(jié)構(gòu)、豐度變化與相關(guān)農(nóng)藝性狀的變化的關(guān)系鮮有報(bào)道。

目前所研究的內(nèi)生真菌主要為可培養(yǎng)內(nèi)生真菌，但是宿主中可分離培養(yǎng)的內(nèi)生真菌數(shù)量極少，導(dǎo)致多數(shù)內(nèi)生真菌功能未被發(fā)掘。然而高通量測(cè)序技術(shù)具有準(zhǔn)確、高效等優(yōu)點(diǎn)，不依賴于傳統(tǒng)培養(yǎng)法，成為植物內(nèi)生真菌分析重要技術(shù)手段[15-16]。本研究以安徽霍山（AHHS）、貴州獨(dú)山（GZDS）、云南孟連（YNML）產(chǎn)地人工種植鐵皮石斛為材料，通過(guò)ITS測(cè)序?qū)?個(gè)產(chǎn)地鐵皮石斛莖中內(nèi)生真菌生物多樣性進(jìn)行分析，并對(duì)不同產(chǎn)地鐵皮石斛之間差異內(nèi)生真菌與差異農(nóng)藝性狀進(jìn)行相關(guān)性分析，篩選影響鐵皮石斛生物產(chǎn)量的內(nèi)生真菌，為鐵皮石斛高效生產(chǎn)等提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與儀器

1.1 材料

本研究從AHHS、GZDS、YNML 3個(gè)鐵皮石斛產(chǎn)地共采集112叢人工種植的鐵皮石斛進(jìn)行農(nóng)藝性狀分析，進(jìn)一步從每個(gè)產(chǎn)地中分別選擇9個(gè)有典型特征的樣本的2年生新鮮莖條經(jīng)表面消毒后用于鐵皮石斛內(nèi)生真菌的ITS測(cè)序，所有材料均由遵義醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)教研室錢剛教授鑒定為蘭科石斛屬植物鐵皮石斛Kimura et Migo。

1.2 試劑與儀器

用E.Z.N.A.?Soil DNA試劑盒（批號(hào)D5625-02，美國(guó)Omega公司）進(jìn)行石斛莖條內(nèi)DNA的提??；用AxyPrep PCR Cleanup Kit回收試劑盒（批號(hào)AP-PCR-4G，英國(guó)Axygen公司）來(lái)回收目的片段；ITS的測(cè)序在Illumina NovaSeq高通量測(cè)序平臺(tái)（杭州聯(lián)川生物技術(shù)股份有限公司）進(jìn)行。

2 方法

2.1 鐵皮石斛株高、莖長(zhǎng)和莖粗測(cè)量及差異性分析

利用直尺共測(cè)量112叢（GZDS、AHHS、YNML分別為34、25、53叢）鐵皮石斛的株高，并從每叢鐵皮石斛中隨機(jī)選取3根莖測(cè)量莖長(zhǎng)、莖粗。對(duì)莖長(zhǎng)和莖粗平均值以及株高進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)性檢驗(yàn)后利用R語(yǔ)言中bartlett. test函數(shù)進(jìn)行方差齊檢驗(yàn)，不符合正態(tài)性檢驗(yàn)應(yīng)用R語(yǔ)言coin包中kruskal. test函數(shù)進(jìn)行多樣本秩和檢驗(yàn)，＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，方差齊后應(yīng)用R語(yǔ)言中aov函數(shù)進(jìn)行方差分析，方差不齊時(shí)應(yīng)用R語(yǔ)言中利用oneway test進(jìn)行方差分析（＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異）。

2.2 內(nèi)生真菌DNA的提取

按照E.Z.N.A.?Soil DNA試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)次氯酸鈉法消毒滅菌后的鐵皮石斛莖提取內(nèi)生真菌DNA。提取得到的DNA通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的提取質(zhì)量，同時(shí)采用紫外分光光度計(jì)對(duì)DNA進(jìn)行定量。

2.3 DNA的測(cè)序

使用引物ITS1 FI2（5’-GTGARTCAT- CGAATCTTTG-3’）和ITS2（5’-TCCTCCGCTTATT- GATATGC-3’）對(duì)真菌（ITS2）可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)2%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)，使用AxyPrep PCR Cleanup Kit回收試劑盒對(duì)目標(biāo)片段進(jìn)行回收。純化后的PCR產(chǎn)物采用Quant-iT PicoGreen ds DNA Assay Kit在Qubit（美國(guó)Invitrogen公司）熒光定量系統(tǒng)上對(duì)文庫(kù)進(jìn)行定量。根據(jù)測(cè)序所需要求制備合格的文庫(kù)，使用NovaSeq測(cè)序儀進(jìn)行2×250 bp的雙端測(cè)序。

2.4 測(cè)序數(shù)據(jù)注釋與分析

根據(jù)雙端序列的重疊區(qū)，采用Pear將R1、R2序列拼接成長(zhǎng)的tag序列，并使用cutadapter去除barcode以及引物序列，然后Fqtrim（v0.94）過(guò)濾低質(zhì)量序列，采用Vsearch（v2.3.4）過(guò)濾嵌合體，通過(guò)區(qū)分?jǐn)U增子降噪算法（divisive amplicon denoising algorithm 2，DADA2）去重復(fù)后得到特征表和特征序列。物種注釋采用QIIME2的插件feature-classifier進(jìn)行序列比對(duì)，比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)為SILVA和unite數(shù)據(jù)庫(kù)，以SILVA數(shù)據(jù)庫(kù)注釋結(jié)果為準(zhǔn)。使用QIIME2流程進(jìn)行α多樣性分析，用R（v3.5.2）對(duì)測(cè)得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及作圖。α多樣性分析利用Anova法進(jìn)行整體差異分析、利用Wilcox Test法對(duì)不同產(chǎn)地鐵皮石斛莖的內(nèi)生真菌群落物種多樣性指數(shù)之間的差異性進(jìn)行研究。

2.5 內(nèi)生真菌與鐵皮石斛形態(tài)特征相關(guān)性分析

對(duì)27個(gè)ITS測(cè)序的鐵皮石斛的株高、莖長(zhǎng)和莖粗?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，方法同“2.1”項(xiàng)。應(yīng)用R語(yǔ)言kruskal. test函數(shù)對(duì)不同產(chǎn)地ITS測(cè)序數(shù)據(jù)注解到的共有內(nèi)生真菌進(jìn)行多重比較，F(xiàn)SA包中的dunnTest函數(shù)對(duì)多重比較結(jié)果-value進(jìn)行矯正，共有內(nèi)生真菌為不同產(chǎn)地2/3以上樣本能檢測(cè)到的內(nèi)生真菌。另外，應(yīng)用R語(yǔ)言PerformanceAnalytics包（R version 3.6.1）將具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的農(nóng)藝性狀與不同產(chǎn)區(qū)共有差異內(nèi)生真菌做相關(guān)性分析，相關(guān)性計(jì)算采用spearman方法。

3 結(jié)果與分析

3.1 鐵皮石斛農(nóng)藝性狀測(cè)量及差異性分析結(jié)果

對(duì)3個(gè)產(chǎn)地共112份材鐵皮石斛石斛的株高、莖長(zhǎng)和莖粗進(jìn)行測(cè)量，分析不同產(chǎn)地間這些農(nóng)藝性狀指標(biāo)的差異性，結(jié)果如圖1所示。3個(gè)產(chǎn)地中，YNML鐵皮石斛的株高（18.3～49.2 cm）和莖長(zhǎng)（18.73～61.00 cm）顯著高于其他2個(gè)產(chǎn)地（＜0.05），其他2個(gè)產(chǎn)地之間株高、莖長(zhǎng)差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。此外，AHHS鐵皮石斛的莖粗（4.04～7.40 mm）顯著低于其他2個(gè)產(chǎn)地，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05），而其他2個(gè)產(chǎn)地之間莖粗沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖中不同小寫(xiě)字母表示在0.05水平差異顯著，相同字母表示不顯著

3.2 鐵皮石斛莖中內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)組成分析結(jié)果

對(duì)27個(gè)樣品中測(cè)序獲得的原始數(shù)據(jù)質(zhì)控、過(guò)濾和拼接后共得到2 235 602條有效序列，平均每個(gè)樣品產(chǎn)生82 800條有效序列，90.41%的有效序列在200～300 bp，且序列的有效率均在90%以上。各樣品的測(cè)序質(zhì)量結(jié)果如表1所示，說(shuō)明該次測(cè)序結(jié)果具有較高的可信度。

表1 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估

按產(chǎn)地將測(cè)序數(shù)據(jù)注解的內(nèi)生真菌進(jìn)行組成分析發(fā)現(xiàn)，3個(gè)產(chǎn)地的鐵皮石斛內(nèi)生菌可注釋為子囊菌門（Ascomycota，92.57%）、擔(dān)子菌門（Basidiomycota，6.30%）、子囊菌類門（Asmycota，1.00%）組成（圖2-A），其中子囊菌類門（Asmycota）僅存在于AHHS產(chǎn)地樣品中。

圖2 內(nèi)生真菌在門(A)、屬(B) 水平的組成

進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，鐵皮石斛內(nèi)生真菌分布于138個(gè)屬，其中AHHS分布94屬，GZDS分布65屬，YNML分布35屬。內(nèi)生真菌屬的豐度在不同產(chǎn)地間具有差異，對(duì)相對(duì)百分?jǐn)?shù)前20屬進(jìn)行分析（圖2-B），結(jié)果顯示AHHS產(chǎn)地豐度最高的為石座菌屬M(fèi)alloch & Cain（15.45%），GZDS產(chǎn)地豐度最高的為小戴衛(wèi)霉屬Crous & U. Braun（14.99%），YNML產(chǎn)地豐度最高的為小戴衛(wèi)霉屬（33.76%）。對(duì)共有菌屬進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，根堅(jiān)囊菌屬D.F. Farr（12.16%）、鏈格孢屬Nees（4.9%）、石座菌屬（15.45%）在AHHS產(chǎn)地中的豐度遠(yuǎn)高于其它2個(gè)產(chǎn)地；不整小球殼屬Kleb.（8.86%）、黑團(tuán)孢屬Tode（15.23%）在GZDS產(chǎn)地中豐度明顯高于其他2個(gè)產(chǎn)地；枝頂孢屬Link（9.40%）在YNML產(chǎn)地中豐度明顯高于其他2個(gè)產(chǎn)地。此外，接柄孢屬M(fèi)ont.（3.06%）、毛殼菌屬Kunze（4.30%）為GZDS產(chǎn)地的特有屬內(nèi)生真菌。

3.3 內(nèi)生真菌群落多樣性分析結(jié)果

使用QIIME2流程對(duì)樣品中內(nèi)生真菌的α多樣性指數(shù)進(jìn)行分析，用箱線圖來(lái)展示不同產(chǎn)地鐵皮石斛莖中內(nèi)生真菌的觀察特征值和香農(nóng)指數(shù)。從觀察特征值圖中（圖3-A）可以看出，3個(gè)不同產(chǎn)地的內(nèi)生真菌群落豐度存在差異，觀察特征值表明，3個(gè)產(chǎn)地features豐度從高到低依次為AHHS、GZDS、YNML；從香農(nóng)指數(shù)箱式圖（圖3-B）中可以看出，AHHS的內(nèi)生真菌多樣性明顯大于其他產(chǎn)地，其次為GZDS、YNML，其中AHHS與GZDS 2個(gè)產(chǎn)地的內(nèi)生真菌多樣性具有顯著性差異（＜0.05），AHHS與YNML 2個(gè)樣本組的內(nèi)生真菌多樣性具有顯著性差異（＜0.05），GZDS與YNML 2個(gè)產(chǎn)地的內(nèi)生真菌多樣性沒(méi)有明顯的差異。

*表示在0.05水平差異顯著

3.4 內(nèi)生真菌與鐵皮石斛農(nóng)藝性狀相關(guān)性分析

為了進(jìn)一步探索鐵皮石斛形態(tài)差異形成與差異內(nèi)生真菌的關(guān)系，首先應(yīng)用R語(yǔ)言將ITS測(cè)序樣本鐵皮石斛形態(tài)特征（株高、莖長(zhǎng)、莖粗）進(jìn)行差異性分析，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的27叢材料的農(nóng)藝性狀差異顯著性與總體樣本的結(jié)果一致（表2）。

對(duì)不同產(chǎn)地鐵皮石斛共有內(nèi)生真菌組成進(jìn)行分析，篩選出相對(duì)豐度排名前20且3個(gè)產(chǎn)地均有2/3以上樣本都能檢測(cè)出的內(nèi)生真菌屬進(jìn)行多重比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)獲得的5個(gè)共有屬中僅赤霉菌屬（Sacc.）在AHHS和YNML產(chǎn)地間具有顯著差異（表3）。而AHHS和YNML產(chǎn)地的鐵皮石斛在株高、莖長(zhǎng)、莖粗農(nóng)藝性狀上均具有顯著性水平差異（表2）。將赤霉菌屬與鐵皮石斛株高、莖長(zhǎng)、莖粗進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)赤霉菌屬的豐度與宿主的株高、莖長(zhǎng)和莖粗具有顯著相關(guān)性（＜0.05），呈負(fù)相關(guān)（圖4-A）。尖孢鐮刀菌和為赤霉菌屬中的2個(gè)種，進(jìn)一步將尖孢鐮刀菌和與宿主農(nóng)藝性狀作相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)尖孢鐮刀菌與宿主的株高、莖長(zhǎng)和莖粗具有顯著相關(guān)性（＜0.05），呈負(fù)相關(guān)；而菌僅與宿主的株高和莖長(zhǎng)具有顯著相關(guān)性（＜0.05），呈負(fù)相關(guān)（圖4-B）。

表2 鐵皮石斛農(nóng)藝性狀差異分析(, n = 9)

同列不同小寫(xiě)字母表示在0.05水平差異顯著，相同字母表示不顯著

Different lowercase letters in the same column indicate significant difference at the 0.05 level, while the same letters indicate no significant difference

表3 共有內(nèi)生真菌的差異性分析

Table 3 Difference analysis of common endophytic fungi

unadj為未矯正值；adj為矯正后-value；表中*表示在0.05水平差異顯著

unadj is uncorrected-value;adj is the corrected-value;*in the table indicates significant difference at the 0.05 level

*P＜0.05 **P＜0.001 ***P＜0.0001

4 討論

本研究分析了不同產(chǎn)地人工種植鐵皮石斛株高、莖長(zhǎng)和莖粗的生長(zhǎng)狀況，比較了不同產(chǎn)地間人工種植鐵皮石斛3種農(nóng)藝性狀的差異，并對(duì)內(nèi)生真菌與農(nóng)藝性狀進(jìn)行相關(guān)性分析，明確了不同產(chǎn)地之間鐵皮石斛主要農(nóng)藝性狀的差異以及莖中內(nèi)生真菌的結(jié)構(gòu)組成，初步探索了內(nèi)生真菌與宿主農(nóng)藝性狀差異產(chǎn)生的相關(guān)性。本研究表明，不同產(chǎn)地間人工種植鐵皮石斛株高、莖長(zhǎng)和莖粗表現(xiàn)出顯著差異，且與產(chǎn)地間共有內(nèi)生真菌赤霉菌屬豐度呈負(fù)相關(guān)。

通過(guò)比較不同產(chǎn)地藥用植物內(nèi)生真菌結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地間內(nèi)生真菌的種屬組成不同、優(yōu)勢(shì)屬不同。從門的水平上來(lái)看，不同地區(qū)的鐵皮石斛內(nèi)生真菌被注釋到子囊菌門（Ascomycota）、擔(dān)子菌門（Basidiomycota）、子囊菌類門（Asmycota）。所有的樣本中超過(guò)99%的內(nèi)生真菌在門水平獲得注釋，說(shuō)明本次注釋具有很高的覆蓋率。其中Ascomycota為相對(duì)豐度最高的門，依次為擔(dān)子菌門和子囊菌門，這與毛益婷等[17]的研究結(jié)果相似，但在他們的研究中并未發(fā)現(xiàn)子囊類菌門。從屬的水平上來(lái)說(shuō)，在不同樣本組中均存在明顯的優(yōu)勢(shì)屬，石座菌屬為AHHS產(chǎn)地的優(yōu)勢(shì)屬內(nèi)生真菌，小戴維斯殼屬為GZDS產(chǎn)地中內(nèi)生真菌優(yōu)勢(shì)屬，小戴維斯殼屬為YNML樣本組中內(nèi)生真菌優(yōu)勢(shì)屬。3個(gè)產(chǎn)地的研究結(jié)果均與陳澤斌等[18]認(rèn)為構(gòu)巢裸殼孢菌為鐵皮石斛葉中內(nèi)生真菌的優(yōu)勢(shì)真菌群的研究結(jié)果不同，這可能因?yàn)闃颖緸椴煌M織或者不同生存環(huán)境有關(guān)。

對(duì)人參[19]、黃芪[20]等植物內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)及多樣性分析表明赤霉菌屬真菌的宿主較為廣泛，其在植物中能引起宿主發(fā)病，如小麥赤霉病[21]、玉米穗腐病[22]和水稻惡苗病[23]等。本研究中，在3個(gè)產(chǎn)地鐵皮石斛莖中屬水平均檢測(cè)到赤霉菌屬真菌，在種水平被注釋為尖孢鐮刀菌和。其中尖孢鐮刀菌菌株被證實(shí)對(duì)苜蓿幼苗根部病害的嚴(yán)重程度和生長(zhǎng)有顯著影響，尤其對(duì)苜蓿株高以及根系的影響較顯著（＜0.05）[24]；而未有相關(guān)報(bào)道。在本課題組的研究中發(fā)現(xiàn)AHHS與YNML鐵皮石斛株高、莖長(zhǎng)和莖粗具有差異，其中這些莖的農(nóng)藝性狀與共有內(nèi)生菌赤霉菌屬具有顯著負(fù)相關(guān)性，進(jìn)一步對(duì)注釋為赤霉菌屬的尖孢鐮刀菌和的2個(gè)種與宿主的農(nóng)藝性狀做相關(guān)性分析表明不同產(chǎn)地鐵皮石斛農(nóng)藝性狀差異受尖孢鐮刀菌和豐度的影響，從而引起AHHS與YNML產(chǎn)地鐵皮石斛農(nóng)藝性狀差異。

綜合以上分析看出，赤霉菌屬內(nèi)生真菌與植物農(nóng)藝性狀形成有密切關(guān)系，豐度越高影響越顯著。此結(jié)果為當(dāng)前人工種植鐵皮石斛赤霉菌屬病原菌生物防治具有重要指導(dǎo)意義，為提高人工種植鐵皮石斛品質(zhì)做出貢獻(xiàn)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Correlation analysis between endophytic fungal and agronomic traits infrom different habitats

LIU Chao-bo1, WEN Wei-e1, LI Zhao-gao1, LUO Ting-ting1, XU De-lin1, QIAN Gang1, HE Yu-qi2, LI Lin1

1. Department of Cell Biology, School of Preclincal Medicine, Zunyi Medical University, Zunyi 563099, China. 2. School of Pharmacy, Zunyi Medical University, Zunyi 563099, China

To analyze the endophytic fungal communities and agronomic characters ofstems collected from different habitats, in order to provide the basis for the correlation studies between endophytic fungi and formation of variations agronomic traits of.A total of 112samples were respectively collected from Anhui Huoshan (AHHS), Guizhou Dushan (GZDS) and Yunnan Menglian (YNML) and surveyed for their agronomic traits. The endophytic fungi community structure was analyzed by ITS sequencing, and the correlation between the abundance of endophytic fungi in different habitats and the host agronomic traits were analyzed by R language.The difference analysis showed that there were significant differences in plant height, stem length and stem diameter offrom the three habitats (＜0.05). A total of 923 characteristic sequences of endophytic fungi were obtained by ITS assay, which could be annotated to three phylum, 138 genus. The distribution difference of endophytic fungi infrom different habitats were shown at genus level, and the diversities of AHHS fungal community were significantly different from that of other places. The relative correlation analysis showed there were negative correlation between endophytic fungusand the plant height, stem length, stem diameter of the host (< 0.05).The different agronomic traits formation of stems in different habitats were closely related to the changes in abundance of endophytic fungi which were common in.

Kimura et Migo; endophytic fungi; ITS sequencing; diversity analysis; agronomic trait; correlation analysis

R286.2

A

0253 - 2670(2023)04 - 1236 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.04.024

2022-08-12

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31960074）；貴州省科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目（黔科平臺(tái)人才[2019]-027，黔科合平臺(tái)人才[2017]5733-050，黔科合支撐[2019]2961號(hào)）；遵義市科技局遵義醫(yī)科大學(xué)科學(xué)技術(shù)聯(lián)合資金招標(biāo)專項(xiàng)（遵義市合HZ字（2020）91號(hào)）

劉朝波，碩士研究生，從事中藥材遺傳改良與基因工程研究。E-mail: 1947261933@qq.com

錢 剛，從事植物細(xì)胞與分子遺傳學(xué)研究。E-mail: qiangang69@sina.cn

李 林，從事中藥材遺傳改良與基因工程研究。E-mail: 191129104@qq.com

[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]