張玲，張銳武，奚興蘋，李金虹，陳彤，張偉

（1.昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗室，云南昆明 650500；2.云南龍津康佑生物醫(yī)藥有限公司，云南昆明 650503；3.昆明龍津藥業(yè)股份有限公司，云南昆明 650503）

隨著人們生活水平不斷提高，不良飲食習(xí)慣、不合理作息等因素使高脂血癥的發(fā)病率逐年遞增[1]，嚴(yán)重威脅人類生命健康。因此，對高脂血癥的預(yù)防、控制和治療尤顯重要。瑞舒伐他汀鈣（Rosuvastatin calcium，ROS）和依折麥布（Ezetimibe，EZT）是臨床上常用于治療高脂血癥的兩種藥物，瑞舒伐他汀鈣通過抑制羥甲基戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶來減少內(nèi)源性膽固醇的合成，但它有劑量依賴性，在使用劑量增加時會伴隨不良反應(yīng)增多[2-3]；依折麥布是一種膽固醇吸收抑制劑，可減少外源性膽固醇吸收[4]。將依折麥布與瑞舒伐他汀鈣聯(lián)用，可在減少內(nèi)源性、外源性膽固醇吸收，同時有效降低缺血性心臟病和急性冠脈綜合征病史患者發(fā)生心血管事件的風(fēng)險，有增效減毒的優(yōu)勢[5-6]。

復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片是一種固定劑量單片復(fù)方制劑，目前規(guī)格共有4種：依折麥布/瑞舒伐他汀鈣：10 mg/5 mg、10 mg/10 mg、10 mg/20 mg、10 mg/40 mg[7]。藥品質(zhì)量與臨床療效息息相關(guān)，對其質(zhì)量進(jìn)行全面研究，使藥物安全、可靠、質(zhì)量可控具有重要意義。據(jù)調(diào)研，對復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片的質(zhì)量研究較少，有高效液相色譜法用于復(fù)方制劑的含量測定的文獻(xiàn)報道[8]，但鑒別、檢查（如溶出度、含量均勻度、有關(guān)物質(zhì)）等方面的相關(guān)研究報道甚少。此外，目前各國藥典均未收載復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，也未查詢到其進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)，只收載了單方片劑標(biāo)準(zhǔn)。依折麥布片在《美國藥典》（USP43）[9]有收載，瑞舒伐他汀鈣片在《美國藥典》（USP43）[9]、《英國藥典》（BP2020）[10]、《歐洲藥典》（EP10.3）[11]有收載?，F(xiàn)有的單方片劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和前人已做過的相關(guān)研究可為復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供一定的參考依據(jù)。為了開展復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片質(zhì)量研究，本文查閱并總結(jié)了依折麥布、瑞舒伐他汀鈣原料藥的基本信息（表1）以及近年來國內(nèi)外有關(guān)復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片質(zhì)量研究的文獻(xiàn)（包括含量測定、溶出度測定、有關(guān)物質(zhì)檢測等），以期為復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片的質(zhì)量研究提供參考。

表1 原料藥基本信息Table 1 Basic information of API

1 鑒別

藥物鑒別是藥品質(zhì)量檢驗工作中的首項任務(wù)，只有在藥物鑒別無誤的情況下，進(jìn)行藥物的檢查、含量測定等分析才有意義[18]71。目前暫未查詢到相關(guān)文獻(xiàn)和藥典中記載復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片的鑒別方法，只有依折麥布片在《美國藥典》（USP43）[9]，瑞舒伐他汀鈣片在《美國藥典》（USP43）[9]、《英國藥典》（BP2020）[10]、《歐洲藥典》（EP10.3）[11]中收載了其鑒別方法：均采用高效液相色譜法，在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰保留時間應(yīng)與對照品溶液相應(yīng)的主峰保留時間一致[9]。采用高效液相色譜法鑒別，其專屬性強(qiáng)、靈敏度高，復(fù)方制劑鑒別可參考單方制劑的鑒別方法。此外，在藥物鑒別時，紫外-可見分光光度法簡便易行，準(zhǔn)確度高，使用廣泛[18]76-77，也可采用此方法鑒別復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片。在波長為200～400 nm 范圍內(nèi)，供試品溶液與對照品溶液的最大吸收波長與最小吸收波長應(yīng)一致[19]。

2 含量測定

國內(nèi)外研究者針對依折麥布、瑞舒伐他汀鈣的含量測定已做大量工作。文獻(xiàn)顯示，主要有紫外-可見分光光度法（UV）、高效液相色譜法（HPLC）應(yīng)用于單方依折麥布片、瑞舒伐他汀鈣片的含量測定[20-23]，但同時測定復(fù)方制劑中依折麥布和瑞舒伐他汀鈣含量的報道尚少。據(jù)文獻(xiàn)顯示，主要有HPLC法[8]，因其專屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確可重復(fù)等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于該制劑的含量測定?，F(xiàn)對文獻(xiàn)中高效液相色譜檢測方法總結(jié)分析，見表2。

從表2 可知，各文獻(xiàn)均采用同一種方法同時測定復(fù)方制劑中的兩種主成分，方法中色譜柱柱溫對該分析方法無影響；洗脫方式均采用等度洗脫；流速方面，除文獻(xiàn)[29]采用1.5 mL/min 的較大流速外，其余流速均在0.8～1.0 mL/min 范圍內(nèi)，若在滿足分離度要求的情況下可適當(dāng)降低流速，以減少流動相的消耗量，節(jié)約物力和人力成本；在檢測波長的選擇方面，依折麥布和瑞舒伐他汀鈣分別在232 nm[30]、242 nm[31]波長處有很強(qiáng)的紫外吸收，文獻(xiàn)中檢測波長通常設(shè)置在230～254 nm之間。

在進(jìn)行含量測定研究時選擇合適的色譜柱也十分關(guān)鍵。各文獻(xiàn)使用的色譜柱填料均為C18，但型號不同。文獻(xiàn)[26]采用Sunfire BDS C18柱，此色譜柱采用新型的鍵合和端基封尾技術(shù)，極大地提高了酸、堿、中性化合物在低pH條件下的分離度，與普通色譜柱相比其柱效更高，穩(wěn)定性更好。另外色譜柱長度、粒徑大小等都會對結(jié)果產(chǎn)生影響，如文獻(xiàn)[24]使用的色譜柱粒徑相對較小，色譜峰的分離度相對更高。

對于流動相的選擇，流動相比例組成非常關(guān)鍵，有機(jī)相的比例決定洗脫強(qiáng)度。各文獻(xiàn)使用的流動相都為水相加有機(jī)相，所用的有機(jī)相是甲醇或乙腈。文獻(xiàn)[25]中報道，最初使用的流動相是乙酸鈉-乙腈（60∶40），但瑞舒伐他汀鈣在9.775 min出現(xiàn)寬峰，研究者不斷調(diào)整流動相比例，使有機(jī)相（乙腈）的比例從40%提高到70%，最終選擇乙酸鈉-乙腈（30∶70）作為流動相，可在改變峰形的同時縮短出峰時間，僅需5 min 的運(yùn)行時間，極大提高了檢測效率。流動相pH值也是關(guān)鍵因素，當(dāng)被分離的化合物在反相色譜系統(tǒng)中容易解離時，會導(dǎo)致峰形難看或拖尾，這時需調(diào)節(jié)流動相pH 值來改善[26]，表中各文獻(xiàn)研究都將流動相pH值調(diào)至弱酸性，抑制樣品組分解離，增加組分在固定相的保留，改善峰形，使化合物更好分離。

綜上，表2 各文獻(xiàn)中測定方法系統(tǒng)適用性均符合要求，兩主峰之間的分離度均大于1.5，分離效果良好，方法學(xué)驗證結(jié)果顯示其線性、重現(xiàn)性、準(zhǔn)確度、專屬性以及回收率等均符合要求，均適用于同時測定復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片的含量測定，但不同研究報道中色譜峰的出峰時間、色譜峰峰形以及分離度等有一定的差異，如何優(yōu)化色譜條件以滿足現(xiàn)行版《中國藥典》有關(guān)HPLC 含量測定方法學(xué)驗證各項要求，特別是專屬性試驗要求，仍需進(jìn)一步的研究與開發(fā)。

表2 各文獻(xiàn)含量測定色譜條件及分離度結(jié)果Table 2 Chromatographic conditions and separation results of content determination in each literature

3 含量均勻度測定

目前國內(nèi)外暫無文獻(xiàn)報道，在外國藥典中收載的單方制劑中，含量均勻度測定方法、方法驗證同含量測定方法[9]，此復(fù)方制劑含量均勻度測定可參考其復(fù)方制劑的含量測定方法。

4 溶出度測定

溶出度試驗是評價和控制藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)之一[32]。目前，國內(nèi)外對復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片的溶出度測定尚無文獻(xiàn)報道，因此本文主要根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)中依折麥布片和瑞舒伐他汀鈣片的溶出度測定方法來進(jìn)行分析和總結(jié)，見表3。

表3 各文獻(xiàn)溶出度測定方法Table 3 Dissolution determination methods of various documents

目前瑞舒伐他汀鈣片溶出度測定以槳法為主，有少部分采用籃法。文獻(xiàn)[33]采用的是籃法，30 min 后取樣，結(jié)果顯示溶出均一性良好，但此方法轉(zhuǎn)速較高。值得一提的是，瑞舒伐他汀鈣在酸性條件下不穩(wěn)定，會影響瑞舒伐他汀鈣溶出度的準(zhǔn)確測定[37]。所以文獻(xiàn)[34]中研究者為確保pH 值平衡，在HPLC 法進(jìn)行檢測時，用乙酸對流動相進(jìn)行調(diào)節(jié)，使pH 值控制在3.5，樣品溶出度可達(dá)97%以上，釋藥快速，符合規(guī)定。在溶出介質(zhì)的選擇方面，研究者們在進(jìn)行溶出實(shí)驗之前，分別對pH=1.2 鹽酸溶液、pH=4.5 乙酸鹽緩沖液、pH=6.6 枸櫞酸緩沖液或磷酸鹽緩沖液和水4 種溶出介質(zhì)進(jìn)行考察比較，結(jié)果顯示在這4種條件下藥物溶出度都符合要求，在pH=4.5 乙酸鹽緩沖液、pH=6.6 枸櫞酸緩沖液或磷酸緩沖液、水中較穩(wěn)定，但在pH=1.2 鹽酸溶液中瑞舒伐他汀不穩(wěn)定，會生成3 種降解產(chǎn)物，分別為瑞舒伐他汀非對映異構(gòu)體，瑞舒伐他汀-5S-內(nèi)酯，瑞舒伐他汀-5R-內(nèi)酯，影響瑞舒伐他汀鈣溶出度的準(zhǔn)確測定[38]。

國內(nèi)外對依折麥布片溶出度測定研究較少，尚未見詳細(xì)報道。國家藥品食品監(jiān)督管理局進(jìn)口藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)（JX20070201）[36]、USP43 法1 和法2[9]都采用槳法測定依折麥布片溶出度，均使用50 r/min 的轉(zhuǎn)速、用UV法測定，溶出介質(zhì)略有不同。

由于尚未見文獻(xiàn)報道依折麥布瑞舒伐他汀鈣片復(fù)方制劑的溶出度測定，所以綜合以上單方制劑的文獻(xiàn)報道提出該復(fù)方制劑溶出度研究的思考：

（1）溶出方法：本品為片劑，故首選槳法。

（2）溶出介質(zhì)：依折麥布片生物藥劑學(xué)分類（BCS）為Ⅱ類，難溶于水；瑞舒伐他汀鈣片BCS 分類為Ⅲ類[10]，溶解性比依折麥布片好，所以溶出介質(zhì)的篩選主要參考依折麥布片溶出方法進(jìn)行篩選，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行方法摸索調(diào)整。

（3）轉(zhuǎn)速：文獻(xiàn)結(jié)果表明，100、75、50 r/min 3 個轉(zhuǎn)速都能滿足要求，且溶出均一性都很好，基于槳法50 r/min 試驗條件溫和，故建議選擇50 r/min 作為轉(zhuǎn)速的控制條件。

（4）檢測方法：據(jù)文獻(xiàn)報道，UV 法、HPLC 法均可用于檢測兩種藥物單方制劑的溶出度，但本品為復(fù)方制劑，需綜合考慮各因素，兼顧兩者。瑞舒伐他汀鈣片不穩(wěn)定，在酸性條件下易降解，實(shí)驗過程中需考慮檢測及時性、是否能準(zhǔn)確定量測定等問題。HPLC較UV 法更加專屬，故建議首選HPLC 法作為該復(fù)方制劑溶出度定量測定方法。

5 有關(guān)物質(zhì)研究

有關(guān)物質(zhì)是否得到合理、有效控制，直接影響藥品質(zhì)量的有效性和安全性[18]95。復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片中有關(guān)物質(zhì)數(shù)量多且復(fù)雜，如有脫氟依折麥布、間氟依折麥布、瑞舒伐他汀酮等工藝雜質(zhì)，亦有依折麥布四氫呋喃類似物、瑞舒伐他汀內(nèi)酯、瑞舒伐他汀脫氫類似物等降解雜質(zhì)[37]，歸屬和分離此復(fù)方制劑中的相關(guān)雜質(zhì)具有很大挑戰(zhàn)，因此建立一種有效且分離度好的分析方法來檢測此復(fù)方制劑中的有關(guān)物質(zhì)極為關(guān)鍵。

朱雪萍等[39]采用HPLC 檢測復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片的有關(guān)物質(zhì)，采用Kromasil 100-5 C18Di‐mensions 柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以0.05 mol/L 磷酸二氫鉀（pH 4.0）-乙腈-甲醇（60:30:10）為流動相A，以0.05 mol/L 磷酸二氫鉀（pH 4.0）-乙腈-四氫呋喃（40:50:10）為流動相B，進(jìn)行梯度洗脫，在242 nm 波長處進(jìn)行分析檢測。結(jié)果顯示系統(tǒng)適用性符合要求，依折麥布、瑞舒伐他汀鈣及各雜質(zhì)間分離度符合要求。經(jīng)方法學(xué)驗證，該方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)、操作簡便，適用于檢查復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片中的有關(guān)物質(zhì)。鑒于文獻(xiàn)中的流動相體系大多較為復(fù)雜，配制方法繁瑣，蘇梅等[40]使用的流動相相對簡單，而且使用的色譜柱也較為特別。他們以甲醇-水-三氟乙酸作為流動相A，以含三氟乙酸的乙腈作為流動相B，使用HORIZON Aurashell C18/PFP 色譜柱（150 mm×4.6 mm，2.7 μm）進(jìn)行梯度洗脫，其特別之處在于選用的檢測波長：0～5 min 時在215 nm 波長處進(jìn)行分析檢測；5～90 min 時在242 nm 波長處進(jìn)行分析檢測。同時檢測出了依折麥布瑞舒伐他汀片中的23 種已知雜質(zhì)，各雜質(zhì)與兩主峰之間的分離度均大于1.5；主峰與各雜質(zhì)峰峰純度均為1.0。此檢測方法專屬性強(qiáng)，分離度高，準(zhǔn)確度好，檢測效率高。

綜上，在本復(fù)方制劑的有關(guān)物質(zhì)研究中，由于該制劑有關(guān)物質(zhì)比較多，難以分離，等度洗脫的方式已不能滿足要求，需要采用梯度洗脫；色譜柱須使用一些特殊的、分離能力強(qiáng)的C8或C18柱；流動相的選擇在有關(guān)物質(zhì)方法開發(fā)中極其重要，大多方法中流動相體系都較為復(fù)雜，配制繁瑣，今后研究可以此為切入點(diǎn)，摸索出分離度好、操作簡便的流動相體系。復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片的有關(guān)物質(zhì)研究是質(zhì)量研究中的重點(diǎn)也是難點(diǎn)，但國內(nèi)外研究報道還比較少，在此方面還需要不斷深入研究，以保證藥品安全、有效、質(zhì)量可控。

6 結(jié)語

藥物的質(zhì)量研究是貫穿于藥品整個生命周期包括研發(fā)、生產(chǎn)、儲存等過程的一個重要方面，它直接關(guān)系到藥物的安全性和有效性[18]3。復(fù)方依折麥布瑞舒伐他汀鈣片質(zhì)量控制方面還存在問題，如相關(guān)研究報道少、質(zhì)量研究資料不全面、大部分研究仍為單方的依折麥布片或瑞舒伐他汀鈣片，對于復(fù)方制劑研究甚少。藥物的質(zhì)量研究是一個系統(tǒng)工程，本品之所以暫時沒有收載進(jìn)各國藥典，原因是多方面的，復(fù)方制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)絕非簡單由兩個單方化藥的質(zhì)量檢查項目疊加而成，需要同時兼顧兩個主成分，還有一些需要綜合考慮的因素，如需要考慮兩主成分之間是否會相互干擾、兩主成分的溶出情況是否一致、在有關(guān)物質(zhì)研究時復(fù)方制劑會帶來更多潛在雜質(zhì)等，極具挑戰(zhàn)。但相信隨著科學(xué)研究技術(shù)的不斷發(fā)展，對本復(fù)方制劑研究的不斷深入，將會帶動其質(zhì)量研究從初級研究層次向更深層次邁進(jìn)，多學(xué)科的交叉融合、新技術(shù)的出現(xiàn)也將為本復(fù)方制劑的質(zhì)量研究帶來新思路。