曾少群，余浩權(quán)，魯?shù)?，田亮，謝春燕，岳峰

（廣東嘉博制藥有限公司，廣東清遠(yuǎn) 511517）

鹽酸羅哌卡因化學(xué)名為（S）-（-）-1-丙基-N-（2，6-二甲基苯基）-2-哌啶甲酰胺甲磺酸鹽一水合物，1996 年由瑞典Astra 公司研發(fā)上市[1]，并于同年9 月獲得FDA 批準(zhǔn)上市。阿斯利康的羅哌卡因早已進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)，商品名為“耐樂品”。目前，我國(guó)已批準(zhǔn)24家醫(yī)藥公司生產(chǎn)銷售羅哌卡因制劑，且主要?jiǎng)┬蜑樽⑸湟汉妥⑸溆梅坩槃?。鹽酸羅哌卡因注射液臨床上具有鎮(zhèn)痛[2]和麻醉作用，常用于外科手術(shù)麻醉[3-5]。根據(jù)藥物監(jiān)管部門及相關(guān)法規(guī)管理要求[6]，藥物制劑中元素雜質(zhì)控制對(duì)于患者的安全及有效用藥都至關(guān)重要。國(guó)際人用藥物注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)（The International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use,ICH）中元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則（Q3D）[7]對(duì)注射劑的元素雜質(zhì)控制作出了要求，除對(duì)注射劑中非有意添加的1 類元素（Cd、Pb、As）、2A 類元素（Co、Ni、V）、3 類元素（Li、Sb、Cu）等進(jìn)行評(píng)估[8]外，考慮到注射劑生產(chǎn)過程的生產(chǎn)組件浸出及包裝材料元素的遷移影響，同時(shí)也需對(duì)Al、Ca 和B 元素進(jìn)行評(píng)估。元素雜質(zhì)的監(jiān)測(cè)分析目前常用方法主要有原子吸收光譜法[9]、X 線熒光光譜法[10]、電感耦合等離子體發(fā)射光譜（ICP-OES）[11]、電感耦合等離子體-質(zhì)譜聯(lián)用（ICP-MS）[12]等，其中ICP-MS 和ICPOES 是ICHQ3D 推薦的藥物元素雜質(zhì)分析方法[13]，具有高靈敏度、低檢出限、樣品處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于環(huán)境[14]、材料、食品、藥品、醫(yī)學(xué)檢查等領(lǐng)域的微量元素檢測(cè)[15-19]。

本研究采用ICP-MS 法測(cè)定鹽酸羅哌卡因注射液中Li、B、Al、Ca、V、Co、Ni、Cu、As、Cd、Sb、Pb元素雜質(zhì)，同時(shí)對(duì)方法的檢測(cè)限、定量限、線性與范圍、準(zhǔn)確度、重復(fù)性、溶液穩(wěn)定性等進(jìn)行考察，以期為鹽酸羅哌卡因注射液的元素雜質(zhì)測(cè)定提供方法依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7800 電感耦合等離子體-質(zhì)譜聯(lián)用儀（Agilent公司）。

1.2 試劑與試藥

超純水（自制）；硝酸（批號(hào)：1119020，F(xiàn)isher）；儀器調(diào)諧液（含Ce、Co、Li、Tl、Y，批號(hào)：32-94GSX2，Agilent Technologies）。

鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 μg/mL，批號(hào)：20051135，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心）；多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（含Al、As、B、Ba、Be、Bi、Cd、Co、Cr、Cu、Fe、Ga、Li、Mg、Mn、Ni、Pb、Sb、Sn、Sr、Ti、Tl、V、Zn，100 μg/mL，批號(hào)：203001-4，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心）；含In、Lu、Re、Rh、Sc 元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg/mL，批號(hào)：20D4283，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心）；鍺標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 μg/mL，批號(hào)：19C039，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心）；鹽酸羅哌卡因注射液（批號(hào)：180401、180404、200801、200802、200803、200804、200805、200806，廣東嘉博制藥有限公司）。

2 方法

2.1 ICP-MS測(cè)定條件

內(nèi)標(biāo)元素Ge 通過T 型三通管在線引入等離子體，清洗程序?yàn)檫M(jìn)樣口水洗進(jìn)樣針外壁15 s，進(jìn)樣管道分別用5%硝酸溶液和水清洗20 s。ICP-MS具體工作參數(shù)詳見表1。

表1 ICP-MS工作參數(shù)Table 1 The parameters of ICP-MS

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備 取鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加2%的硝酸溶液稀釋制成質(zhì)量濃度為20、40、80、160、320 μg/L 的Ca 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液；取含多種元素的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加2%硝酸稀釋制成含Cd 元素0.5、1、2、5、10 μg/L，Pb、Co 元素1、2、5、10、20 μg/L，V、As 元素2、5、10、20、40 μg/L，Ni 元素5、10、20、40、80 μg/L，Li、B、Al、Cu、Sb 為20、40、80、160、320 μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密移取含In、Lu、Re、Rh、Sc 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg/mL）0.1 mL 和鍺標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 μg/mL）0.01 mL 置50 mL 容量瓶中，加入異丙醇5 mL，用2%硝酸溶液定容至刻度，作為內(nèi)標(biāo)溶液（0.2 μg/mL）。

2.2.3 供試品溶液的制備 取鹽酸羅哌卡因注射液5 mL于25 mL容量瓶中，加入100 μL鹽酸，用2%硝酸定容至刻度，搖勻即得供試品溶液。

2.2.4 空白溶液的制備 取100 μL 鹽酸至25 mL 容量瓶中，加2%硝酸定容至刻度，搖勻即得空白溶液。

2.3 方法學(xué)考察

按照同位素豐度表推薦的質(zhì)子數(shù)選取質(zhì)子數(shù)分別為7Li、11B、27Al、44Ca、51V、59Co、60Ni、63Cu、75As、111Cd、121Sb、208Pb、45Sc、72Ge、103Rh、115In、185Re 的同位素作為測(cè)定目標(biāo)。其中7Li、11B、27Al、44Ca、51V 以45Sc作為內(nèi)標(biāo)，59Co、60Ni、63Cu、75As 選取72Ge 元素為內(nèi)標(biāo)，111Cd 選取115In 作為內(nèi)標(biāo)，121Sb、208Pb 選取185Re 作為內(nèi)標(biāo)。以空白溶液為基準(zhǔn)測(cè)定各元素濃度。

2.3.1 線性與范圍 取“2.2”項(xiàng)下配制的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，按“2.1”項(xiàng)測(cè)定條件進(jìn)行測(cè)試，以各元素標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度（μg/L）為橫坐標(biāo)、待測(cè)元素響應(yīng)值（CPS）與內(nèi)標(biāo)元素響應(yīng)值（CPS）的比值作為縱坐標(biāo)，繪制12 種元素標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程及相關(guān)系數(shù)測(cè)定結(jié)果見表2?？梢姡髟鼐€性相關(guān)系數(shù)r均大于0.999 0，表明各元素的線性關(guān)系良好。

2.3.2 檢出限與定量限 取7份空白溶液，分別進(jìn)行測(cè)試，根據(jù)響應(yīng)值計(jì)算檢測(cè)限與定量限，根據(jù)ICHQ3D 指導(dǎo)原則及相關(guān)指導(dǎo)資料，明確各元素在本產(chǎn)品中的限度，結(jié)果見表2?？梢?，各元素的檢出限及定量限均小于10%限度，表明方法可以較好地應(yīng)用于鹽酸羅哌卡因注射液中的元素雜質(zhì)測(cè)定。

表2 方法檢出限、定量限、線性及范圍考察結(jié)果Table 2 The results of detection limit,limit of quantitation,linearity and range

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 平行制備6 份中濃度的加標(biāo)供試品（批號(hào)180401）溶液（加標(biāo)量分別為L(zhǎng)i、B、Al、Ca、Cu、Sb 元素80 μg/L，Ni 元素20 μg/L，V、As 元素10 μg/L，Co、Pb 元素5 μg/L，Cd 元素2 μg/L），按“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定各元素濃度，并計(jì)算RSD（n=6），結(jié)果見表3?？梢?，各元素測(cè)定結(jié)果RSD（n=6）均小于10%，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.4 中間精密度試驗(yàn) 由2 位實(shí)驗(yàn)人員分別制備6 份中濃度的加標(biāo)供試品（批號(hào)180401）溶液（加標(biāo)量分別為L(zhǎng)i、B、Al、Ca、Cu、Sb 元素80 μg/L，Ni 元素20 μg/L，V、As 元素10 μg/L，Co、Pb 元素5 μg/L，Cd元素2 μg/L），按“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定各元素濃度，并計(jì)算RSD，結(jié)果見表3?？梢?，各元素濃度測(cè)定結(jié)果RSD（n=12）均小于10%，表明方法精密度良好。

2.3.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取各元素線性溶液的第2個(gè)濃度及以各元素線性溶液的第2個(gè)濃度為加標(biāo)量的加標(biāo)供試品（批號(hào)180401）溶液，分別在室溫0 h及24 h按“2.1”項(xiàng)方法進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表3?？梢?，在0～24 h內(nèi)，加標(biāo)供試品溶液及標(biāo)準(zhǔn)溶液中各元素濃度相對(duì)0 h 變化比率均小于10%，表明溶液穩(wěn)定性良好。

表3 重復(fù)性、精密度及溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Results of reproducibility,precision and solution stability test

2.3.6 回收率試驗(yàn) 取鹽酸羅哌卡因注射液（批號(hào)：180401）與各元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別配制低、中、高濃度的加標(biāo)供試品溶液各3 份，按照“2.1”項(xiàng)下儀器條件進(jìn)行測(cè)試，分別計(jì)算各元素的回收率，結(jié)果見表4?？梢姡髟氐募訕?biāo)回收率均在80%～110%之間，表明方法準(zhǔn)確度良好。

表4 回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 4 Recovery results

2.4 樣品測(cè)定結(jié)果

取鹽酸羅哌卡因注射液，按照“2.1”項(xiàng)下測(cè)試方法，分別測(cè)定Ca、Cd、Pb、Co、V、As、Ni、Li、B、Al、Cu、Sb 元素含量，結(jié)果見表5?？梢?，采用低硼硅材質(zhì)包裝材料（樣品批號(hào)180401、180404）和中硼硅材質(zhì)包裝材料（樣品200801、200802、200803、200804、200805、200806）生產(chǎn)樣品中B、Al 元素含量存在差異，表明不同材質(zhì)包裝材料元素析出不同，但2種包裝材質(zhì)下的產(chǎn)品元素雜質(zhì)均符合質(zhì)量控制要求。

表5 樣品中元素雜質(zhì)測(cè)定結(jié)果Table 5 Determination of element impurities in samples(n=2) ρ/(μg·L-1)

3 討論

根據(jù)元素出現(xiàn)的可能性，評(píng)估藥品中元素雜質(zhì)主要來自生產(chǎn)設(shè)備、原輔料包材及元素的表觀天然豐度和環(huán)境分布，因此鹽酸羅哌卡因注射液需測(cè)定控制的主要有原輔料、生產(chǎn)設(shè)備、包裝材料等來源風(fēng)險(xiǎn)元素，包括Ca、Cd、Pb、Co、V、As、Ni、Li、B、Al、Cu、Sb 等12 種元素。本文依據(jù)品種質(zhì)控要求，開發(fā)并建立的12種元素雜質(zhì)測(cè)定方法具有重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高、耐用性好等優(yōu)點(diǎn)，且儀器操作簡(jiǎn)單、樣品配制過程簡(jiǎn)便，可同時(shí)測(cè)定多種元素，從而大大提高了鹽酸羅哌卡因注射液質(zhì)控過程的工作效率。然而，因ICP-MS 的高靈敏度，元素自然豐度及容器析出等也給產(chǎn)品元素測(cè)定造成了一定干擾，本研究采用在測(cè)定過程中以空白校準(zhǔn)來減少基底干擾的方式優(yōu)化方法準(zhǔn)確度。另外，盛裝容器要選用無元素干擾的材質(zhì)，避免因盛裝容器元素析出對(duì)產(chǎn)品的元素雜質(zhì)測(cè)定造成干擾。容器的清洗方法也要特別注意，使用稀釋劑（2%硝酸）多次清洗，且洗后容器不可接觸任何金屬材質(zhì)及其他可能含有元素的撐桿進(jìn)行晾干，避免造成容器污染。此外，ICP-MS 的高靈敏度也對(duì)儀器所用相應(yīng)部件、儀器維護(hù)方法等有較高要求，如何做到徹底去除儀器、容器及自然環(huán)境對(duì)測(cè)定結(jié)果造成的干擾，仍需進(jìn)一步研究。