黃文波，范舒舒，徐靜，劉玉蘭，陳惠英，張潯，馬占忠

B 族鏈球菌（group B streptococcus，GBS）又稱無乳鏈球菌，屬革蘭氏陽性球菌，是女性生殖道與腸道的條件致病菌[1]。全球 10% ～ 35% 的孕婦伴有 GBS 感染，可引起早產(chǎn)、胎膜早破、宮內(nèi)感染等不良妊娠結(jié)局。其中約 50% 會引起新生兒肺炎、腦膜炎和敗血癥等疾病[2-3]。GBS 是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和新生兒感染的首要致病菌之一，嚴(yán)重威脅母嬰健康[4-5]。研究顯示，GBS 感染率在不同國家和地區(qū)的女性中有差異[6-7]。本研究旨在探討粵北地區(qū)圍產(chǎn)期孕婦 GBS 感染情況及對不良妊娠結(jié)局的影響，為 GBS 的臨床診療提供科學(xué)依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 對象和材料

1.1.1 研究對象 以 2021年 1 - 12月在廣東省粵北人民醫(yī)院就診的 3082 例圍產(chǎn)期孕婦為研究對象。年齡 18 ～ 47 歲，平均（29.88 ± 4.57）歲；孕周 35 ～ 37 周，平均（36.0 ± 0.7）周。

納入標(biāo)準(zhǔn)：① B 超確認(rèn)妊娠 35 ～ 37 周；②取樣前 24 小時內(nèi)無性生活、無陰道洗液及藥膏處理等；③所有孕婦知情同意，自愿進(jìn)行 GBS 檢測。

排除標(biāo)準(zhǔn)：① 2 周內(nèi)使用過抗生素；②妊娠合并糖尿病、高血壓等疾?。虎塾袊?yán)重心、肝、腎功能異常疾??；④有其他生殖道感染。

1.1.2 試劑與儀器 采用實(shí)時熒光定量 PCR 法檢測 GBS。核酸提取試劑和 GBS 核酸檢測試劑盒均購自福建泰普生物科學(xué)（中國）有限公司；CFX96熒光定量 PCR 儀為美國 Bio-Rad 公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 采集樣本 參照美國疾病控制與預(yù)防中心發(fā)布的《圍產(chǎn)期 GBS 預(yù)防指南》，對孕婦進(jìn)行陰道及直腸分泌物取材[8]。孕婦取仰臥位，先擦去陰道內(nèi)過多的分泌物，將無菌拭子在陰道 1/3 處輕輕旋轉(zhuǎn)取得分泌物；再將另一無菌拭子插入肛門，在肛門括約肌以上 2 ～ 3 cm 處，沿腸壁輕輕旋轉(zhuǎn)取得標(biāo)本。將采集好的分泌物拭子放回?zé)o菌拭子管中，密封送檢。

1.2.2 提取 DNA 采集的拭子管中加入 0.5 ml清洗液，充分振蕩洗脫后將同一孕婦的陰道分泌物及直腸分泌物樣本倒入同一個 1.5 ml 離心管，13 000 r/min 離心 5 min，棄上清；加入 1 ml 清洗液振蕩重懸，13 000 r/min 離心 5 min，棄上清；加入 50 μl 清洗液重懸，樣本管中各加入 1 管提取固形物，高速渦旋振蕩 5 min，95 ℃ 干浴 2 min，13 000 r/min 離心 2 min，上清液用于 PCR 擴(kuò)增。

1.2.3 GBS 基因擴(kuò)增 PCR 反應(yīng)體系：GBS-PCR反應(yīng)液 44.3 μl，Taq DNA Polymerase 0.5 μl，UNG 0.2 μl，DNA 模板 5 μl，總體積 50 μl。PCR 反應(yīng)條件：37 ℃，2 min；94 ℃，2 min；94 ℃，20 s，55 ℃，45 s，40 個循環(huán)；采集 FAM 和 Texas Red熒光信號。

1.2.4 結(jié)果判讀 ①GBS 陰性：FAM 熒光通道循環(huán)閾值（cycle treshold，Ct）= 40，Texas Red（內(nèi)參）Ct 值 ＜ 40，且有較好的對數(shù)增長曲線；② GBS陽性：FAM 通道 Ct 值 ≤ 33，且有較好的對數(shù)增長曲線；Texas Red 通道 Ct 值 ≤ 40。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用 SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率表示，組間比較采用 χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 圍產(chǎn)期孕婦 GBS 感染情況

在 3082 例圍產(chǎn)期孕婦中，實(shí)時熒光定量PCR 法檢出 GBS 陽性 341 例，感染率 11.06%（341/3082）。GBS 陽性和陰性的熒光 PCR 擴(kuò)增曲線如圖1 所示。

圖1 PCR 擴(kuò)增曲線（A：GBS 陰性；B：GBS 陽性）Figure 1 PCR amplification curve (A: GBS negative; B: GBS positive)

孕婦按年齡段劃分為 4 組，各年齡組 GBS陽性率見表1，各年齡組陽性率相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05）。

表1 不同年齡組孕婦 GBS 陽性分布Table 1 The positive distribution of GBS among pregnant women in different age groups

2.2 GBS 感染對不良妊娠結(jié)局的影響

GBS 陽性孕婦中不良妊娠結(jié)局的發(fā)生率為32.55%（111/341），其中早產(chǎn) 16 例，胎膜早破54 例，宮內(nèi)感染 21 例和產(chǎn)后出血 20 例。GBS陰性孕婦中不良妊娠結(jié)局的發(fā)生率為 15.18%（416/2741）。GBS 陽性孕婦早產(chǎn)、胎膜早破、宮內(nèi)感染的不良妊娠發(fā)生率均顯著高于 GBS 陰性孕婦，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.01），兩組間產(chǎn)后出血差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05），見表2。

表2 兩組孕婦不良妊娠結(jié)局的比較[n（%）]Table 2 Comparison of adverse pregnancy outcomes between two groups of pregnant women [n (%)]

3 討論

近年來，孕婦 GBS 感染所致的母嬰安全問題受到越來越多的關(guān)注，有學(xué)者認(rèn)為 GBS 對絨毛膜吸附和穿透力強(qiáng)，并通過產(chǎn)生蛋白水解酶和吞噬作用侵襲胎膜，導(dǎo)致胎膜早破[9]。另外，GBS 感染也會增加胎兒早產(chǎn)、宮內(nèi)感染、呼吸窘迫、腦膜炎等不良結(jié)局，因此，有必要對妊娠期孕婦進(jìn)行 GBS篩查，對 GBS 感染的孕產(chǎn)婦進(jìn)行抗感染干預(yù)，有助于降低不良妊娠的發(fā)生[10]。

不同國家和地區(qū)報(bào)道的孕婦 GBS 感染率有較大差異。Russell 等[2]對 85 個國家的 299 924 名孕婦進(jìn)行 Meta 分析報(bào)道：全球孕產(chǎn)婦 GBS 感染率約為 18%，存在區(qū)域差異（10% ～ 35%），南亞的感染率約 12.5%、東亞 11%。中國大陸孕婦 GBS感染率為 3.7% ～ 14.52%[6]。楊玉妮[7]對 252 207 名孕婦進(jìn)行 Meta 分析報(bào)道：我國孕婦平均 GBS 感染率為 8.1%，其中中部地區(qū)為 9.3%、東部地區(qū)8.3%、西部地區(qū) 6.8%。廣東省孕婦 GBS 感染率為 8.9%，江蘇省 8.7%，浙江省 8.6%，陜西省5.2%，北京市 7.1%[11-13]。廣東省內(nèi)廣州地區(qū)孕婦GBS 感染率為 6.3%[14]，深圳地區(qū) 4.5%[15]，佛山地區(qū) 10.15%[16]。2015年，鄭海燕等[17]報(bào)道的韶關(guān)地區(qū) GBS 感染率 5.60%。本研究采用熒光定量PCR 法檢測粵北地區(qū)圍產(chǎn)期孕婦 GBS 感染率為11.06%。高于全國平均水平（8.1%）和廣東省平均水平（8.9%）。各地報(bào)道的孕婦 GBS 感染率存在較大差異，可能與檢測方法、樣本采集部位等因素有關(guān)。左麥紅等[18]研究報(bào)道熒光定量 PCR 檢測GBS 陽性率（6.41%）顯著高于培養(yǎng)法（3.66%），直腸分泌物 GBS 陽性率（6.34%）顯著高于陰道分泌物（3.10%）。國內(nèi)的研究報(bào)道也基本一致認(rèn)為PCR 法陽性率高于培養(yǎng)法，直腸分泌物的陽性率高于陰道分泌物[19-20]。腸源性感染是陰道感染的潛在途徑，臨床采樣時應(yīng)該陰道和直腸同時采樣。美國CDC 圍產(chǎn)期 GBS 預(yù)防指南指出對孕婦進(jìn)行陰道分泌物和直腸分泌物標(biāo)本的聯(lián)合采集[8]。因此，推薦采用熒光定量 PCR 法同時檢測陰道分泌物和直腸分泌物，提高 GBS 檢出率，減少漏診。

綜上所述，粵北地區(qū)圍產(chǎn)期孕婦 GBS 感染率較高，GBS 感染增加了不良妊娠結(jié)局的發(fā)生率，應(yīng)對圍產(chǎn)期孕婦開展 GBS 常規(guī)篩查和干預(yù)，減少不良妊娠結(jié)局的發(fā)生，提高母嬰安全保障。