胡明翠

（安順職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州 安順 561000）

在人們對(duì)健康意識(shí)有了更多關(guān)注和關(guān)心后，加之人們的生活和生產(chǎn)質(zhì)量更高，因此，對(duì)于飲用水的安全要求也提出了更高的要求。水是最普通的資源，但卻是人類生存的必需品。如果一個(gè)人連續(xù)不喝水的天數(shù)在3 天以上7 天以下，那么人體缺少的水量達(dá)到20%后，血液就會(huì)出現(xiàn)高度濃縮的狀態(tài)，以至于不能像正常人體一樣進(jìn)行氧化、還原、分解、合成等生命活動(dòng)，就會(huì)導(dǎo)致死亡。并且大量的專家、醫(yī)學(xué)學(xué)者也對(duì)人類每天的飲水需求做出了一個(gè)科學(xué)的指標(biāo)，比如每天8 杯水的概念。在生活中為了飲水方便，大部分人飲水時(shí)會(huì)使用水杯，尤其在冬季時(shí)還會(huì)使用保溫杯，以及為了實(shí)現(xiàn)保健功能也會(huì)在日常使用保溫杯[1]。下文就水杯壁微生物污染程度及預(yù)防措施展開詳細(xì)分析。

本次研究的目的：通過研究水杯壁微生物的污染程度及比較流水沖洗法（A 組）、酒精浸泡法（B 組）、煮沸消毒法（C 組）三種不同消毒方法效果差異，為健康飲水的生活方式提供依據(jù)，為水杯的消毒方法提供參考，為新型水杯的設(shè)計(jì)提供新思路。

本次研究使用的方法：選取安順職業(yè)技術(shù)學(xué)院應(yīng)用醫(yī)藥系醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)2021 級(jí)學(xué)生使用的60 個(gè)水杯為研究對(duì)象，按照完全隨機(jī)的方法選取60 個(gè)受試對(duì)象（水杯）進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定；而后將其隨機(jī)分為3 組（A、B、C），每組20 個(gè)水杯，通過不同消毒方法消毒后，經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)72h 后測(cè)定菌落數(shù)，并對(duì)消毒后微生物陽性率進(jìn)行比較，比較每組的清洗消毒效果。

本次研究所獲得結(jié)果：（1）清洗消毒前微生物陽性率：A、B、C 三組清洗消毒前細(xì)菌陽性率最高為100.0%，最低為90.0%，陽性率分別為95.0%、100.0%、90.0%，通過X2 檢驗(yàn)得出，三組陽性率比較差別并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的明顯意義（P ＞0.05）。（2）在采集檢測(cè)的60 份樣品中，革蘭陽性菌葡萄球菌污染45 個(gè)，染菌率為75.00%；革蘭陰性菌大腸桿菌污染32 個(gè)，染菌率為53.33%；革蘭陰性菌變形桿菌污染21 個(gè)，染菌率為35%；革蘭陽性鏈球菌污染9 個(gè)，染菌率為15.00%。（3）清洗消毒前微生物陽性率：A、B、C 三組清洗消毒前細(xì)菌陽性率最高為60.0%，最低為5.0%，陽性率分別為65.0%、50%、15.0%，通過X2 檢驗(yàn)得出，三組陽性率比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的明顯意義（P ＞0.05）。（4）三組受檢對(duì)象清洗消毒后水杯微生物菌落計(jì)數(shù)結(jié)果分別為15.34cfu/cm2、1.03cfu/cm2、2.24cfu/cm2，A 組清洗消毒無效，B、C 兩組清洗消毒有效。

本次研究得出的結(jié)論：超過九成的醫(yī)學(xué)生水杯上會(huì)攜帶常見微生物。水杯這種日常用品已經(jīng)被醫(yī)學(xué)生帶入了特殊實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，可能成為引起交叉污染的傳染源。通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示在清洗消毒方法上，酒精消毒、高溫滅菌的方式對(duì)水杯上殘留的微生物進(jìn)行殺滅，具有良好的消毒效果。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取安順職業(yè)技術(shù)學(xué)院應(yīng)用醫(yī)藥系醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)2021 級(jí)學(xué)生使用的60 個(gè)水杯為研究對(duì)象，并且靈活使用完全隨機(jī)法，將60 個(gè)研究對(duì)象分成了A、B、C 三組，并且每組的數(shù)量都保持20 個(gè)。

入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）一律采用帶蓋水杯；（2）水杯使用超過兩個(gè)月；（3）水杯無破損。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 對(duì)水杯壁微生物污染程度進(jìn)行確認(rèn)

對(duì)60 個(gè)水杯的水杯壁進(jìn)行樣本采集，用消毒棉簽沾取無菌生理鹽水反復(fù)涂抹水杯壁（約1cm2）周圍五次，放入1ml 的生理鹽水中，進(jìn)行稀釋，并將稀釋的菌懸液（1ml）傾倒在瓊脂平板上，然后將其保持在恒溫的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；當(dāng)培養(yǎng)到僅用肉眼觀察到的菌落時(shí)，就要第一時(shí)間進(jìn)行計(jì)數(shù)，正式計(jì)數(shù)前要提前挑取菌落并對(duì)其進(jìn)行革蘭染色，首先是要細(xì)致觀察它的形態(tài)，其次要仔細(xì)鑒定它的菌屬，若發(fā)現(xiàn)其呈現(xiàn)出藍(lán)紫色的狀態(tài)，那么可以將其命名為“革蘭陽性菌”，如果呈現(xiàn)出紅色，則稱其為“革蘭陰性菌”。另外，通過觀察，還可以見葡萄球菌種，也是水杯壁微生物的主要組成[2]。細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法按照衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》要求進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為≤10CFU/cm2。最終計(jì)算出每平方厘米水杯的菌落數(shù)CFU/cm2。[3]

1.2.2 各組操作方法

1.流水沖洗法（A 組）。對(duì)20 個(gè)水杯進(jìn)行流水（自來水）沖洗2min，在相應(yīng)的時(shí)間取樣進(jìn)行細(xì)菌懸液的制備，并進(jìn)行稀釋，在瓊脂平板上將稀釋的菌懸液（1ml）傾倒在上面，要保持在恒溫的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；當(dāng)培養(yǎng)到可以用肉眼看到的菌落時(shí)，要第一時(shí)間進(jìn)行計(jì)數(shù)，但在正式計(jì)數(shù)之前，要提前挑取菌落進(jìn)行革蘭染色，要注意兩點(diǎn)：第一點(diǎn)是對(duì)它的形態(tài)細(xì)致觀察，第二點(diǎn)是對(duì)它的菌屬做好鑒定。

2.酒精浸泡法（B 組）。對(duì)20 個(gè)水杯進(jìn)行酒精（75%濃度的消毒酒精）浸泡2min，在相應(yīng)的時(shí)間取樣進(jìn)行細(xì)菌懸液的制備，進(jìn)行稀釋，將稀釋的菌懸液（1ml）傾倒在瓊脂平板上，保持所培養(yǎng)的培養(yǎng)箱是恒溫的；當(dāng)培養(yǎng)到菌落用肉眼就可以觀察到時(shí)，就要第一時(shí)間進(jìn)行計(jì)數(shù)，要注意的是在正式計(jì)數(shù)前，要提前挑取菌落進(jìn)行革蘭染色，一方面要細(xì)致觀察它的形態(tài)，另一方面要仔細(xì)鑒定它的菌屬。

3.煮沸消毒法（C 組）。對(duì)20 個(gè)水杯進(jìn)行煮沸消毒2min，在相應(yīng)的時(shí)間取樣進(jìn)行細(xì)菌懸液的制備，進(jìn)行稀釋，將稀釋的菌懸液（1ml）傾倒在瓊脂平板上，要讓其在恒溫的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；當(dāng)培養(yǎng)到可以用肉眼看到菌落的程度時(shí)，要第一時(shí)間進(jìn)行計(jì)數(shù)，要提前挑取菌落進(jìn)行革蘭染色之后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)，既要細(xì)致觀察它的形態(tài)外，同時(shí)還要注意仔細(xì)鑒定它的菌屬。

1.2.3 采樣時(shí)間

A、B、C 三組受試對(duì)象要在清理消毒之前進(jìn)行一次采樣，清洗消毒后采樣一次，在采樣過程中，采取的水杯都要實(shí)行隨機(jī)采樣。

1.2.4 采樣方法

按照《消毒技術(shù)規(guī)范》規(guī)定的采樣方法進(jìn)行采樣：用浸有無菌生理鹽水的棉拭子在水杯壁內(nèi)側(cè)面往返涂擦2 次（面積約1cm2）……標(biāo)本在統(tǒng)一編號(hào)后立即送檢。

1.2.5 細(xì)菌檢測(cè)方法

將采樣管在混勻器上振蕩20s 或用力振打80 次……計(jì)數(shù)菌落數(shù)（colony forming unit，cfu）。水杯清洗消毒后仍存在的細(xì)菌按照革蘭染色法進(jìn)行菌屬鑒定。

菌落數(shù)計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)（cfu/cm2）=平板上菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)/采樣面積（cm2）

1.2.6 判斷標(biāo)準(zhǔn)

消毒效果：參照《消毒技術(shù)規(guī)范》消毒后細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌等為消毒合格。

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

在數(shù)據(jù)分析時(shí)使用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，如果P＜0.05，則意味著其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

本次研究受試對(duì)象共60 個(gè)飲水杯，其中玻璃杯25個(gè)，占41.7%，保溫杯35 個(gè)，占58.4%，男生使用水杯30 個(gè)，占50%，女生使用水杯30 個(gè)，占50%。

2.2 清洗消毒前微生物陽性率比較

A、B、C三組清洗消毒前細(xì)菌陽性率最高為100.0%，最低為90.0%，通過X2檢驗(yàn)得出，三組陽性率比較差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.3490＞0.05），組間比較沒有差別，具有可比性，結(jié)果見表1。

表1 清洗消毒前微生物陽性率比較

2.3 清洗消毒前水杯微生物污染情況

在采集檢測(cè)的60 份樣品中,革蘭陽性菌葡萄球菌污染45 個(gè)，染菌率為75.00%；革蘭陰性菌大腸桿菌污染32 個(gè)，染菌率為53.33%；革蘭陰性菌變形桿菌污染21 個(gè)，染菌率為35%；革蘭陽性鏈球菌污染9 個(gè)，染菌率為15.00%，見表2。

表2 清洗消毒前水杯微生物污染情況

2.4 清洗消毒后水杯微生物陽性率比較

A、B、C 三組清洗消毒后細(xì)菌陽性率最高為60.0%，最低為5.0%，通過X2檢驗(yàn)得出，三組陽性率比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.0153＜0.05），結(jié)果見表3。

表3 清洗消毒后微生物陽性率比較

2.5 清洗消毒后水杯微生物菌落計(jì)數(shù)結(jié)果

A、B、C 三組清洗消毒后菌落計(jì)數(shù)結(jié)果及效果評(píng)價(jià)，結(jié)果見表4。

表4 清洗消毒后各組菌落計(jì)數(shù)

3 討論

3.1 水杯微生物污染狀況

以2021 級(jí)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)學(xué)生使用的水杯為研究對(duì)象，采用隨機(jī)抽樣的方法進(jìn)行樣本采樣，在培養(yǎng)皿上進(jìn)行分離培養(yǎng)，通過鑒定，檢測(cè)是否存在微生物污染的現(xiàn)象，利用細(xì)菌革蘭染色結(jié)果的不同，鑒定細(xì)菌為革蘭陰性或者革蘭陽性菌，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及調(diào)查報(bào)告不難看出，飲水杯的污染較為嚴(yán)重，大部分水杯未得到有效的清洗消毒，微生物污染陽性率較高，其中以葡萄球菌最為嚴(yán)重，水杯污染個(gè)數(shù)為45 個(gè)，染菌率為75%；其次是大腸桿菌，水杯污染個(gè)數(shù)為32 個(gè)，染菌率為53.33%；變形桿菌和鏈球菌污染較少，但也存在一定程度的污染。

3.2 三種消毒方法的結(jié)果可行性

通過對(duì)三種清洗消毒法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，從結(jié)果不難發(fā)現(xiàn)A 組（流水沖洗法）的效果不明顯，原因可能在于自來水中存在微生物，用該法清洗還是會(huì)導(dǎo)致微生物污染，使得菌落計(jì)數(shù)＞10cfu/cm2，而B 組和C 組分采用的是酒精浸泡法和煮沸消毒法，通過酒精消毒、高溫滅菌的方式對(duì)水杯上殘留的微生物進(jìn)行殺滅，具有良好的消毒效果。

4 結(jié)論

綜上所述，水杯這一日常生活用品已經(jīng)被部分醫(yī)學(xué)生攜帶進(jìn)了特殊的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，90%以上的醫(yī)學(xué)生的水杯上會(huì)攜帶一些常見微生物，比如葡萄球菌等，這便是交叉污染的一個(gè)傳染源[4]。結(jié)合這些過程與結(jié)論，要更加積極地深化相關(guān)健康知識(shí)的普及，逐步提高國人的健康防護(hù)意識(shí)，摒棄不良的生活行為習(xí)慣，倡導(dǎo)科學(xué)健康的飲水習(xí)慣，選擇更有效、更科學(xué)的清洗消毒方法。要進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)水杯清潔衛(wèi)生的學(xué)習(xí)培訓(xùn)，讓學(xué)生對(duì)自己所用的水杯進(jìn)行生物檢測(cè)，親手取樣、檢測(cè)，直觀地了解病原體的形狀及不同病原體對(duì)身體的影響與危害，從思想源頭上提升學(xué)生的健康意識(shí)與清潔意識(shí)[5]。通過上文實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，在清洗消毒方法上，酒精消毒以及高溫滅菌的方式對(duì)水杯上殘存的微生物進(jìn)行殺滅，具有更好的消毒效果。