柴小兵，張利，褚菲菲，吳慧麗

結(jié)直腸癌（CRC）是一種侵襲性癌癥，發(fā)生在結(jié)腸或直腸，是全球第三大常見惡性腫瘤［1］。盡管治療CRC可采取手術(shù)、化學療法、放射療法和分子療法，但CRC患者的存活率仍然較低［2-3］。因此，深入了解CRC的發(fā)病機制對于制定新的治療策略和改善CRC患者的預后具有重要意義。近年來，RNA甲基化修飾尤其是N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine，m6A）甲基化修飾被證實在腫瘤的進展中發(fā)揮重要作用。m6A甲基化修飾是一個動態(tài)過程，主要受甲基化轉(zhuǎn)移酶復合物、去甲基化酶、結(jié)合蛋白的調(diào)控［4］。人類抗原R（HuR）是m6A甲基化修飾的識別蛋白。HuR在CRC中高表達，沉默HuR可抑制CRC細胞轉(zhuǎn)移［5］。但其具體調(diào)控機制尚不完全明確。生物信息分析顯示，長鏈非編碼RNA（lncRNA）T細胞受體γ位點反義RNA1（T cell receptor gamma locus antisense RNA1，TRG-AS1）上存在m6A位點，且TRG-AS1能與HuR蛋白相互作用。相關(guān)研究顯示，沉默TRG-AS1可明顯抑制肝癌細胞增殖、遷移、侵襲［6］。但HuR能否通過調(diào)控TRG-AS1影響CRC細胞惡性生物學行為尚不明確。因此，本研究旨在探究HuR對CRC細胞增殖、凋亡、遷移、侵襲的影響及其作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2019年5月—2021年5月在鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院首次確診為CRC患者的癌組織以及距離癌組織3 cm處的癌旁組織，共19對。所有組織收集后立即凍存于液氮中。患者均簽署知情同意書，本研究得到鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院倫理委員會的批準（倫理號：201901）。人正常結(jié)腸上皮細胞NCM460及CRC細胞HCT116、SW480、LO?VO均購自上海佰曄生物科技中心。35只5周齡的雌性BALB/c裸鼠購自廣州銳格生物科技有限公司［生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2021-0059］。HuR小干擾RNA（si-HuR，序列：5′-UCAAAGACGCCAACUUGUA-3′）及其陰性對照（si-NC，序列：5′-UAAGGCUAUGAAGAGAUAC-3′）、HuR過表達物（OE-HuR）及其陰性對照（OE-NC）、TRG-AS1過表達物（pcDNA-TRG-AS1）及其陰性對照（pcDNA）均購自河南睿英生物公司；DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清購自武漢益普生物公司；EpiQuik M6A RNA甲基化定量檢測試劑盒（比色法）購自廈門慧嘉生物公司；CCK-8試劑盒購自杭州昊鑫生物公司；Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒購自翌圣生物科技公司；兔源一抗HuR、m6A、IgG、GAPDH及羊抗兔IgG二抗均購自英國Abcam公司。ABI-7500實時熒光定量PCR儀購自北京賽百奧科技有限公司；蛋白電泳儀購自北京六一生物科技有限公司；FK-SY96A酶標儀購自山東方科儀器有限公司；流式細胞儀購自上海睿鈺生物公司；XDS-100D型倒置光學顯微鏡購自上海蔡康光學儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng) 將NCM460、HCT116、SW480、LOVO細胞置于含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，并在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)。

1.2.2 比色法檢測m6A含量 按照EpiQuik m6A RNA甲基化定量檢測試劑盒（比色法）說明書檢測組織和細胞中的m6A含量。

1.2.3 實時熒光定量PCR（qPCR）檢測組織和細胞中TRGAS1表達 使用TRIzol提取組織和細胞中RNA，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板在ABI-7500實時熒光定量PCR儀上進行實時熒光定量PCR。反應(yīng)體系：上、下游引物各1μL，cDNA模板1μL，SYBR premix 10μL，補無菌水至總體積為20μL。反應(yīng)條件：95℃預變性10 min；95℃變性10 s，60℃退火30 s，共45個循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參，通過2-ΔΔCt法計算TRG-AS1的表達水平。引物及序列見表1。

Tab.1 qPCR primer sequences表1 qPCR引物序列

1.2.4 Western blot檢測組織和細胞中HuR蛋白的表達 在冰上用RIPA裂解緩沖液裂解組織勻漿和細胞30 min，10 000 r/min離心20 min，收集上清液，通過BCA試劑盒檢測蛋白質(zhì)濃度，將30μg蛋白質(zhì)進行10%十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳。電泳分離后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，再用5%脫脂奶粉封閉1 h，經(jīng)TBST洗滌后，將PVDF膜與一抗HuR（1∶2 000）、GAPDH（1∶1 000）在4℃下孵育過夜，再加入二抗（1∶1 000）在常溫下孵育1.5 h。加入ECL試劑觀察蛋白條帶，以GAPDH為內(nèi)參，通過Quantity One軟件計算蛋白灰度值。

1.2.5 細胞分組 OE-NC、OE-HuR、si-NC、si-HuR、si-HuR+pcDNA、si-HuR+pcDNA-TRG-AS1分別轉(zhuǎn)染于對數(shù)生長期的HCT116細胞，命名為OE-NC組、OE-HuR組、si-NC組、si-HuR組、si-HuR+pcDNA組、si-HuR+pcDNA-TRG-AS1組，另取正常培養(yǎng)的HCT116細胞作為Ct組，轉(zhuǎn)染48 h后，用于后續(xù)實驗。

1.2.6 CCK-8法檢測細胞增殖 將各組細胞以1×104個/孔接種在96孔板中培養(yǎng)48 h后，加入10μL CCK-8試劑。孵育2 h后，使用酶標儀測量450 nm處的光密度（OD）。

1.2.7 平板克隆實驗檢測細胞克隆形成能力 將350個HCT116細胞接種于6 cm細胞培養(yǎng)板中，在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)15 d。棄培養(yǎng)液，將細胞用甲醇固定、0.1%結(jié)晶紫染色，并觀察克隆形成情況?？寺⌒纬陕剩?）=（克隆數(shù)/接種細胞數(shù)）×100%。

1.2.8 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率 將1×105個細胞重懸于100μL結(jié)合緩沖液中。用5μL Annexin V-FITC和5μL碘化丙啶溶液對細胞進行雙重染色。使用流式細胞儀測定細胞凋亡率。將第二、三象限的細胞定為凋亡細胞，細胞凋亡率=（凋亡細胞數(shù)/總細胞數(shù)）×100%。

1.2.9 劃痕愈合實驗檢測細胞遷移 將各組細胞以1×106個/孔接種于6孔板中，當細胞匯合度達到100%時，使用100μL移液器吸頭刮擦細胞層以制造劃痕，并將含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基替換為無FBS的DMEM培養(yǎng)基，觀察細胞在0、48 h時的劃痕愈合情況。劃痕愈合率（%）=（0 h劃痕寬度-48 h劃痕寬度）/0 h劃痕寬度×100%。

1.2.10 Transwell檢測細胞侵襲 Transwell小室上室預涂有Matrigel，將含有5×104個細胞的細胞懸浮液添加到孔徑為8μm的Transwell上室中。下室填充有600μL含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基。孵育48 h后，去除上表面殘留的細胞，侵襲的細胞用4%多聚甲醛固定，0.5%結(jié)晶紫染色。在倒置光學顯微鏡下對染色的細胞進行拍照和計數(shù)。

1.2.11 裸鼠體內(nèi)移植瘤實驗 將1.2.5中的各組細胞以5×105個懸浮在100μL PBS中，然后通過右側(cè)腋窩皮下接種于小鼠體內(nèi)，并命名為裸鼠Ct組、裸鼠OE-NC組、裸鼠OEHuR組、裸鼠si-NC組、裸鼠si-HuR組、裸鼠si-HuR+pcDNA組、裸鼠si-HuR+pcDNA-TRG-AS1組，每組5只。注射40 d后，處死裸鼠并分離出腫瘤，稱量腫瘤質(zhì)量。

1.2.12 甲基化RNA免疫共沉淀（MeRIP）檢測TRG-AS1上是否存在m6A位點 分離HCT116細胞的RNA，磁珠在室溫下用5μg抗m6A抗體或抗IgG抗體包被30 min。然后，將抗體包被的珠子與50μg總RNA在4℃下孵育過夜。經(jīng)蛋白酶K消化后，通過苯酚/氯仿/異戊醇法提取沉淀m6A結(jié)合的RNA，通過qPCR檢測TRG-AS1的表達量，方法同1.2.3。

1.2.13 RNA pull-down實驗檢測HuR與TRG-AS1結(jié)合 將生物素化的TRG-AS1陰性對照（NC）和TRG-AS1分別轉(zhuǎn)染到HCT116中。48 h后，將細胞裂解液與鏈酶親和素標記的磁珠混合形成蛋白質(zhì)-生物/RNA-磁珠復合物，用高鹽洗脫得到蛋白質(zhì)-生物/RNA復合物，分別命名為bio-NC組、bio-TRG-AS1組，以Input作為陽性對照。Western blot檢測HuR蛋白在蛋白質(zhì)-生物/RNA混合物中的表達，方法同1.2.4。

1.2.14 RIP檢測TRG-AS1與HuR蛋白結(jié)合 在RIP裂解緩沖液中裂解細胞，利用蛋白A/G磁珠對HuR抗體進行免疫沉淀，用磁鐵固定與復合物結(jié)合的磁珠并洗掉未結(jié)合的部分，提取RNA，通過qPCR分析TRG-AS1的相對表達量，IgG蛋白作為對照參考。

1.3 統(tǒng)計學方法 使用GraphPad Prism 5.0進行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差（）表示。2組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用SNK-q檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 m6A含量、TRG-AS1和HuR蛋白在組織中的表達 與癌旁組織比較，癌組織中HuR蛋白、TRGAS1表達升高，m6A含量降低（P＜0.05），見圖1、表2。

Fig.1 Western blot detection of HuR protein expression in tissue圖1 Western blot檢測組織中HuR蛋白表達

Tab.2 Comparison of HuR protein,m6A content and TRG-AS1 expression in cancer and adjacent tissues表2癌組織和癌旁組織HuR蛋白、m6A含量和TRG-AS1表達比較 （n=19）

Tab.2 Comparison of HuR protein,m6A content and TRG-AS1 expression in cancer and adjacent tissues表2癌組織和癌旁組織HuR蛋白、m6A含量和TRG-AS1表達比較 （n=19）

＊＊P＜0.01。

組別癌旁組織癌組織t HuR蛋白0.42±0.03 1.35±0.21 19.110＊＊m6A含量（%）0.92±0.08 0.31±0.02 32.244＊＊TRG-AS1 1.00±0.00 2.22±0.21 25.323＊＊

2.2 m6A含量、TRG-AS1和HuR蛋白在細胞中的表達 與NCM460細胞比較，HCT116、SW480、LOVO細胞中HuR蛋白、TRG-AS1表達升高，m6A含量減少（P＜0.05），且HCT116細胞中HuR蛋白、TRG-AS1表達高于SW480、LOVO細胞，m6A含量低于SW480、LOVO細胞（P＜0.05），選擇HCT116細胞為后續(xù)實驗研究對象，見圖2、表3。

2.3 m6A含量、HuR蛋白、TRG-AS1在各組HCT116細胞中的表達 與Ct組、OE-NC組比較，OE-HuR組的HCT116細胞中HuR蛋白、TRG-AS1表達升高，m6A含量降低（P＜0.05）；與Ct組、si-NC組比較，si-HuR組HCT116細胞中HuR蛋白、TRG-AS1表達降低，m6A含量升高（P＜0.05）；與si-HuR組、si-HuR+pcDNA組比較，si-HuR+pcDNA-TRG-AS1組HCT116細胞中HuR蛋白、m6A含量差異無統(tǒng)計學意義，TRG-AS1表達升高（P＜0.05），見圖3、表4。

Fig.2 Western blot detection of HuR protein expression in cells圖2 Western blot檢測細胞中HuR蛋白表達

Tab.3 Comparison of m6A content,HuR protein and TRG-AS1 expression between normal colonic epithelial cells and CRC cells表3正常結(jié)腸上皮細胞及CRC細胞m6A含量、HuR蛋白、TRG-AS1表達比較 （n=6，s）

Tab.3 Comparison of m6A content,HuR protein and TRG-AS1 expression between normal colonic epithelial cells and CRC cells表3正常結(jié)腸上皮細胞及CRC細胞m6A含量、HuR蛋白、TRG-AS1表達比較 （n=6，s）

＊＊P＜0.01；a與NCM460細胞比較，b與HCT116細胞比較，P＜0.05。

組別NCM460 HCT116 SW480 LOVO F TRG-AS1 1.00±0.00 2.58±0.24a 2.27±0.22ab 2.04±0.23ab 70.881＊＊HuR 0.36±0.03 1.48±0.23a 1.21±0.20ab 1.01±0.09ab 53.645＊＊m6A含量（%）1.23±0.11 0.27±0.02a 0.38±0.03ab 0.46±0.04ab 305.547＊＊

2.4 過表達或沉默HuR對HCT116細胞增殖、凋亡的影響 與Ct組、OE-NC組比較，OE-HuR組HCT116細胞OD450值、克隆形成率升高，細胞凋亡率降低（P＜0.05）；與Ct組、si-NC組比較，si-HuR組HCT116細胞OD450值、克隆形成率降低，細胞凋亡率升高（P＜0.05）；與si-HuR組、si-HuR+pcDNA組比較，si-HuR+pcDNA-TRG-AS1組HCT116細胞OD450值、克隆形成率升高，細胞凋亡率降低（P＜0.05），見圖4、5，表5。

Fig.3 Western blot detection of HuR protein expression in HCT116 cells圖3 Western blot檢測HCT116細胞中HuR蛋白表達

Tab.4 Comparison of HuRprotein,m6Acontent and TRGAS1 expression in HCT116 cells between the seven groups表4各組HCT116細胞中的HuR蛋白、m6A含量、TRG-AS1表達比較 （n=6）

Tab.4 Comparison of HuRprotein,m6Acontent and TRGAS1 expression in HCT116 cells between the seven groups表4各組HCT116細胞中的HuR蛋白、m6A含量、TRG-AS1表達比較 （n=6）

＊＊P＜0.01；a與Ct組比較，b與OE-NC組比較，c與si-NC組比較，d與si-HuR組比較，e與si-HuR+pcDNA組比較，P＜0.05；表5、6同。

組別Ct組OE-NC組OE-HuR組si-NC組si-HuR組si-HuR+pcDNA組si-HuR+pcDNA-TRG-AS1組F HuR 1.46±0.21 1.47±0.22 1.98±0.25ab 1.45±0.22 0.35±0.03ac 0.35±0.04 0.36±0.03 95.617＊＊m6A含量（%）0.28±0.03 0.26±0.02 0.10±0.01ab 0.27±0.01 1.12±0.08ac 1.14±0.09 1.13±0.10 381.869＊＊TRG-AS1 1.00±0.00 1.02±0.08 2.34±0.22ab 1.01±0.09 0.71±0.12ac 0.69±0.13 0.94±0.11de 125.637＊＊

Fig.4 Effects of silencing or overexpression of HuR on HCT116 cell clone formation圖4 沉默或過表達HuR對HCT116細胞克隆形成的影響

Fig.5 Effects of silencing or overexpression of HuR on apoptosis of HCT116 cells detected by Annexin V-FITC/PI double staining圖5 Annexin V-FITC/PI雙重染色檢測沉默或過表達HuR對HCT116細胞凋亡的影響

Tab.5 Comparison of OD450 value,clone formation rate and apoptosis rate between different groups of HCT116 cells表5 各組HCT116細胞OD450值、克隆形成率、細胞凋亡率比較 （n=6）

Tab.5 Comparison of OD450 value,clone formation rate and apoptosis rate between different groups of HCT116 cells表5 各組HCT116細胞OD450值、克隆形成率、細胞凋亡率比較 （n=6）

組別Ct組OE-NC組OE-HuR組si-NC組si-HuR組si-HuR+pcDNA組si-HuR+pcDNA-TRG-AS1組F OD450值0.82±0.08 0.83±0.09 1.25±0.12ab 0.84±0.08 0.32±0.02ac 0.33±0.03 0.69±0.05de 112.818＊＊克隆形成率（%）62.23±5.14 63.15±5.09 83.36±6.05ab 62.78±5.16 26.69±2.44ac 26.75±2.38 48.87±4.12de 126.394＊＊細胞凋亡率（%）41.27±3.68 42.26±3.71 24.48±2.39ab 42.33±5.08 65.54±5.62ac 64.57±5.41 46.67±3.08de 67.001＊＊

2.5 過表達或沉默HuR對HCT116細胞遷移、侵襲的影響 與Ct組、OE-NC組比較，OE-HuR組HCT116細胞劃痕愈合率、侵襲細胞數(shù)目升高（P＜0.05）；與Ct組、si-NC組比較，si-HuR組HCT116細胞劃痕愈合率、侵襲細胞數(shù)目降低（P＜0.05）；與si-HuR組、si-HuR+pcDNA組比較，si-HuR+pcDNATRG-AS1組HCT116細胞劃痕愈合率、侵襲細胞數(shù)目升高（P＜0.05），見表6，圖6、7。

2.6 過表達或沉默HuR對裸鼠體內(nèi)移植瘤生長的影響 各組間移植瘤質(zhì)量差異有統(tǒng)計學意義（F=210.787，P＜0.01）。與Ct組（0.28 g±0.02 g）、OE-NC組（0.29 g±0.01 g）比較，OE-HuR組（0.56 g±0.04 g）裸鼠體內(nèi)移植瘤質(zhì)量升高（P＜0.05）；與Ct組、si-NC組（0.30 g±0.03 g）比較，si-HuR組（0.12 g±0.01 g）裸鼠體內(nèi)移植瘤質(zhì)量降低（P＜0.05）；與si-HuR組、si-HuR+pcDNA組（0.13 g±0.01 g）比 較，si-HuR+pcDNA-TRG-AS1組（0.22 g±0.02 g）裸鼠體內(nèi)移植瘤質(zhì)量升高（P＜0.05），見圖8。

Tab.6 Comparison of wound healing rate and the number of invasive cells between different groups of HCT116 cells表6 各組HCT116細胞劃痕愈合率、侵襲細胞數(shù)目比較（n=6）

Tab.6 Comparison of wound healing rate and the number of invasive cells between different groups of HCT116 cells表6 各組HCT116細胞劃痕愈合率、侵襲細胞數(shù)目比較（n=6）

組別Ct組OE-NC組OE-HuR組si-NC組si-HuR組si-HuR+pcDNA組si-HuR+pcDNA-TRG-AS1組F劃痕愈合率（%）51.17±4.66 51.28±5.02 69.44±6.24ab 51.34±5.13 21.25±2.06ac 21.36±2.09 36.67±3.24de 100.512＊＊侵襲細胞數(shù)目（個）74.43±6.25 74.58±6.12 113.35±10.04ab 73.96±6.11 27.75±2.16ac 28.14±2.02 51.14±4.33de 159.505＊＊

2.7 HuR識別并結(jié)合TRG-AS1上的m6A修飾位點 RMVar數(shù)據(jù)庫（https://rmvar.renlab.org/）提示TRG-AS1上存在潛在的m6A位點，見圖9。MeRIP結(jié)果表明，存在m6A抗體時能夠富集到大量TRGAS1（18.62±1.03），而對照IgG富集到極少量TRGAS1（0.25±0.02），差異有統(tǒng)計學意義（t=43.678，P＜0.01），表明TRG-AS1上存在m6A位點。RNA下拉實驗結(jié)果表明，TRG-AS1能與HuR蛋白相互作用，見圖10。RIP實驗結(jié)果表明IgG蛋白（4.15±0.32）富集到的TRG-AS1明顯低于HuR抗體（23.68±2.11）（t=22.416，P＜0.01）。

Fig.6 The effect of silencing or overexpressing HuR on the migration of HCT116 cells圖6 沉默或過表達HuR對HCT116細胞遷移的影響

3 討論

Fig.7 The effect of silencing or overexpressing HuR on the invasion of HCT116 cells(crystal violet dyeing,×200)圖7 沉默或過表達HuR對HCT116細胞侵襲的影響（結(jié)晶紫染色，×200）

Fig.8 Comparison of tumor quality in each group圖8 各組移植瘤質(zhì)量比較

Fig.9 RMVar database showing potential m6A sites on TRG-AS1圖9 RMVar數(shù)據(jù)庫顯示TRG-AS1上存在潛在的m6A位點

Fig.10 RNA pull-down experiments showing HuR binds to TRG-AS1圖10 RNA下拉實驗表明HuR與TRG-AS1結(jié)合

m6A修飾是最常見的RNA甲基化事件之一，主要參與mRNA和非編碼RNA的剪接、運輸、穩(wěn)定和降解過程［7］。越來越多的證據(jù)表明，m6A修飾在人類不同的癌癥中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。如肝癌組織中m6A含量低于癌旁組織［8］；白血病耐藥細胞株中m6A含量低于白血病細胞株［9］，表明m6A修飾在肝癌、白血病等腫瘤中能夠影響腫瘤發(fā)生和病理進程。m6A甲基化修飾的識別蛋白HuR在膠質(zhì)瘤組織中呈高表達狀態(tài)，上調(diào)HuR可促進膠質(zhì)瘤細胞增殖，抑制細胞凋亡［10］；下調(diào)HuR抑制了肝癌細胞的增殖、遷移與侵襲［11］；低表達HuR可以抑制胃癌MGC-803細胞的侵襲、遷移［12］；敲低HuR可以抑制CRC細胞轉(zhuǎn)移［13］。由此表明HuR在多種腫瘤中具有致癌的作用。本研究結(jié)果與既往研究一致，在CRC組織和細胞中HuR蛋白高表達，m6A含量降低，且HCT116細胞中HuR蛋白表達量最高，m6A含量最低，因此選擇HCT116細胞為研究對象進行轉(zhuǎn)染實驗。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，過表達HuR可促進HCT116細胞增殖、遷移、侵襲及體內(nèi)移植瘤的生長，抑制細胞凋亡，降低m6A含量；而沉默HuR則呈相反趨勢，證實HuR可通過調(diào)節(jié)m6A含量影響HCT116細胞惡性生物學行為。

HuR通過識別靶基因的m6A位點發(fā)揮其功能［14］。為確認HuR下游靶基因，本研究通過生物信息分析顯示TRG-AS1上存在m6A位點。TRG-AS1是一種lncRNA，下調(diào)TRG-AS1抑制舌鱗狀細胞癌細胞增殖、遷移和侵襲，促進細胞凋亡［15］；過表達TRG-AS1可促進膠質(zhì)母細胞瘤細胞增殖［16］；上調(diào)TRG-AS1可促進肺癌細胞增殖和侵襲［17］。以上研究表明TRG-AS1在舌鱗狀細胞癌、膠質(zhì)母細胞瘤、肺癌等腫瘤中發(fā)揮癌基因的作用。而關(guān)于TRGAS1在CRC中的研究鮮有報道。本研究顯示，TRGAS1在CRC組織和細胞中高表達，過表達HuR后，HCT116細胞中TRG-AS1表達升高，m6A含量降低；沉默HuR后，HCT116細胞中TRG-AS1表達降低，m6A含量升高；且MeRIP結(jié)果表明TRG-AS1上存在m6A位點，RNA pull-down和RIP實驗結(jié)果表明TRG-AS1能與HuR蛋白相互作用，推測沉默HuR可能通過識別TRG-AS1上的m6A位點來抑制TRGAS1表達進而抑制HCT116細胞增殖、遷移、侵襲及體內(nèi)移植瘤的生長，促進細胞凋亡。為驗證該推測，本研究在沉默HuR的基礎(chǔ)上增加pcDNA-TRG-AS1來干預HCT116細胞，結(jié)果顯示，pcDNA-TRG-AS1減弱了沉默HuR對HCT116細胞增殖、遷移、侵襲及體內(nèi)移植瘤生長的抑制作用，以及對細胞凋亡的促進作用。

綜上所述，沉默HuR可通過抑制TRG-AS1表達進而抑制HCT116細胞增殖、遷移與侵襲，促進細胞凋亡。本研究將TRG-AS1鑒定為HuR介導的m6A修飾的新型下游效應(yīng)子，證實了m6A修飾在調(diào)節(jié)lncRNA的生物過程發(fā)生中的關(guān)鍵作用，并表明TRG-AS1可能成為治療CRC的潛在靶點，為CRC進展的潛在機制提供了新線索。