林 欣，李 楊，詹 淼，付湘晉,2,*，鐘海雁，姚 文，劉 成

（1.中南林業(yè)科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，湖南 長沙 410004；2.湖南省營養(yǎng)健康品工程技術(shù)研究中心，湖南省藥食同源功能性食品工程技術(shù)研究中心，湖南省調(diào)味料綠色制造工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙 410004；3.湖南巨雄油茶油脂研究院，湖南 岳陽 414000；4.億豐農(nóng)林牧科技有限公司，湖南 邵陽 422300）

油茶樹（Camellia oleiferaAbel.）在我國已有兩千多年的栽培歷史，廣泛分布在我國南方地區(qū)，湖南是主要產(chǎn)區(qū)之一[1]。對油茶的利用迄今已有一千多年，許多醫(yī)書典籍都記載了油茶的效用[2]。油茶籽是油茶的成熟種子，含油量較高[3]。茶籽油是我國特色食用油，單不飽和脂肪酸含量高達(dá)80%，還具有多種活性成分如黃酮類、多酚類、多糖類等，其功能活性已成為研究熱點[4-5]。前期研究發(fā)現(xiàn)多酚類代謝物是油茶中最重要的代謝物之一，對油茶的風(fēng)味[6]、穩(wěn)定性[7]以及功能活性[8]有重要作用。

茶籽油具有胃腸保護(hù)和抗炎作用[9]。Cheng Yuting等[10]報道了山茶油對酮洛芬所致急性胃腸潰瘍的治療作用，結(jié)果表明山茶油可抑制環(huán)氧化酶-2（cyclooxygenase 2，COX-2）蛋白的表達(dá)，抑制白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和一氧化氮（nitric oxide，NO）的產(chǎn)生，減少胃腸道黏膜的氧化損傷。Wang等[11]也報道了山茶油可通過降低炎癥介質(zhì)IL-6、腫瘤壞死因子-α和COX-2的水平，提高血紅素氧化酶-1活性，防止小鼠胃腸道黏膜損傷引發(fā)炎癥。這些研究說明茶籽油對胃腸道的氧化損傷具有保護(hù)作用，目前對油茶的研究主要集中在油茶組成及其已知的營養(yǎng)素和生物活性成分分析，而對于許多未知的營養(yǎng)素和活性成分鮮見報道，對于茶籽提取物抗腸炎的機(jī)制也有待進(jìn)一步研究。

代謝組學(xué)可以同時表征生物基質(zhì)中的大量化學(xué)代謝物，全面分析代謝產(chǎn)物含量的變化，因此常被用于食品成分分析[12]。利用代謝組學(xué)技術(shù)對油茶研究主要集中于對茶籽油、茶籽仁和茶籽殼的代謝物分析，而對油茶籽提取物中的活性代謝物檢測分析還比較片面。本研究采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLCMS/MS）技術(shù)檢測15 個批次油茶籽乙醇提取物中的小分子代謝物，分析各代謝物類別組成，探究油茶籽乙醇提取物的抗腸炎活性，對油茶籽乙醇提取物中代謝物進(jìn)行分析篩選，鑒定其關(guān)鍵代謝產(chǎn)物，闡明不同代謝產(chǎn)物與抗炎活性之間的變化規(guī)律，從而評價油茶籽乙醇提取物中代謝物的效果，為油茶籽提取物抗腸炎的機(jī)制研究提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

油茶籽由洞口億豐農(nóng)林牧科技有限公司提供，于2020年9—12月采集了湖南省邵陽市洞口縣不同成熟期的普通油茶籽共43 份，以數(shù)字進(jìn)行編號，選取15 個批次成熟期油茶籽樣品（編號為28～31、33～43）進(jìn)行研究。

野生型殘翅果蠅（實驗室飼養(yǎng)）培養(yǎng)在（25±1）℃的恒溫箱中。果蠅飼養(yǎng)玉米-酵母培養(yǎng)基：酵母粉24.50 g、瓊脂10.00 g、蔗糖7.25 g、紅糖30 g、玉米粉50.00 g、丙酸4 mL。

福林-酚定量試劑盒（分析純） 北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；可食用亮藍(lán)、硫酸葡聚糖鈉鹽、柳氮磺胺吡啶（分析純） 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；甲醇、乙腈（色譜純） 德國CNW科技公司；甲酸（色譜純） 美國Sigma公司；2-氨基異丁酸、L-苯丙氨酸、N,N-二甲基甘氨酸、2-羥基丁酸、L-絲氨酸（純度均≥99%） 上海麥克林生化科技有限公司；異芒果苷（純度≥99%） 上海畢得醫(yī)藥科技股份有限公司；5,7,4’-三羥基-6-異戊烯基異黃酮、山柰苷、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、表兒茶素（純度均≥99%） 上海源葉生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Mixplus渦旋混勻儀 美國ABSON科學(xué)儀器集團(tuán)；7045TR+HDMI體視顯微鏡 廣東省東莞市今視光電科技有限公司；SPK-150BIII微生物培養(yǎng)箱 北京中興偉業(yè)儀器有限公司；TG25KR高速冷凍離心機(jī)湖南省長沙東旺實驗儀器有限公司；ExionLC AD UPLC儀、QTrap 6500高靈敏MS儀 美國AB SCIEX公司；Heraeus Fresco17離心機(jī) 美國賽默飛世爾科技公司。

1.3 方法

1.3.1 油茶籽乙醇提取物的提取

用植物粉碎機(jī)粉碎油茶籽120～180 s，過0.425 mm篩，密封后在-20 ℃冰箱保存待用。

稱取一定質(zhì)量的油茶籽粉于燒杯中，按料液比1∶15（mg/mL）加入體積分?jǐn)?shù)70%乙醇提取液。60 ℃、超聲功率100 W條件下提取30 min，1856×g離心15 min，取上清液，即粗提液[13]。將粗提液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)并冷凍干燥，即得油茶籽乙醇提取物。

1.3.2 油茶籽乙醇提取物抗腸炎活性的測定

參照文獻(xiàn)[14]方法，采用果蠅“藍(lán)精靈”實驗測定各提取物的抗炎活性。將油茶籽乙醇提取物溶于乙醇，通過預(yù)實驗，選取多酚質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的油茶籽乙醇提取液測定其對果蠅腸炎的抑制。空白組中濾液為5%葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium，DSS）溶液和2.5%可食用亮藍(lán)染液；實驗組中濾液為5% DSS溶液、2.5%可食用亮藍(lán)染液和0.1 mg/mL樣品提取液。在果蠅管中飼喂12 h后在體視鏡下觀察果蠅染色情況，若腹腔、胸腔等部位出現(xiàn)藍(lán)色則判定為腸道出現(xiàn)滲漏，說明果蠅腸道結(jié)構(gòu)發(fā)生變化出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷；腸道出現(xiàn)滲漏后，藍(lán)色染料浸滿全身，果蠅形似“藍(lán)精靈”。按下式計算果蠅腸炎抑制率，以同質(zhì)量濃度藥品（柳氮磺胺吡啶）作為陽性對照：

1.3.3 油茶籽乙醇提取物的鑒定

1.3.3.1 預(yù)處理

稱取20 mg的油茶籽乙醇提取物到離心管中，加兩粒小鋼珠，加入-40 ℃預(yù)冷的500 μL甲醇-水溶液（3∶1，V/V，含內(nèi)標(biāo)），渦旋30 s，35 Hz勻漿4 min，冰水浴超聲5 min，重復(fù)勻漿超聲3 次，在混勻儀上4 ℃過夜。4 ℃、13800×g離心15 min，取上清液，使用0.22 μm微孔濾膜過濾。用提取液50 倍稀釋濾液，渦旋30 s。各取40 μL樣品混合成質(zhì)控（quality control，QC）樣本，置于-80 ℃貯存直到上機(jī)檢測。

1.3.3.2 色譜條件

ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；流動相：A為0.1%甲酸溶液，B為乙腈，流速400 μL/min；梯度洗脫程序：0～0.5 min，98% A、2% B；0.5～11 min，98%～5% A、2%～95% B；11～13 m i n，5% A、95% B；13～13.1 m i n，5%～98% A、95%～2% B；13.1～15 min，98% A、2% B；柱溫40 ℃；進(jìn)樣器溫度4 ℃；進(jìn)樣體積2 μL。

1.3.3.3 質(zhì)譜條件

以多反應(yīng)監(jiān)測模式（multiple reaction monitoring，MRM）進(jìn)行質(zhì)譜分析。電噴霧離子源；離子噴射電壓為+5500/-4500 V；帷幕式氣體壓強(qiáng)35 psi；溫度400 ℃；離子源氣體1氣壓60 psi；離子源氣體2氣壓60 psi；正離子模式優(yōu)化去簇電壓100 V。

1.3.4 化合物與脂氧合酶（lipoxidase，LOX）分子對接

1.3.4.1 受體結(jié)構(gòu)準(zhǔn)備及處理

從PDB數(shù)據(jù)庫（http://www.rcsb.org）下載LOX（PDB ID：1YGE）的蛋白晶體結(jié)構(gòu)（含配體），作為對接所用的蛋白，保存為PDB格式。使用Autodock Tools1.5.7軟件對蛋白晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行去除溶劑分子、加氫等處理，保存為PDBQT格式，備用。

1.3.4.2 配體結(jié)構(gòu)準(zhǔn)備及處理

從PubChem（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov）和ZINC數(shù)據(jù)庫（https://zinc.docking.org）下載配體化合物結(jié)構(gòu)，使用AutodockTools1.5.7軟件對配體小分子進(jìn)行加氫、計算電荷等處理。

1.3.4.3 分子對接方法

使用AutoDock軟件預(yù)測各化合物與受體LOX蛋白的結(jié)合，對接參數(shù)采用默認(rèn)設(shè)置。用AutoGrid計算格點能量，采用拉馬克遺傳算法，用半經(jīng)驗的自由能計算方法評價各化合物與蛋白受體之間的結(jié)合情況，選擇每組中對接結(jié)合能小于-5 kcal/mol、均方根偏差（root mean square deviation，RMSD）小于2 ?的小分子配體與受體蛋白進(jìn)一步分析其結(jié)合位點[15]，使用PyMOL軟件生成對接結(jié)果的圖形視圖[16]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集及目標(biāo)化合物定量分析均通過SCIEX Analyst 1.6.3軟件完成，使用MS conventer軟件將質(zhì)譜原始轉(zhuǎn)成TXT格式，再使用自撰寫R程序包結(jié)合自建數(shù)據(jù)庫完成提峰、注釋等工作。

抗炎活性實驗均重復(fù)3 次，結(jié)果取平均值，采用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)預(yù)處理，使用SPSS 22.0軟件對抗炎活性與代謝組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性分析，用Origin 2021和GraphPad Prim 8軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 油茶籽乙醇提取物抗腸炎活性

腸黏膜屏障由腸上皮細(xì)胞緊密連接構(gòu)成，腸上皮細(xì)胞的損傷或緊密連接蛋白的破壞及成分、排布的變化都會增加腸道的通透性，導(dǎo)致腸內(nèi)容物中的分子和微生物大量滲入腸道組織，造成感染引發(fā)腸道炎癥[17-18]。

果蠅擁有與人類高度保守的天然免疫信號、較少的基因組、更好的適應(yīng)性以及操作的有效性和經(jīng)濟(jì)性，是理想的腸道疾病模型[19]。由圖1可知，油茶籽乙醇提取物對DSS導(dǎo)致的腸炎均有抑制作用，且不同批次油茶籽乙醇提取物對果蠅腸炎抑制效果有一定差異。柳氮磺胺吡啶對果蠅腸炎的抑制率為27.99%，油茶籽乙醇提取物的抑制率為15.06%～61.71%，40號樣品的抑制率最高，起到了抑制腸道炎癥反應(yīng)的效果。

圖1 不同油茶籽乙醇提取物的果蠅腸炎抑制率Fig.1 Inhibitory activity of ethanolic extracts of C.oleifera seeds against enteritis in Drosophila

2.2 油茶籽乙醇提取物代謝組學(xué)分析

2.2.1 油茶籽乙醇提取物中各代謝物類別組成及含量分布

通過UPLC-MS/MS對15 個批次油茶籽乙醇提取物中小分子代謝物進(jìn)行檢測，共得到926 個色譜峰，經(jīng)過預(yù)處理后885 個峰被保留。這些色譜峰包括小分子有機(jī)酸、氨基酸、維生素、糖類、脂類、糖醇類、酚類、生物堿、黃酮類化合物等（主要分為多酚類、氨基酸類、有機(jī)酸類、核苷酸類、糖類、脂類和其他類）。

由圖2可知，15 個批次油茶籽乙醇提取物中，41號樣品的代謝物總含量最高，其次為28號和33號，36號樣品的代謝物總含量最低。所有代謝物中，糖類化合物的含量最高，占代謝物總含量的30.25%；其次為多酚類、脂類和氨基酸類化合物，分別占18.78%、15.93%和14.26%；而核苷酸類、有機(jī)酸類化合物的相對含量較低，小于10%；其他類化合物的相對含量為5.11%。

圖2 15 個批次油茶籽提取物中各代謝物類別組成及含量分布Fig.2 Composition and content of metabolites in ethanol extracts of 15 batches of C.oleifera seeds

2.2.2 油茶籽乙醇提取物中代謝物組成及含量分析

15 個批次油茶籽乙醇提取物中豐度大于10的代謝物共208 個，其中多酚類76 個、氨基酸類33 個、糖類 8 個、有機(jī)酸類17 個、脂類11 個、核苷酸及其衍生物11 個、其他類52 個。

油茶籽乙醇提取物中，多酚類化合物的總含量較高（圖2）、種類最豐富。如圖3所示，不同油茶籽乙醇提取物中，多酚類化合物的含量存在一定差異。由于植物多酚種類繁多，根據(jù)它們的結(jié)構(gòu)可大致分為黃酮類、酚酸類、萜類和木脂素類[20]，在油茶籽多酚類化合物中，黃酮類占主體，其次為酚酸類和萜類，木脂素類較少。

圖3 15 個批次油茶籽乙醇提取物中酚類化合物的層次聚類熱圖Fig.3 Hierarchical clustering heatmap of phenolic compounds in ethanol extracts of 15 batches of C.oleifera seeds

有11 個多酚類化合物的豐度高于1000，其中黃酮類的山柰苷、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、矢車菊素-3-蕓香糖苷、表兒茶素、原花青素B2、木犀草苷已有大量報道[21-25]，其余5 個多酚類化合物是首次在油茶籽中被檢出，包括黃酮類的阿福豆苷、5,7,4’-三羥基-6-異戊烯基異黃酮，酚酸類的章魚胺，萜類的丹參新酮以及8-香葉草氧基補(bǔ)骨脂素。

2.3 相關(guān)性分析篩選油茶籽乙醇提取物抗炎活性化合物

由圖4可知，油茶籽乙醇提取物中與腸炎抑制活性呈正相關(guān)的化合物共11 個，呈負(fù)相關(guān)的化合物共21 個。酚類化合物中與果蠅腸炎抑制活性呈顯著正相關(guān)的化合物為鴉膽子素B，呈極顯著正相關(guān)的化合物為異芒果苷，這兩種多酚類化合物都是首次在油茶籽中被檢出；呈顯著負(fù)相關(guān)的化合物為佛手柑素、二氫麻醉椒苦素、異土木香內(nèi)酯、丹參新酮、辛可尼丁、辛可寧、N-對香豆酰真蛸胺，呈極顯著負(fù)相關(guān)的化合物為青蒿素、石竹素、甘草次酸。有機(jī)酸及氨基酸中與果蠅腸炎抑制活性呈顯著正相關(guān)的化合物為2-氨基異丁酸、L-苯丙氨酸、N,N-二甲基甘氨酸、2-羥基丁酸，呈極顯著正相關(guān)的化合物為D-絲氨酸和L-絲氨酸；呈顯著負(fù)相關(guān)的化合物為L-哌啶酸、L-羥基脯氨酸、磷酸、脯氨酸甜菜堿，呈極顯著負(fù)相關(guān)的化合物為煙酸。其他類與果蠅腸炎抑制活性呈顯著正相關(guān)的化合物為22-脫氫赤桐甾醇、O-乙酰乙醇胺、Parsonsine；呈顯著負(fù)相關(guān)的化合物為二烯丙基二硫醚、尿刊酸，呈極顯著負(fù)相關(guān)的化合物為1-茚酮、2-羥基-3-苯丙酮酸甲酯、甜菜堿醛、甘露糖-6-磷酸。其中鴉膽子素B[26]、異芒果苷[27]、L-苯丙氨酸[28]、絲氨酸[29]、N,N-二甲基甘氨酸[30]已被報道與炎癥代謝通路相關(guān)，與本研究一致。

圖4 油茶籽乙醇提取物中化合物與抗炎活性的相關(guān)性Fig.4 Correlation between metabolites in ethanol extract of C.oleifera seeds and its anti-inflammatory activity

2.4 基于分子對接技術(shù)的油茶籽乙醇提取物抗炎活性化合物的篩選

2.4.1 18 種化合物與LOX分子對接分析

前期研究發(fā)現(xiàn)，抑制LOX活性可能是油茶籽乙醇提取物的抗腸炎機(jī)制之一[31]。因此，選取含量高的多酚類化合物、與腸炎呈正相關(guān)的多酚類及氨基酸類化合物共18 種（表1），分別與LOX進(jìn)行分子對接。配體構(gòu)象的對接結(jié)合能越低，構(gòu)象越穩(wěn)定，與蛋白質(zhì)受體結(jié)合的親和力越強(qiáng)，對蛋白質(zhì)受體可能具有抑制活性。RMSD值越小，對接構(gòu)象與目標(biāo)構(gòu)象越接近[32]。一般認(rèn)為最低對接結(jié)合能小于-5 kcal/mol，則對接構(gòu)象穩(wěn)定；RMSD值小于2 ?，說明配體與受體進(jìn)行有效對接。

由表1可知，鴉膽子素B、5,7,4’-三羥基-6-異戊烯基異黃酮、丹參新酮、8-香葉草氧基補(bǔ)骨脂素、表兒茶素、山柰苷、山柰酚-3-O-蕓香糖苷與LOX對接構(gòu)象穩(wěn)定，說明這7 種化合物可能對LOX具有抑制作用。已有研究報道了表兒茶素對LOX的抑制作用[33]，與本研究結(jié)果一致。

表1 油茶籽乙醇提取物中化合物與LOX對接構(gòu)象的對接結(jié)合能與RMSD值Table 1 Docking binding energy and RMSD values between LOX and metabolites in ethanol extract of C.oleifera seeds

2.4.2 分子對接結(jié)果可視化分析

根據(jù)表1中的分子對接打分情況，選取對接結(jié)合能小于-5 kcal/mol，RMSD值小于2 ?的化合物：鴉膽子素B、5,7,4’-三羥基-6-異戊烯基異黃酮、丹參新酮、8-香葉草氧基補(bǔ)骨脂素、表兒茶素、山柰苷、山柰酚-3-O-蕓香糖苷，將其最優(yōu)構(gòu)象進(jìn)行可視化分析。

如圖5所示，7 種化合物與LOX的結(jié)合位點都位于其活性口袋內(nèi)，被受體的氨基酸殘基所包圍。鴉膽子素B與LOX對接結(jié)果顯示，配體與氨基酸Met-395存在兩條氫鍵，鍵長分別為2.7 ?和2.3 ?；與氨基酸Ala-385、Leu-388、Leu-390、Gly-392均存在一條氫鍵，鍵長分別為2.6、3.3、2.3 ?和2.3 ?。5,7,4’-三羥基-6-異戊烯基異黃酮與LOX對接結(jié)果顯示，配體與氨基酸Asp-768、Asn-835和Pro-530均存在一條氫鍵，鍵長分別為2.4、2.4 ?和2.9 ?。丹參新酮與LOX對接結(jié)果顯示，配體與氨基酸Phe-143、Phe-144均存在一條氫鍵，鍵長分別為2.1、2.9 ?。8-香葉草氧基補(bǔ)骨脂素與LOX對接結(jié)果顯示，配體與氨基酸Thr-529存在一條氫鍵，鍵長為2.5 ?。表兒茶素與LOX對接結(jié)果顯示，配體與氨基酸Val-126存在兩條氫鍵，鍵長分別為2.3 ?和2.5 ?；與氨基酸Ala-145、Phe-144和Ile-142均存在一條氫鍵，鍵長分別為2.5、2.4 ?和2.0 ?。山柰苷與LOX對接結(jié)果顯示，配體與氨基酸Glu-176和Asn-245存在兩條氫鍵，鍵長分別為3.3、2.7 ?和1.9、2.6 ?；與氨基酸Arg-177、Val-237和Val-240均存在一條氫鍵，鍵長分別為2.9、3.3 ?和2.5 ?。山柰酚-3-O-蕓香糖苷與LOX對接結(jié)果顯示，配體與氨基酸Lys-178、Val-240均存在一條氫鍵，鍵長均為2.3 ?。上述7 個化合物均與LOX形成了較穩(wěn)定的復(fù)合物，說明這7 個化合物可能對LOX有良好的抑制活性。鴉膽子素B[26]、丹參新酮[34]、8-香葉草氧基補(bǔ)骨脂素[35]都已被報道過有抗炎效果，選取5,7,4’-三羥基-6-異戊烯基異黃酮及含量高的山柰苷、山柰酚-3-O-蕓香糖苷進(jìn)行“藍(lán)精靈”實驗以驗證其抗炎活性。

圖5 油茶籽乙醇提取物中7 種化合物與LOX的分子對接效果圖Fig.5 Molecular docking of seven compounds in ethanol extract of C.oleifera seeds with LOX

2.5 油茶籽乙醇提取物的抗炎活性化合物對果蠅腸炎的抑制活性

在相同條件下，選取相關(guān)性分析得到的與果蠅腸炎抑制活性顯著正相關(guān)的化合物異芒果苷、2-氨基異丁酸、L-苯丙氨酸、N,N-二甲基甘氨酸、2-羥基丁酸、L-絲氨酸，與LOX對接具有穩(wěn)定構(gòu)象的5,7,4’-三羥基-6-異戊烯基異黃酮及含量高的山柰苷、山柰酚-3-O-蕓香糖苷進(jìn)行果蠅“藍(lán)精靈”實驗。表兒茶素是兒茶素類化合物，是油茶籽多酚的主要成分，已被廣泛報道具有抗炎活性[9]，選用表兒茶素作為參比，柳氮磺胺吡啶作為陽性對照。

如圖6所示，對果蠅腸炎具有抑制作用的化合物有7 個，其中有4 個多酚化合物的抑制率高于50%，N,N-二甲基甘氨酸、L-絲氨酸和L-苯丙氨酸3 種氨基酸對果蠅腸炎抑制活性很低，甚至表現(xiàn)出輕微促炎作用。異芒果苷與LOX進(jìn)行分子對接的結(jié)果不是很理想，但卻表現(xiàn)出較高抗腸炎活性，可能是通過與炎癥相關(guān)的其他通路（如抑制關(guān)鍵酶COX-2、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的表達(dá)）發(fā)揮抗炎效果[36]。綜上所述，異芒果苷、5,7,4’-三羥基-6-異戊烯基異黃酮、山柰苷、山柰酚-3-O-蕓香糖苷表現(xiàn)出較高的果蠅腸炎抑制活性，且4 種多酚類化合物抑制活性顯著高于表兒茶素與柳氮磺胺吡啶。其中5,7,4’-三羥基-6-異戊烯基異黃酮是一種天然類黃酮化合物，也是油茶籽中檢測到的一種新型化合物，有研究報道其具有抗腫瘤[37]、保肝[38]和抑菌[39]活性。本研究首次對5,7,4’-三羥基-6-異戊烯基異黃酮的抗炎活性進(jìn)行了研究并證實了其具有較高的果蠅腸炎抑制活性，0.1 mg/mL給藥量時抑制率達(dá)到64%；此外，抑制LOX活性可能是其抗腸炎機(jī)制之一。

圖6 油茶籽乙醇提取物中不同化合物對果蠅腸炎抑制率Fig.6 Inhibitory activity of different compounds in ethanol extract of C.oleifera seeds against Drosophila enteritis

3 結(jié)論

采用UPLC-MS/MS檢測15 個批次油茶籽乙醇提取物中的小分子代謝物，分析各代謝物類別組成，探究油茶籽乙醇提取物的抗腸炎活性，對油茶籽乙醇提取物中代謝物進(jìn)行分析篩選，鑒定其關(guān)鍵代謝產(chǎn)物，闡明不同代謝產(chǎn)物與抗炎活性之間的變化規(guī)律，從而評價油茶籽乙醇提取物中代謝物的效果。結(jié)果顯示：油茶籽乙醇提取物具有良好的果蠅腸炎抑制活性；初步篩選了油茶籽乙醇提取物中具有較高抗腸炎活性的化合物為鴉膽子素B、丹參新酮、8-香葉草氧基補(bǔ)骨脂素、異芒果苷、5,7,4’-三羥基-6-異戊烯基異黃酮、山柰苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷，其中鴉膽子素B、異芒果苷、5,7,4’-三羥基-6-異戊烯基異黃酮、丹參新酮、8-香葉草氧基補(bǔ)骨脂素是首次在油茶籽中發(fā)現(xiàn)，同時5,7,4’-三羥基-6-異戊烯基異黃酮是首次被發(fā)現(xiàn)具有抗炎活性。本研究為進(jìn)一步探究油茶籽乙醇提取物內(nèi)外抗腸炎活性及其機(jī)制奠定了基礎(chǔ)，為油茶籽增效開發(fā)提供一定理論依據(jù)。