陳 杰，陳子廷，趙 甜，王方海，李廣宏

( 中山大學 生命科學學院，廣東 廣州 510275 )

鰻鱺營養(yǎng)豐富，肉質(zhì)鮮美，素有“水中人參”、“軟黃金”之美譽，也是我國單項出口創(chuàng)匯最多的品種之一[1]。然而隨著集約化養(yǎng)殖程度的不斷提高，鰻鱺病害發(fā)生日益頻繁，病死率逐年上升。為控制病害，養(yǎng)殖戶被迫大量使用抗生素等化學合成藥物。雖然使用這些藥物可有效預(yù)防鰻鱺各種病害，提高養(yǎng)殖成活率，但也給鰻鱺健康養(yǎng)殖帶來不利影響，導(dǎo)致部分鰻鱺產(chǎn)品藥物殘留超標，嚴重影響我國鰻鱺產(chǎn)品出口創(chuàng)匯[2-3]。因此，尋找安全、可靠、無公害、無殘留的疾病防控方法已成為目前我國鰻鱺養(yǎng)殖業(yè)亟待解決的難題。

家蠅(Muscadomestica)喜歡生活在陰暗潮濕、雜菌叢生的環(huán)境中，但卻鮮見家蠅因自身感染病原體而引起大量死亡的現(xiàn)象，這益于其強大的先天性免疫系統(tǒng)，而這種強大的免疫力與其體內(nèi)產(chǎn)生的抗菌肽、凝集素和溶菌酶等有關(guān)[4]，因此利用蠅蛆蛋白或抗菌肽開發(fā)安全、高效的新型免疫增強劑以提高養(yǎng)殖動物的抗病力已引起國內(nèi)外學者廣泛關(guān)注。已有研究表明，蠅蛆蛋白或抗菌肽可以增強龜鱉類[5-6]、蝦類[7-11]、魚類[12-19]、海參[20]和畜禽[21-25]等的免疫力，是一種既能為養(yǎng)殖動物提供營養(yǎng)，又可增強養(yǎng)殖動物機體抗病力的天然免疫增強劑。國內(nèi)外僅陳紅等[2]研究了蠅蛆抗菌肽對鰻鱺(Anguillajaponica)生長性能的影響，指出蠅蛆抗菌肽可顯著提高鰻鱺生長性能，降低養(yǎng)殖成本，是鰻鱺飼料的一種優(yōu)質(zhì)蛋白添加劑。而有關(guān)蠅蛆蛋白對鰻鱺非特異性免疫的影響，迄今尚未見報道。鑒于此，筆者研究了蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺(A.rostrata)非特異性免疫功能的影響，以期為利用蠅蛆蛋白開發(fā)鰻鱺免疫增強劑提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

蠅蛆蛋白：蠅蛆蛋白由本實驗室提供，蠅蛆營養(yǎng)組成見表1、表2；美洲鰻鱺：試驗魚購自湖北省武漢市科洋生物工程有限公司，體質(zhì)量(95.0±5.0) g，體長(35.8±0.4) cm；飼料：美洲鰻鱺飼料購自廣東省佛山市順德成冠飼料有限公司，飼料營養(yǎng)組成見表3；嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)：菌株購自杭州遞思艾生物科技有限公司，菌株編號為ATCC@35654TM*。

表1 蠅蛆營養(yǎng)組成(鮮品) %

表2 蠅蛆營養(yǎng)組成(干物質(zhì)) %

表3 美洲鰻鱺基礎(chǔ)飼料營養(yǎng)水平(干物質(zhì)) %

1.2 試驗方法

1.2.1 飼料配制與試驗設(shè)計

將麥麩養(yǎng)殖并分離得到的蠅蛆用0.1%高錳酸鉀消毒，清洗干凈，濾干，用膠體磨磨漿，離心濃縮，然后在蟲漿中加入0.3%殼寡糖、1.5%大豆卵磷脂、1.5%維生素混合物和2.0%無機鹽混合物，于攪拌機中混合均勻，制得蠅蛆蛋白混合物。測定蠅蛆蛋白混合物營養(yǎng)組成(表4)，分裝，-20 ℃保存待用。

表4 蠅蛆蛋白混合物營養(yǎng)組成 %

試驗設(shè)5個處理組，分別為基礎(chǔ)飼料組(對照組)、5%蠅蛆蛋白添加組、10%蠅蛆蛋白添加組、15%蠅蛆蛋白添加組和20%蠅蛆蛋白添加組。投喂時各處理組先準確稱取基礎(chǔ)飼料和蠅蛆蛋白混合物(表5)，混合均勻，然后按飼料∶水=1∶1.2(質(zhì)量比)加入適量水(由于蠅蛆蛋白混合物含50.2%的水分，各試驗組具體加水量見表5)，用手拌勻，配制成具有良好延展性和黏彈性的料團，現(xiàn)配現(xiàn)用。

表5 各試驗組基礎(chǔ)飼料、蠅蛆蛋白混合物和水的比例(g/220 g料團)

1.2.2 飼養(yǎng)管理

試驗于武漢市科洋生物工程有限公司鰻魚養(yǎng)殖場的室內(nèi)水泥養(yǎng)殖池中進行。試驗開始前，將購買的美洲鰻鱺置水泥池中馴養(yǎng)，馴養(yǎng)期間投喂鰻鱺基礎(chǔ)飼料。馴養(yǎng)7 d后，挑選體質(zhì)量(95.0±5.0) g、體長(35.8±0.4) cm、體格健壯的美洲鰻鱺750尾用于試驗。置于1 m×1 m×1 m網(wǎng)箱中飼養(yǎng)，每網(wǎng)箱放養(yǎng)美洲鰻鱺50尾，所有網(wǎng)箱掛于同一水泥池中養(yǎng)殖，網(wǎng)口高于水面15 cm。試驗分5組，每個試驗組設(shè)3個平行，每個平行50尾魚。每日于8:00和17:00投喂，將餌料加少量水揉成面團后投喂，日投餌量為美洲鰻鱺體質(zhì)量的2%。24 h不間斷充氣增氧，每2 d換水1次，換水量1/3。試驗期間光照為室內(nèi)自然光源，水溫25～28 ℃，pH 7.8±0.2，溶解氧>7.0 mg/L，氨氮<0.21 mg/L。試驗周期為60 d。

1.2.3 樣品采集及處理

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，饑餓美洲鰻鱺24 h，尾靜脈取血。每網(wǎng)箱隨機取美洲鰻鱺15尾，經(jīng)間氨基苯甲酸乙脂甲磺基鹽麻醉后用1 mL一次性注射器自美洲鰻鱺尾靜脈采血，隨機將3尾美洲鰻鱺的血淋巴置于同一無菌EP管中，室溫靜置1 h，然后4 ℃靜置8 h，4 ℃、5000 r/min(離心半徑10 cm)離心10 min，取血清，-80 ℃保存待用。

1.2.4 血清非特異性免疫指標測定

溶菌酶活性、補體3、補體4含量采用合肥萊爾生物工程科技公司生產(chǎn)的試劑盒進行測定，測定步驟按照試劑盒說明書進行。堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、超氧化物歧化酶活性、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測定，測定步驟按照試劑盒說明書進行。

1.2.5 抗病力測定

將嗜水氣單胞菌接種于牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng)24 h后，用0.85%無菌生理鹽水洗脫獲得菌懸液。預(yù)試驗確定半致死密度(LD50)為5×106cfu/mL。

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，每處理隨機選取美洲鰻鱺30尾，分為3組，每組10尾。每尾腹腔注射0.3 mL密度為5×106cfu/mL的嗜水氣單胞菌，隨后按此前的試驗程序繼續(xù)投喂飼養(yǎng)。每日記錄死亡情況，撈出死魚，攻毒試驗持續(xù)14 d。按下式計算各組死亡率(RM，%)及相對免疫保護率(Rm，%)。

RM=(n1-n2)/n1×100%

(1)

Rm=(1-Re/Rb)×100%

(2)

式中，n1為攻毒前活魚數(shù)量(尾)，n2為攻毒后活魚數(shù)量(尾)，Re為試驗組死亡率(%)，Rb為對照組死亡率(%)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用平均值±標準差表示，結(jié)果采用軟件SPSS 19.0進行單因素方差分析，采用鄧肯多重比較分析試驗結(jié)果的差異顯著性，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清溶菌酶活性的影響

隨著飼料中蠅蛆蛋白混合物添加量的增加，溶菌酶活性呈先升后降的趨勢，各添加組溶菌酶活性均顯著高于對照組(P<0.05)(表6)，其中以15%蠅蛆蛋白添加組的活性最高(158.31 U/L)，但與10%蠅蛆蛋白添加組差異不顯著(P>0.05)，與5%和20%蠅蛆蛋白添加組差異顯著(P<0.05)。

表6 飼料中添加蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清溶菌酶活性的影響(n=15) U/L

2.2 蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清補體3、補體4含量的影響

美洲鰻鱺補體3含量隨著蠅蛆蛋白混合物添加比例的增加而逐漸提高，各添加組均顯著高于對照組(P<0.05)(表7)，其中以15%蠅蛆蛋白添加組補體3含量最高(85.66 μg/mL)，但與10%和20%蠅蛆蛋白添加組差異不顯著(P>0.05)，與5%蠅蛆蛋白添加組差異顯著(P<0.05)。美洲鰻鱺補體4含量也隨著蠅蛆蛋白混合物添加比例的增加而提高，并以20%蠅蛆蛋白添加組補體4含量最高(128.04 μg/mL)。方差分析結(jié)果顯示，10%、15%和20%蠅蛆蛋白添加組補體4含量顯著高于對照組(P<0.05)，而5%蠅蛆蛋白添加組與對照組差異不顯著(P>0.05)。

表7 飼料中添加蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清補體3、補體4含量的影響(n=15) μg/mL

2.3 蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清中酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性的影響

酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性均隨飼料中蠅蛆蛋白混合物添加數(shù)量的增加而呈先升后降的趨勢。各添加組酸性磷酸酶活性均顯著高于對照組(P<0.05)(表8)，其中以15%蠅蛆蛋白添加組酸性磷酸酶活性最高(3.00 U/L)，但與10%和20%蠅蛆蛋白添加組差異不顯著(P>0.05)，與5%蠅蛆蛋白添加組差異顯著(P<0.05)。堿性磷酸酶以10%蠅蛆蛋白添加組活性最高(4.12 U/L)，顯著高于5%蠅蛆蛋白添加組和對照組(P<0.05)，與15%和20%蠅蛆蛋白添加組差異不顯著(P>0.05)。

表8 飼料中添加蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性的影響(n=15) U/L

2.4 蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清超氧化物歧化酶活性的影響

隨著飼料中蠅蛆蛋白混合物添加數(shù)量的增加，超氧化物歧化酶活性呈先升后降的趨勢，各添加組超氧化物歧化酶活性均顯著高于對照組(P<0.05)(表9)，其中以15%蠅蛆蛋白添加組超氧化物歧化酶的活性最高(80.09 U/L)，且顯著高于其他各添加組(P<0.05)。

表9 飼料中添加蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清超氧化物歧化酶活性的影響(n=15) U/L

2.5 蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

隨著美洲鰻鱺飼料中蠅蛆蛋白混合物添加量的增加，谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性呈先升后降的趨勢(表10)，其中當蠅蛆蛋白添加水平達到20%時，谷丙轉(zhuǎn)

表10 飼料中添加不同比例蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清轉(zhuǎn)氨酶活性的影響(n=15) U/L

氨酶活性顯著低于對照組(P<0.05)。谷草轉(zhuǎn)氨酶活性則隨飼料中蠅蛆蛋白混合物添加量的增加而逐漸下降，但只有當蠅蛆蛋白添加水平超過15%后，谷草轉(zhuǎn)氨酶活性才顯著低于對照組(P<0.05)。以上結(jié)果表明，在飼料中添加一定比例的蠅蛆蛋白混合物，可有效降低美洲鰻鱺血清轉(zhuǎn)氨酶活性，對美洲鰻鱺肝臟具有良好保護作用。

2.6 蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺抗病力的影響

攻毒后各組死亡情況見表11。蠅蛆蛋白混合物提高了美洲鰻鱺的相對免疫保護率，且隨蠅蛆蛋白混合物添加比例的增加呈先升后降的趨勢，其中以15%蠅蛆蛋白添加組的相對免疫保護率最高，為54.54%。因此，選擇在飼料中添加15%蠅蛆蛋白為美洲鰻鱺免疫保護作用的最佳添加量。

表11 飼料中添加蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺抗病力的影響(n=3)

3 討 論

3.1 蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清溶菌酶活性的影響

溶菌酶存在于魚類的黏液、血清、吞噬細胞和單核細胞胞漿內(nèi)，是生物體內(nèi)重要的非特異性免疫因子之一，它能破壞細菌細胞壁結(jié)構(gòu)，使細菌內(nèi)容物溢出，從而殺死細菌，亦可誘導(dǎo)其他免疫因子的合成和分泌。因此，測定魚體的溶菌酶活性，可在一定程度上反映魚類非特異性體液免疫的狀態(tài)，是魚類非常重要的非特異性免疫評價指標之一。劉黎等[12-13]用蠅蛆粉添加到飼料中投喂青魚(Mylopharyngodonpiceus)，結(jié)果表明，試驗魚血清中溶菌酶活性顯著提高；程逍妹等[5,7]用蠅蛆蛋白添加到飼料中投喂中華鱉(Pelodiscussinensis)和凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)，也證明試驗材料血清溶菌酶活性顯著提高；吳錦輝等[26]在飼料中添加黑水虻(Hermetiaillucens)鮮蟲提高了虎龍雜交斑(Epinephelusfuscoguttatus♀×E.lanceolatus♂)血清溶菌酶活性。張海琪等[6]報道，用蠅蛆蛋白粉替代中華鱉日本品系飼料中50%魚粉，對中華鱉日本品系血清溶菌酶活性無顯著影響；陳乃松等[11]分別用3%和5%蠅蛆粉替代凡納濱對蝦飼料中的魚粉，對蝦血清溶菌酶活性反而下降。筆者在美洲鰻鱺飼料中添加蠅蛆蛋白混合物，溶菌酶活性隨蠅蛆蛋白混合物添加量的增加呈先升后降的趨勢，但各添加組溶菌酶活性均顯著高于對照組(P<0.05)，且以15%蠅蛆蛋白添加組活性最高。本試驗結(jié)果與程逍妹等[5,7,12-13,26]的研究結(jié)果基本一致，而與張海琪等[6,11]的結(jié)果不同。推測可能與應(yīng)用方式有關(guān)，張海琪等[6,11]均采用蠅蛆粉等量替代魚粉，由于蠅蛆粉的蛋白質(zhì)含量為50%～55%，低于中華鱉及對蝦飼料中使用的進口魚粉蛋白含量，等量替代可能會使養(yǎng)殖動物因攝入蛋白數(shù)量減少而影響溶菌酶的活性。

飼料中添加適宜蠅蛆蛋白混合物能顯著提高美洲鰻鱺血清中溶菌酶活性，可能與蠅蛆蛋白含有抗菌肽(或蛋白)、殼聚糖和凝集素等生命活性物質(zhì)可提高美洲鰻鱺免疫性能有關(guān)。但添加量過多，導(dǎo)致飼料蛋白質(zhì)含量過高，反而會加重動物機體代謝負擔，抑制免疫活性的發(fā)揮，這可能是美洲鰻鱺隨飼料中蠅蛆蛋白混合物添加數(shù)量增加，溶菌酶活性呈先升后降的原因。

3.2 蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清補體3、補體4含量的影響。

血清補體活性是重要的非特異性防御指標，可保護機體抵御病原菌的感染，而補體3、補體4是補體系統(tǒng)中的固有成分，參與補體的激活過程，因此具有調(diào)節(jié)動物機體非特異性免疫的功能。劉黎等[12]研究表明，在飼料中添加5%蠅蛆粉可顯著提高青魚魚種血清中補體3、補體4的含量；明建華等[13]也證明，在飼料添加2.5%蠅蛆粉顯著提高了青魚血清補體3、補體4含量；趙峰[17]在黃鱔(Monopterusalbus)飼料中添加20%蠅蛆漿，黃鱔血清中補體3、補體4含量顯著提高。本試驗結(jié)果表明，美洲鰻鱺補體3、補體4含量均隨飼料中蠅蛆蛋白混合物添加比例的增加而逐漸提高，且各添加組均顯著高于對照組。本試驗結(jié)果與劉黎等[12-13,17]的結(jié)果相似，但與宋宇琨等[22]的結(jié)果在補體4上不一致。宋宇琨等[22]研究發(fā)現(xiàn)，在黃羽肉雞飼料中添加蠅蛆粉，血清中補體3隨著蠅蛆粉用量的增加而增加，但補體4的含量各組間差異不顯著。試驗結(jié)果不一致可能與研究對象不同有關(guān)。

3.3 蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清中酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性的影響

酸性磷酸酶在生物體內(nèi)直接參與磷酸基團的轉(zhuǎn)移和代謝，間接增強機體非特異性免疫能力；堿性磷酸酶則是生物體內(nèi)一種重要的代謝調(diào)控酶，參與磷酸基團的轉(zhuǎn)移和鈣磷代謝，在魚類對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收與利用過程中發(fā)揮著重要作用，此外堿性磷酸酶能夠改變病原體的表面結(jié)構(gòu)，從而增強機體對病原體的識別和吞噬能力。隋延鳴等[16]用蠅蛆漿投喂黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)仔魚顯著提高了仔魚酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性；程逍妹等[5,7]分別在凡納濱對蝦、中華鱉飼料中添加20%和15%蠅蛆蛋白，均顯著提高了2種養(yǎng)殖動物血清中酸性磷酸酶及堿性磷酸酶活性；張海琪等[6]用蠅蛆粉替代中華鱉飼料中50%的魚粉，使中華鱉血清中酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性顯著提高；明建華等[13]用蠅蛆粉添加到飼料中投喂青魚，試驗魚血清中堿性磷酸酶活性顯著提高。本試驗結(jié)果表明，酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性均隨飼料中蠅蛆蛋白混合物添加數(shù)量的增加而呈先升后降的趨勢，各添加組酸性磷酸酶活性均顯著高于對照組，其中酸性磷酸酶以添加15%蠅蛆蛋白活性最大，堿性磷酸酶以添加10%蠅蛆蛋白活性最高。本試驗結(jié)果與上述結(jié)果相似。劉麗波等[10]用鮮活蠅蛆等量替代人工配合飼料養(yǎng)殖凡納濱對蝦，發(fā)現(xiàn)不同替代組的酸性磷酸酶及堿性磷酸酶活性或與對照組差異不顯著或低于對照組；孟素宣等[15]用蠅蛆粉替代錦鯉(Cyprinuscarpiokoi)飼料中20%、40%、60%、80%和100%的魚粉，各試驗組堿性磷酸酶活性與對照組差異不顯著。本試驗結(jié)果與劉麗波等[10]的結(jié)果不一致，可能與其用鮮活蠅蛆等量替代人工配合飼料導(dǎo)致對蝦攝食的蛋白質(zhì)總量下降有關(guān)；與孟素宣等[15]不一致，可能與魚的種類不同有關(guān)。

王纖纖等[27]研究了飼料蛋白質(zhì)水平對異齒裂腹魚(Schizothoraxoconnori)非特異性免疫的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著飼料蛋白質(zhì)水平的提高，肝臟酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性均呈先增后減的變化趨勢，推測飼料中蛋白質(zhì)水平過高可能會抑制酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性，給免疫系統(tǒng)帶來負面影響。而本試驗中的蠅蛆蛋白混合物是折算為干物質(zhì)后進行添加，由于干品蠅蛆蛋白質(zhì)含量通常約為55%，而美洲鰻鱺基礎(chǔ)飼料蛋白質(zhì)含量僅為44%，因此在美洲鰻鱺飼料中添加20%蠅蛆蛋白，可能導(dǎo)致飼料蛋白水平過高，從而降低血清中酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性，有關(guān)此問題尚需作進一步研究。

3.4 蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清超氧化物歧化酶活性的影響

有研究證明，家蠅幼蟲及蛹中均含有豐富的抗氧化活性的肽類物質(zhì)，可有效提高細胞抗氧化系統(tǒng)相關(guān)酶活性，降低活性氧自由基對細胞造成的氧化損傷[30-31]。筆者在美洲鰻鱺飼料中添加適量的蠅蛆蛋白混合物，美洲鰻鱺血清中超氧化物歧化酶活性顯著提高，也證明了蠅蛆蛋白可增強美洲鰻鱺的抗氧化能力，至于蠅蛆蛋白添加量過多，超氧化物歧化酶活性反而下降，可能與飼料蛋白質(zhì)水平過高有關(guān)。

3.5 蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺血清轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

轉(zhuǎn)氨酶是反映肝臟功能的一項指標，當組織器官活動或病變時會將轉(zhuǎn)氨酶釋放到血液中，使血清轉(zhuǎn)氨酶含量升高。一般認為，谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性增加，說明肝臟發(fā)生障礙；而谷草轉(zhuǎn)氨酶活性增加，則說明心臟發(fā)生障礙。因此，可根據(jù)血清中這兩種轉(zhuǎn)氨酶活性的變化來判斷肝臟等組織器官的功能狀況。曹俊明等[32]用蠅蛆粉分別替代凡納濱對蝦飼料中20%、40%、60%、80%和100%的魚粉，各替代組凡納濱對蝦血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性隨替代量增加呈降低趨勢，其中100%替代組谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性和60%～100%替代組谷草轉(zhuǎn)氨酶活性顯著低于對照組；劉黎等[12-13]在青魚飼料中添加蠅蛆粉，青魚血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶均與對照組差異不顯著。本試驗中，美洲鰻鱺血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性隨飼料中蠅蛆蛋白混合物添加量的增加呈先升后降的趨勢，20%蠅蛆蛋白添加組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著低于對照組；谷草轉(zhuǎn)氨酶活性則隨飼料中蠅蛆蛋白混合物添加量的增加而逐漸下降，添加水平超過15%后，谷草轉(zhuǎn)氨酶活性才顯著低于對照組。這說明在飼料中添加一定比例的蠅蛆蛋白混合物，可有效降低美洲鰻鱺血清轉(zhuǎn)氨酶活性，對美洲鰻鱺肝臟具有良好保護作用。本試驗結(jié)果與曹俊明等[32]的結(jié)果基本一致，與劉黎等[12-13]報道的不一致，可能與研究對象不同有關(guān)。

3.6 蠅蛆蛋白混合物對美洲鰻鱺抗病力的影響

攻毒感染方式是檢驗養(yǎng)殖動物抗病力和免疫功能的一種常用方法，可客觀評價生物體對于外界病原菌的抵抗能力，直觀反映機體免疫能力強弱。趙峰[17]用添加不同比例的蠅蛆漿飼料投喂黃鱔90 d后用嗜水氣單胞菌攻毒，結(jié)果顯示，各添加組相對免疫保護率均顯著高于對照組，且相對保護率隨蠅蛆漿添加量的增加呈先升后降的趨勢，以添加20%蠅蛆漿的相對免疫保護率最大；程逍妹等[5]用嗜水氣單胞菌攻毒表明，攝食15%蠅蛆蛋白的中華鱉累積死亡率顯著低于對照組，相對保護率為67.99%；明建華等[13]采用嗜水氣單胞菌攻毒發(fā)現(xiàn)，攝食含有蠅蛆粉飼料的青魚存活率顯著高于對照組；陳乃松等[11]分別用含有蠅蛆粉和β-葡聚糖的飼料投喂凡納濱對蝦一段時間后，再用溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)進行攻毒，結(jié)果蠅蛆粉組和β-葡聚糖組的對蝦抵抗力均顯著高于對照組，且以蠅蛆粉組抵抗力最強；筆者用嗜水氣單胞菌攻毒美洲鰻鱺14 d后，累積死亡率隨著飼料中蠅蛆蛋白混合物添加量的增加呈先降后升的趨勢，而相對免疫保護率則呈先升后降的趨勢。試驗結(jié)果與上述所報道的結(jié)果基本一致。證明在飼料中添加適量的蠅蛆蛋白混合物投喂美洲鰻鱺，可增強美洲鰻鱺的非特異性免疫能力，進而提高其成活率，預(yù)防美洲鰻鱺疾病的發(fā)生；同時也說明蠅蛆蛋白中含有的多種免疫活性物質(zhì)如抗菌肽、殼聚糖、幾丁質(zhì)和凝集素等，可提高動物機體免疫力。

4 結(jié) 論

試驗結(jié)果表明，在美洲鰻鱺飼料中添加蠅蛆蛋白混合物可有效提高美洲鰻鱺血清中免疫酶(溶菌酶、補體3、補體4、超氧化物歧化酶、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶)活性，降低轉(zhuǎn)氨酶(谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶)活性，提高美洲鰻鱺非特異性免疫功能，從而增強美洲鰻鱺免疫力和抗病力。其中以在美洲鰻鱺飼料中添加15%蠅蛆蛋白的效果最佳。