吳 斌

（福建省淡水水產(chǎn)研究所，福建福州 350002）

病毒性神經(jīng)壞死?。╲iral nervous necrosis，VNN），也被稱作病毒性腦病和視網(wǎng)膜病（viral encephalopathy and retinopathy，VER），病原為神經(jīng)壞死病毒（nervous necrosis virus，NNV）。該病毒屬諾達(dá)病毒科β-諾達(dá)病毒屬，結(jié)構(gòu)為直徑25～30 nm 的二十面體，無(wú)囊膜[1-2]。根據(jù)病毒顆粒衣殼蛋白基因序列不同，NNV 主要分為赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒（red-spotted grouper NNV，RGNNV）、紅鰭東方鲀神經(jīng)壞死病毒（tiger puffer NNV，TPNNV）、黃帶擬鲹神經(jīng)壞死病毒（striped jack NNV，SJNNV）和條斑星鰈神經(jīng)壞死病毒（barfin flouder NNV，BFNNV）4 種基因型[2-3]。目前我國(guó)主要流行RGNNV 基因型[4-6]。

NNV 可感染多種魚(yú)類的稚魚(yú)和幼魚(yú)，對(duì)成魚(yú)也有一定危害，存在垂直傳播和水平傳播兩種感染途徑。患病魚(yú)常出現(xiàn)典型的癥狀，小規(guī)格（體長(zhǎng)小于3 cm）苗種患病后表現(xiàn)行為不協(xié)調(diào)，呈螺旋狀游泳，鰾腫脹導(dǎo)致腹部膨大，活力下降，漂浮于水面（圖1），死亡后魚(yú)體僵硬；中、大規(guī)格苗種多表現(xiàn)體色發(fā)黑，反應(yīng)遲鈍，離群分散在池底四周，或側(cè)躺于池底，眼球渾濁外凸，死亡后魚(yú)體柔軟。該病的累積死亡率為65%～100%。NNV 主要攻擊魚(yú)腦和視網(wǎng)膜組織，因此患病魚(yú)的典型病理變化是中樞神經(jīng)組織和視網(wǎng)膜組織的壞死和空泡化（圖2）。

圖1 患病魚(yú)苗浮于水面，螺旋游動(dòng)

圖2 病魚(yú)視網(wǎng)膜和腦上皮組織空泡化

VNN 在世界范圍內(nèi)廣泛流行，除非洲外，其他地區(qū)均有發(fā)現(xiàn)魚(yú)類被感染的報(bào)道[7]。1985 年該病在澳大利亞、日本以及東南亞和加勒比海等地區(qū)暴發(fā)，死亡率在90%以上。1991 年日本學(xué)者M(jìn)ori等[8]通過(guò)回歸感染試驗(yàn)首次證實(shí)了NNV 是導(dǎo)致石斑魚(yú)神經(jīng)組織空泡化的病原。2001 年Lin 等[9]首次報(bào)道我國(guó)大陸地區(qū)養(yǎng)殖石斑魚(yú)發(fā)生該病。NNV宿主廣泛，目前已有在石斑魚(yú)[10]、鱸魚(yú)[11]、卵形鯧鲹[12]、半滑舌鰨[13]、牙鲆[14]等多種海水魚(yú)類上出現(xiàn)相關(guān)感染病例的報(bào)道。部分淡水魚(yú)如孔雀魚(yú)，也有感染NNV 的報(bào)道[15]。

近年來(lái)，NNV 危害程度不斷增加，總體呈現(xiàn)危害范圍廣、致病性強(qiáng)、死亡率高等特點(diǎn)[16]。為及時(shí)掌握該病的流行情況，2016 年起我國(guó)將VNN列入了水生動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)計(jì)劃病種，至2021 年，已連續(xù)開(kāi)展了6 年，累計(jì)設(shè)置監(jiān)測(cè)點(diǎn)718 個(gè)，檢測(cè)樣品1 214 份，其中檢出陽(yáng)性238 份。本研究根據(jù)全國(guó)2016—2021 年海水魚(yú)VNN 監(jiān)測(cè)結(jié)果，對(duì)該病的宿主種類、規(guī)格、易感水溫和季節(jié)、流行區(qū)域、發(fā)病養(yǎng)殖場(chǎng)類型等方面進(jìn)行分析，以期為我國(guó)VNN 的有效防控提供數(shù)據(jù)支持。

1 流行情況

1.1 宿主種類

2016 年以來(lái)，水生動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)計(jì)劃共檢測(cè)到VNN 陽(yáng)性樣品238 份，包括石斑魚(yú)219 份、卵形鯧鲹11 份、鲆3 份、河鲀2 份、大黃魚(yú)1 份、鱸（海）2 份，具體分布見(jiàn)表1。監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示：我國(guó)NNV 的宿主種類逐漸增多，涵蓋了6 個(gè)主要海水養(yǎng)殖品種，其中石斑魚(yú)是主要品種。2016—2021 年，每年均有石斑魚(yú)VNN 陽(yáng)性樣品被檢出，且陽(yáng)性率最高，達(dá)38.69%，數(shù)量占感染宿主數(shù)量的92.02%（表1、圖3～4）。

表1 2016—2021 年VNN 陽(yáng)性樣品檢出情況

圖4 2016—2021 年VNN 陽(yáng)性樣品不同宿主占比

1.2 感染宿主規(guī)格

VNN 對(duì)成魚(yú)的危害相對(duì)較小，主要危害稚魚(yú)和幼魚(yú)，尤其是20～60 日齡的魚(yú)苗，感染后病死率可達(dá)90%～100%。2016—2021 年的海水魚(yú)類VNN監(jiān)測(cè)結(jié)果（圖5）顯示：238 份陽(yáng)性樣品中，體長(zhǎng)≤5 cm 的141 份（59.24%），5～10 cm 的62 份（26.05%），1～15 cm 的27 份（11.35%），＞15 cm的8 份（3.36%）。結(jié)果提示，NNV 的感染宿主規(guī)格范圍較廣，不僅對(duì)小規(guī)格苗種產(chǎn)生危害，也感染較大規(guī)格的魚(yú)，甚至是商品魚(yú)。

圖5 2016—2021 年VNN 陽(yáng)性樣品不同規(guī)格占比

1.3 易感水溫和季節(jié)

海水魚(yú)養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中，VNN 一般在4—11月流行，其中6—8 月易暴發(fā)，且有較高的死亡率，低溫季節(jié)一般較少發(fā)生。根據(jù)我國(guó)2016—2021 年海水魚(yú)類VNN 監(jiān)測(cè)結(jié)果，VNN 在我國(guó)的流行時(shí)段較長(zhǎng)，4—11 月均有NNV 陽(yáng)性樣品被檢出，水溫低至20 ℃時(shí)仍能檢出NNV 陽(yáng)性，但易感高峰仍然集中在5—8 月、水溫25～33 ℃的高溫季節(jié)（表2，圖6）。

圖6 2016—2021 年VNN 陽(yáng)性樣品采樣時(shí)間分布

表2 2016—2021 年VNN 陽(yáng)性樣品養(yǎng)殖水溫和采樣時(shí)間

1.4 主要感染地區(qū)

2016—2021 年海水魚(yú)類VNN 監(jiān)測(cè)結(jié)果（圖7）顯示：廣東、福建、海南、天津、廣西、河北、浙江和山東等多個(gè)地區(qū)均有VNN 陽(yáng)性樣品被檢出，其中南方沿海石斑魚(yú)主要養(yǎng)殖區(qū)的福建、廣東、海南、廣西等省份陽(yáng)性檢出率較高，說(shuō)明VNN 在我國(guó)南方海水養(yǎng)殖區(qū)域尤其是石斑魚(yú)主要養(yǎng)殖區(qū)域有較為廣泛的流行。

圖7 2016—2021 年VNN 陽(yáng)性樣品區(qū)域分布

1.5 養(yǎng)殖場(chǎng)類型

2016—2021 年海水魚(yú)類VNN 監(jiān)測(cè)結(jié)果（表3，圖8～9）顯示：VNN 陽(yáng)性樣品主要來(lái)源于苗種場(chǎng)、成魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)和省級(jí)原良種場(chǎng)，并且省級(jí)原良種場(chǎng)和苗種場(chǎng)的VNN 陽(yáng)性樣品檢出率高于成魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)。結(jié)果提示，有必要重點(diǎn)加強(qiáng)對(duì)苗種場(chǎng)和省級(jí)原良種場(chǎng)的VNN 預(yù)防和控制，以減少進(jìn)一步傳播風(fēng)險(xiǎn)。

圖8 2016—2021 年VNN 陽(yáng)性樣品不同類型養(yǎng)殖場(chǎng)占比

表3 2016—2021 年不同類型的養(yǎng)殖場(chǎng)VNN 陽(yáng)性樣品檢出情況 單位：份

2 討論

2.1 易感宿主及規(guī)格

2016—2021 年海水魚(yú)類VNN 監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，VNN 陽(yáng)性品種涉及石斑魚(yú)、卵形鯧鲹、鲆、河鲀、大黃魚(yú)、鱸（海）等多個(gè)品種，雖然仍以石斑魚(yú)為主，但種類在逐漸增加。因此，在全國(guó)海水魚(yú)主要養(yǎng)殖區(qū)域，應(yīng)對(duì)主要養(yǎng)殖品種及養(yǎng)殖過(guò)程中的各個(gè)環(huán)節(jié)加強(qiáng)VNN 檢測(cè)，特別是近年來(lái)新增的NNV 宿主品種，以便更好地掌握VNN 在我國(guó)海水魚(yú)中的流行情況。同時(shí)，監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)NNV 感染宿主規(guī)格范圍正在擴(kuò)大，這與養(yǎng)殖戶普遍認(rèn)為的NNV 主要感染魚(yú)苗種等情況有所差異，因此養(yǎng)殖管理中應(yīng)該做好不同養(yǎng)殖規(guī)格海水魚(yú)的分隔，避免病原在不同規(guī)格海水魚(yú)間傳播。

圖9 2016—2021 年不同類型養(yǎng)殖場(chǎng)樣品陽(yáng)性率分布

2.2 流行季節(jié)及水溫

雖然VNN 在我國(guó)流行時(shí)段較長(zhǎng)，但流行高峰集中在夏秋高溫季節(jié)，主要為5—8 月，這與產(chǎn)業(yè)中VNN 的集中發(fā)生時(shí)間基本吻合。在VNN 流行季節(jié)，應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)養(yǎng)殖生產(chǎn)管理，定期開(kāi)展養(yǎng)殖水體和工具的消毒工作，育苗和養(yǎng)殖過(guò)程中定期投喂益生菌等增強(qiáng)苗種免疫力，以減少VNN 發(fā)病率。

2.3 傳播范圍

2016 年以來(lái)，我國(guó)廣東、福建、海南、廣西等多個(gè)地區(qū)均有VNN 陽(yáng)性樣品被檢出，相對(duì)來(lái)說(shuō)，VNN 在南方海水養(yǎng)殖區(qū)域流行更為廣泛，這可能與NNV 的主要感染宿主石斑魚(yú)集中養(yǎng)殖在南方沿海地區(qū)有關(guān)。此外，我國(guó)北方地區(qū)的石斑魚(yú)苗種主要來(lái)源于海南、廣東、福建等地。因此，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)海水魚(yú)類苗種流通的管控，嚴(yán)格執(zhí)行苗種產(chǎn)地檢疫制度，禁止攜帶NNV 苗種和親魚(yú)的流通，盡可能縮小VNN 在我國(guó)的流行范圍。

2.4 傳播途徑

來(lái)自苗種場(chǎng)的陽(yáng)性樣品數(shù)量要高于來(lái)自成魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)的數(shù)量，說(shuō)明苗種場(chǎng)是NNV 傳播的高風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，應(yīng)給予更大關(guān)注。要進(jìn)一步加強(qiáng)苗種場(chǎng)管理，尤其在苗種選育過(guò)程中應(yīng)重視生物安保工作，對(duì)海水養(yǎng)殖魚(yú)類，特別是石斑魚(yú)，要選擇臨床健康未攜帶NNV 的親魚(yú)進(jìn)行苗種培育，對(duì)受精卵進(jìn)行消毒，并進(jìn)行苗種檢疫，避免因陽(yáng)性苗種流動(dòng)導(dǎo)致的NNV 擴(kuò)散。在苗種生產(chǎn)過(guò)程中，要加強(qiáng)NNV 病原檢測(cè)，提前清除NNV 傳播媒介或病原攜帶者，從源頭上阻斷NNV 傳播。對(duì)有陽(yáng)性樣品檢出的養(yǎng)殖場(chǎng)，要及時(shí)開(kāi)展VNN 流行病學(xué)調(diào)查，對(duì)苗種來(lái)源和去向進(jìn)行追溯調(diào)查，完善陽(yáng)性養(yǎng)殖場(chǎng)點(diǎn)的詳細(xì)信息，在疫病處理過(guò)程中應(yīng)制定切實(shí)可行的管理辦法和操作細(xì)則，對(duì)陽(yáng)性樣品及時(shí)進(jìn)行無(wú)害化處理，并做好消毒措施。

2.5 石斑魚(yú)VNN 流行情況

石斑魚(yú)是海水魚(yú)類VNN 監(jiān)測(cè)計(jì)劃中重要的采樣品種，也是NNV 的主要感染養(yǎng)殖品種。2016—2021 年共采集樣品1 214 份，其中石斑魚(yú)566 份，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性率達(dá)38.69%，遠(yuǎn)高于其他品種。VNN 在我國(guó)南方養(yǎng)殖石斑魚(yú)的主要省份均有發(fā)生。該病多發(fā)生在夏、秋高溫季節(jié)，發(fā)病水溫多在24～33 ℃，但水溫21 ℃時(shí)也有陽(yáng)性被檢出；石斑魚(yú)育苗期VNN發(fā)病率達(dá)80%以上，發(fā)病后死亡率可高達(dá)90%以上。感染石斑魚(yú)的NNV 基因型主要是RGNNV 型，主要感染石斑魚(yú)的苗種期，孵化后20～60 d 屬易感階段，尤其是體長(zhǎng)小于5 cm 的小規(guī)格苗種，在體長(zhǎng)10～15 cm 的較大苗種和成魚(yú)中也能檢出NNV。NNV 感染石斑魚(yú)的途徑主要有兩種：一種為親魚(yú)的垂直傳播，在親魚(yú)、受精卵及孵化1～2 d 的仔魚(yú)中能檢出NNV；另一種是通過(guò)養(yǎng)殖水體引起NNV水平傳播，病毒可能來(lái)自于帶毒但不發(fā)病的成魚(yú)，或被NNV 交叉感染的育苗工具等。

2.6 防控建議

VNN 作為一種嚴(yán)重影響水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的水生動(dòng)物疫病，危害范圍廣、致病性強(qiáng)、死亡率高，且目前沒(méi)有可行和有效的治療方法，一旦暴發(fā)就容易造成重大經(jīng)濟(jì)損失。因此，應(yīng)把預(yù)防作為控制該病流行和蔓延的關(guān)鍵點(diǎn)，早預(yù)防、早控制，做到防患于未然。疫苗免疫是防治病毒性疾病的重要和有效方法之一，在魚(yú)類病毒性疾病研究中已有較多成功的報(bào)道。但是，NNV 主要感染海水魚(yú)類的稚魚(yú)、幼魚(yú)。這個(gè)階段魚(yú)苗的免疫系統(tǒng)還沒(méi)有完全發(fā)育完善，導(dǎo)致疫苗不能起到很好的保護(hù)效果[1]。因此，需要繼續(xù)開(kāi)展NNV 免疫學(xué)研究，開(kāi)發(fā)商業(yè)化的疫苗及合理的免疫方法，通過(guò)對(duì)繁殖親魚(yú)進(jìn)行NNV疫苗免疫，使子代獲得免疫力，從而阻斷NNV 的垂直傳播[17]。

致謝：

本論文在撰寫過(guò)程中，得到了福建省淡水水產(chǎn)研究所樊海平研究員的指導(dǎo)，福建省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站李苗苗工程師、林楠工程師，福建省淡水水產(chǎn)研究所陳夢(mèng)云助理工程師的支持與幫助，福建省水產(chǎn)研究所林克冰研究員提供了相關(guān)圖片。