盛鋼 褚洪遷 劉丁一 孫照剛

2020年，全球約150萬例患者死于結(jié)核病，其中約21.4萬例患者合并HIV感染，結(jié)核病仍然是危害人類健康的呼吸系統(tǒng)傳染病[1]。2010年，世界衛(wèi)生組織在一項關(guān)于控制結(jié)核病的報告中指出，由于各種結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)抗原檢測試劑盒的敏感度和特異度存在較大差異，且檢測效能有限，暫不建議將各種血清學(xué)MTB抗原及抗體診斷試劑用于結(jié)核病診斷[2]，其在我國結(jié)核病診斷的臨床工作中也不斷被弱化。

近年來，雖然痰液或者病灶中直接檢出MTB是肺結(jié)核診斷的金標準，但涂片鏡檢的陽性率僅有50%左右[3-4]，且易受檢測人員技術(shù)水平的影響，存在一定的漏檢率；培養(yǎng)法周期較長，不利于早診斷、早治療。考慮到MTB抗原成分無論是來源于MTB細胞壁、細胞質(zhì)，還是分泌蛋白和某些代謝組分，都是MTB在人體內(nèi)活動的直接證據(jù)，具有區(qū)分現(xiàn)癥感染和既往感染的能力；且不易受檢測人員、實驗室環(huán)境等影響和結(jié)核菌素試驗結(jié)果的干擾，具有即時檢測和床旁檢測的潛力，抗原檢測在某些角度上優(yōu)于細菌學(xué)直接檢查，也優(yōu)于抗體檢測。從檢測的便攜性、檢測成本、檢測能力來看，MTB抗原檢測值得重新關(guān)注和研究，以重新評價MTB抗原檢測的應(yīng)用價值[5]。

MTB抗原蛋白分布廣泛，可存在于血液、腦脊液、尿液、痰液、穿刺組織和結(jié)核肉芽腫中，因此，在這些標本中鑒定出具有臨床意義的抗原直接關(guān)系到檢測結(jié)果的準確性和可靠性。筆者將依據(jù)標本類型，對各種臨床樣本中的抗原蛋白的發(fā)現(xiàn)過程、鑒定方法及應(yīng)用前景進行綜述，以探討MTB檢測技術(shù)的發(fā)展過程與積極意義，為MTB抗原檢測技術(shù)的研發(fā)及臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

結(jié)核病患者不同臨床樣本MTB抗原蛋白鑒定

一、血清

血清是結(jié)核病檢測最常用的樣本之一，目前現(xiàn)行的MTB體外診斷實驗諸如γ-干擾素和抗體檢測大多需要血清樣本。但是，血清樣本成分復(fù)雜，是人體蛋白質(zhì)含量最豐富的體液樣本，這為MTB抗原鑒定帶來了一定困難。目前，研究者應(yīng)用高分辨率的凝膠電泳技術(shù)或者蛋白濾過技術(shù)，仍舊可以從血清樣本中鑒定出一些有意義的MTB蛋白抗原。Banerjee等[6]利用TAC分餾和凝膠過濾柱層析技術(shù)進行一級抗原分離，再利用快速蛋白質(zhì)液相色譜法(FPLC)進行二級分離，獲得了與肺結(jié)核和骨結(jié)核患者血清高度反應(yīng)的組分，即肺結(jié)核血清循環(huán)抗原組分3C(PTS-G3C)和骨結(jié)核血清循環(huán)抗原組分3B(BJS-G3B)。這兩種組分顯示出與MTB體外釋放的排泄-分泌抗原41(ES-41)相似的FPLC模式。繼而，他們在另一項研究中采用硫酸銨沉淀法制備了循環(huán)結(jié)核抗原蛋白9(CTA-9)，應(yīng)用聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和FPLC技術(shù)，對MTB體外培養(yǎng)濾液進行逐級洗脫，獲得了與CTA-9具有相似抗原活性的高血清反應(yīng)性ES-20。利用ES-20建立的間接ELISA檢測方法，對活動性結(jié)核病，特別是淋巴結(jié)結(jié)核顯示出了不錯的診斷潛力[7]。Harinath[8]利用間接和夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)進一步驗證了ES-31和ES-41抗原對不同類型結(jié)核病的診斷效果，發(fā)現(xiàn)ES-31抗原對淋巴結(jié)結(jié)核、結(jié)核性腦膜炎(tubercular meningitis，TBM)有更好的診斷效能，而ES-41對腹膜結(jié)核、骨和關(guān)節(jié)結(jié)核的診斷效果更好。Attallah等[9]利用55 kDa循環(huán)結(jié)核游離抗原的單克隆抗體(TB-55mAb)在血清、腦脊液、腹腔積液等多種體液標本中鑒定到了分子量為55 kDa的循環(huán)結(jié)核游離抗原，并建立了基于55 kDa循環(huán)結(jié)核游離抗原的dot-ELISA檢測方法，結(jié)果具有較高的敏感度(88%)和特異度(97%)。除使用單克隆抗體進行抗原捕獲外，也有研究利用純化的多克隆抗體鑒定出血液中存在具有免疫原性的抗原，例如43 kDa[10]。綜上認為，雖然對血清中MTB抗原蛋白的鑒定有了一定進展，但目前仍缺乏系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)和鑒定血清中結(jié)核抗原的新方法，也沒有可用于臨床優(yōu)勢抗原的充分證據(jù)。

二、組織和肉芽腫

肉芽腫是一種由巨噬細胞、粒細胞、淋巴細胞和成纖維細胞組成的動態(tài)空間結(jié)構(gòu)，這些免疫細胞會將MTB包裹，形成境界清楚的結(jié)節(jié)狀病灶，一方面限制了MTB感染擴散，另一方面也使其成為結(jié)核病慢性進程中的關(guān)鍵成分[11]。一些研究和臨床數(shù)據(jù)表明，結(jié)核肉芽腫中的細菌負載和MTB的代謝活性都會隨著疾病進程發(fā)生變化，這些代謝變化和肉芽腫的包裹則會對抗酸染色效果產(chǎn)生不利影響[12]。Goel和Budhwar[13]利用MTB 38 kDa抗原的單克隆抗體對肉芽腫中的MTB進行免疫組織化學(xué)染色(IHC)，結(jié)果顯示，在36例臨床確診的肺外結(jié)核患者中，使用萋-尼染色，僅有13例為陽性結(jié)果，而在IHC組中，所有患者的樣本均為陽性結(jié)果，并且無假陽性和假陰性結(jié)果。Mustafa等[14]比較了MTB感染的肺組織和淋巴結(jié)組織中的抗原表達水平，發(fā)現(xiàn)肺組織中的大多數(shù)MTB的分泌抗原(如MTP32、MTP46、MTP64等)可經(jīng)IHC染色觀察到，這可能是由于肺部形成保護性組織肉芽腫的能力有限，無法有效限制MTB的增殖所致，而在淋巴結(jié)中形成了控制細菌增殖的肉芽腫，使得細菌的分泌抗原表達量銳減，但體細胞抗原(如Mce1A、Hsp65、MPT57)的存在也可證明淋巴結(jié)結(jié)核持續(xù)感染的存在；另外，通過IHC方法還確定了15例具有硬化結(jié)節(jié)和空洞等影像學(xué)表現(xiàn)的肺結(jié)核患者。而對于細菌學(xué)陰性的既往肺結(jié)核患者的肺組織肉芽腫病灶，也可以通過病灶內(nèi)存在的Ag85A和分枝桿菌結(jié)合DNA結(jié)合蛋白1(MDP1)加以佐證[15]。

除了蛋白抗原外，甘露糖基化脂原甘露聚糖(ManLAM)是目前研究較多的MTB抗原，在病變組織中含量豐富。LAM是MTB細胞壁上的重要成分，能夠隨MTB的增殖代謝不斷地釋放出來。Zhou等[16]研究證明了LAM存在于病變組織中，并將基于ManLAM適配體的IHC檢測技術(shù)用于結(jié)核病檢測，其總體敏感度(86.38%)和特異度(92.86%)均較高。

以上研究均說明了組織和肉芽腫中結(jié)核蛋白和脂類抗原的發(fā)現(xiàn)和鑒定必將促進結(jié)核病病理學(xué)的進一步發(fā)展。但其困難的取樣方式制約了相應(yīng)病理快速診斷技術(shù)的發(fā)展。

三、痰液

痰液標本中找到MTB是診斷結(jié)核病的可靠手段，但其陽性率低(50%左右)、易漏檢，常需要聯(lián)合其他檢查方法。痰液中的MTB抗原檢測本應(yīng)是一項具有潛力的檢查手段，但并未在臨床工作中得以有效應(yīng)用。熱休克蛋白(HspX)是MTB的主要抗原，用于穩(wěn)定細菌的蛋白質(zhì)和細胞結(jié)構(gòu)、提高細菌的抗宿主免疫能力、逃避宿主的免疫清除，幾乎存在于MTB的整個活動期，是活動性結(jié)核病公認的生物標志物[17]。Pelaez等[18]也開發(fā)了一種無標記表面等離子共振(SPR)生物傳感器，用于HspX的床旁檢測。這種基于EG硫醇的生物功能化策略的傳感器檢測系統(tǒng)，未對信號進行任何放大操作，直接反映了機體內(nèi)的HspX水平，實現(xiàn)了HspX的納克級(ng)水平檢測。

目前，國際市場上已有針對痰液中LAM的ELISA檢測試劑盒，這種檢測試劑盒仍是基于單克隆抗體研發(fā)的，在關(guān)于其檢測效果的兩項隊列研究中，均發(fā)現(xiàn)痰液樣本中LAM的定量檢測結(jié)果與菌落形成單位(CFU)計數(shù)存在正相關(guān)，能夠在治療前有效地衡量機體內(nèi)的MTB細菌負荷[19-20]。另外，由于肺部MTB分泌抗原蛋白的高表達，一些研究針對MTB分泌蛋白MPT64作為靶抗原進行檢測[21]，提示其對小兒肺外結(jié)核(EPTB)和結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(MTBC)展現(xiàn)出良好的診斷能力[22-23]。一些公司還推出了一系列針對痰液培養(yǎng)物中MPT64的抗原診斷產(chǎn)品，但絕大部分還未上市。值得一提的是，痰液樣本的處理對痰液標本的抗原檢測是個考驗，目前廣泛使用的以堿處理為代表的蛋白變性等液化方法可能會導(dǎo)致抗原被稀釋和某些重要抗原表位的丟失。

四、腦脊液

腦脊液標本獲取困難，采集過程中患者需承受巨大痛苦，僅用于診斷TBM。MTB侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成的腦損傷和神經(jīng)炎癥是TBM的始動環(huán)節(jié)，患者常表現(xiàn)為顱內(nèi)壓異常增高，出現(xiàn)腦膜刺激征[24]，在其發(fā)生發(fā)展過程中，會引發(fā)腦膜炎癥，病灶部位出現(xiàn)炎性細胞，如中性粒細胞、漿細胞、單核細胞的趨化和浸潤，產(chǎn)生混合細胞反應(yīng)。Song等[25]使用免疫組織化學(xué)方法比較了急性起病的TBM患者第1～4周腦脊液單核細胞的MTB早期分泌性靶抗原6(ESAT6)的抗原表達情況，發(fā)現(xiàn)TBM患者在急性起病后的第1周和第2周的陽性率均明顯高于對照組，且與第4周的陽性率也有明顯差異，這表明EAST6是TBM患者早期診斷的有效抗原。在TBM患者中發(fā)現(xiàn)的另一個循環(huán)游離抗原是30 kDa蛋白，經(jīng)過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)解離掃描，對產(chǎn)生最大相對豐度的成分進行鑒定分析，證實30 kDa條帶的衍生肽存在的Ag85A和Ag85B兩個蛋白均屬于MTB的主要分泌蛋白—Ag85復(fù)合群蛋白。有研究表明，Ag85復(fù)合群蛋白參與MTB的細胞壁生物合成和免疫原性反應(yīng)，在MTB的抗宿主免疫中發(fā)揮著重要作用[26-27]。65 kDa是一類熱休克蛋白，Mudaliar等[28]應(yīng)用TB-60mAb在TBM患者中檢測到65 kDa蛋白的存在，并建立了間接ELISA方法用于TBM患者的血清學(xué)抗原診斷，顯示出84%的敏感度和90%的特異度，但有8%的化膿性腦膜炎患者和10%的病毒性腦膜炎患者出現(xiàn)了假陽性結(jié)果，這與Song等[25]的報道一致。腦脊液中檢測MTB是TBM的重要檢查方法，但臨床實踐證明，腦脊液直接涂片檢測的陽性率較低，而GeneXpert MTB/RIF是檢測核酸的常用診斷技術(shù)，但存在對TBM檢測敏感度有限的缺點[29-32]。綜上所述，直接檢測腦脊液中的抗原蛋白是一種確認MTB現(xiàn)癥感染的重要診斷手段，在TBM診斷方面具有光明前景。

五、尿液

尿液樣本容易獲取，患者依從性好。尿液中MTB抗原檢測的陽性率在免疫缺陷群體中更高，如HIV感染患者，這可能與MTB在免疫缺陷人群中負載量更大，進入尿液中的MTB抗原更多有關(guān)[33-34]。早在2002年，Choudhry和Saxena[35]就對培養(yǎng)濾液蛋白10(CFP10)在尿液標本中診斷結(jié)核病的應(yīng)用價值進行了評估，他們使用純化的CFP抗體進行夾心法ELISA檢測，發(fā)現(xiàn)75%的樣本為陽性。近年來，Seifert等[36]采用一種高敏感度的原型生物電子結(jié)核抗原(BETA)檢測技術(shù)進行初診結(jié)核病患者的血清和尿液樣本中的CFP10的床旁檢測，均顯示出較好的診斷價值；另外，值得注意的是，該研究顯示尿液中CFP10的含量可能要比血清更高，提示當以CFP10為靶標時，尿液樣本也許是更好的選擇。

另一個被確定出現(xiàn)在尿液中的經(jīng)典MTB抗原是LAM，由Hamasur等[37]首先報道，他們將H37Rv的細胞壁超聲產(chǎn)物注射到小鼠腹腔，17 h后收集尿液進行夾心法ELISA分析，證實了尿液中有LAM存在。Dahiya等[38]認為尿液中的LAM和CFP10的一種存在形式是細胞外囊泡(EVs)，通過EVs這種獨特的形式，將結(jié)核抗原組分包裹于脂質(zhì)雙分子層中，以參與細胞間物質(zhì)運輸與代謝[39]。他們利用免疫聚合酶鏈式反應(yīng)(I-PCR)對尿液中的LAM和CFP10進行檢測，結(jié)果顯示I-PCR的檢測限低于ELISA方法106倍。但尿液LAM檢測的敏感度在不同患者人群中存在較大異質(zhì)性，如低CD4+T淋巴細胞計數(shù)的患者(例如HIV合并MTB感染者)對LAM檢測的敏感度(67%～85%)明顯高于HIV陰性的結(jié)核病患者(13%～51%)[40]。

目前，國際上已有來自美國雅培公司和日本富士膠片株式會社的基于側(cè)流尿脂阿拉伯甘露聚糖(LF-LAM)技術(shù)的商業(yè)化檢測試劑盒，用于檢測尿液中的LAM，但其目前的應(yīng)用范圍較窄，僅用于HIV合并MTB感染者，且在不同研究中存在敏感度的較大差異，如在未評估結(jié)核病癥狀的HIV陽性患者中診斷結(jié)核病的敏感度為35%；在具有結(jié)核病臨床表現(xiàn)的HIV陽性患者中診斷結(jié)核病的敏感度為42%，這可能是HIV陰性患者尿液中LAM濃度更低，且檢測結(jié)果易被尿液中與LAM結(jié)合的基質(zhì)蛋白所干擾有關(guān)[41]。另外，一項Meta分析發(fā)現(xiàn)這兩種試劑盒對HIV陽性的疑似結(jié)核病兒童患者檢測的敏感度和特異度更高[42]。Paris等[43]提出的一種用于濃縮LAM的水凝膠納米籠有效地隔絕了基質(zhì)蛋白的干擾，提高了尿液中LAM的檢出能力。De等[44]認為這可能是由于體內(nèi)分離獲得的LAM與體外培養(yǎng)獲得的LAM在結(jié)構(gòu)或者功能方面有所差異，從而導(dǎo)致了檢測結(jié)果的不一致。因此，他們分別對從C3HeB/FeJ小鼠感染模型的肺臟和HIV陰性結(jié)核病患者尿液中分離純化獲得的LAM進行了抗原表位的差異分析，發(fā)現(xiàn)來自肺臟的LAM的非還原末端高度琥珀?；?，并以琥珀酰化的線性4阿拉伯呋喃糖苷(Ara4)綴連的甘露糖封端和支鏈5阿拉伯呋喃糖苷(Ara5)綴連的甘露糖末端基序為主導(dǎo)，而尿液來源的LAM雖也以高豐度的Ara4和Ara5末端基序為主導(dǎo)，但嚴重缺乏支鏈6阿拉伯呋喃糖苷(Ara6)綴連的甘露糖末端基序，這說明LAM結(jié)構(gòu)上的差異可能會直接影響LAM與抗體的親和力，從而影響檢測結(jié)果。

Pollock等[45]在2例肺結(jié)核患者的尿液中發(fā)現(xiàn)了一個獨特的MTB多肽序列：TBCG_03312，經(jīng)過BLAST分析，發(fā)現(xiàn)該肽段與不同的MTB臨床分離株高度同源，與來自MTBC 菌株的TBCG_03312和來自MTB423菌株的氧化還原酶的序列相匹配。進行MTB的體液學(xué)抗原鑒定，一個需要考慮的問題是除去患者體液中高豐度的非MTB抗原蛋白，避免其對低豐度MTB抗原的掩蓋，Young等[46]使用了50 kDa分子截留過濾器(MWCO)去除尿液中高豐度的大分子量蛋白，收集了30 kDa內(nèi)的蛋白質(zhì)，經(jīng)蛋白質(zhì)組學(xué)分析確定了10種僅出現(xiàn)在結(jié)核病患者尿液中的分枝桿菌蛋白。

MTB抗原蛋白鑒定與檢測的發(fā)展歷程與目前存在的問題

早在1987年的一項研究中，科研人員就利用放射免疫技術(shù)(RIA)觀察到TBM患者腦脊液中的MTB特異性抗原(TB-Ag)和特異性抗體(TB-Ab)均明顯升高，認為這些抗原或者抗體檢查可能要比腦脊液常規(guī)檢查更具有診斷意義[47]。隨后越來越多的科學(xué)家開始關(guān)注到MTB抗原檢測，根據(jù)所檢測的抗原類型，抗原鑒定的發(fā)展過程大致分為3個階段：(1)抗原蛋白原始鑒定期：聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)被廣泛應(yīng)用于MTB抗原的發(fā)現(xiàn)與識別中，常以健康人血清為對照進行結(jié)果比對，找出結(jié)核病患者異常的血清條帶，鑒定結(jié)果有一定意義，但限于當時的技術(shù)條件，大多數(shù)研究并未對這些蛋白的多肽和氨基酸序列進行明確分析，其結(jié)構(gòu)和表位大多未知，一些研究者認識到這些蛋白可能融合有多個抗原表位，與非結(jié)核性呼吸系統(tǒng)疾病患者血清存在交叉反應(yīng)，檢測結(jié)果的特異性難以保證[48]。(2)分泌蛋白鑒定期：這一時期，色譜技術(shù)、質(zhì)譜技術(shù)和等電點聚焦電泳等物質(zhì)分析技術(shù)逐漸興起，隨著對編碼MTB抗原蛋白基因結(jié)構(gòu)的認識與發(fā)展，MTB抗原鑒定逐漸向分子生物學(xué)水平靠近。分泌蛋白EAST6和CFP10的分離與表征是MTB抗原蛋白鑒定的重要突破。S?rensen等[49]在MTB培養(yǎng)濾液中發(fā)現(xiàn)了一種由95個氨基酸組成的多肽序列，經(jīng)DNA序列翻譯后比對和N段系列分析，發(fā)現(xiàn)其具有刺激T細胞分泌γ-干擾素的能力，而并非污染蛋白，這也標志著以EAST6為代表的MTB培養(yǎng)濾液蛋白抗原的發(fā)現(xiàn)。隨后，Berthet等[50]鑒定出了與EAST6共同轉(zhuǎn)錄的新基因：lhp，該基因的產(chǎn)物是來自MTB培養(yǎng)濾液的低分子量蛋白質(zhì)CFP10，這兩個低分子量蛋白目前仍舊是MTB抗原研究領(lǐng)域的焦點[51-53]，但EAST6和CFP10目前也僅用于結(jié)核分枝桿菌潛伏感染的篩查和肺外結(jié)核的輔助診斷，其輔助診斷結(jié)核病的價值、區(qū)分潛伏性和感染性結(jié)核病的能力也有待評估。(3)活性肽序列抗原鑒定期：雖然已經(jīng)在各種臨床標本諸如血清、尿液、腦脊液標本中鑒定出了多種具有意義的MTB抗原蛋白，但正如世界衛(wèi)生組織所質(zhì)疑的，這些抗原蛋白檢測結(jié)核病患者的敏感度和特異度在不同的研究中具有明顯差異，抗原蛋白鑒定的穩(wěn)定性及試驗的可重復(fù)性目前也難以保證，這限制了抗原檢測技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用推廣。

當前需要對所鑒定的抗原蛋白的臨床可靠性和檢測方法的適用性進行深刻反思。需要考慮的因素主要包括以下幾個方面：(1)不同臨床標本中的MTB抗原蛋白是否與天然結(jié)構(gòu)一致，經(jīng)過機體復(fù)雜的代謝后這些抗原蛋白發(fā)生了怎樣的變化？(2)所檢測的MTB抗原蛋白是否適用于所有類型的結(jié)核病患者？例如，結(jié)核分枝桿菌潛伏感染者與活動期結(jié)核病患者、單純結(jié)核感染患者與合并免疫缺陷疾病的患者、菌陰患者與菌陽患者等，目前已有一些研究針對不同患者類型的檢測效果進行了詳細探究，但總體來說還沒有定論。此外，是否有抗原蛋白存在于MTB感染的全周期，并能夠以穩(wěn)定的形式存在于臨床樣本中也鮮有研究。(3)為了使檢測方法更為靈敏，多應(yīng)用ELISA、免疫熒光等技術(shù)將檢測信號顯著放大，這也可能會導(dǎo)致假陽性的產(chǎn)生，過度的信號放大以及檢測原理的差異是導(dǎo)致各檢測方法結(jié)果差異較大的重要原因。(4)檢測單一MTB抗原可能會與其他致病菌產(chǎn)生交叉反應(yīng)，導(dǎo)致假陽性結(jié)果。

基于以上問題的考量，科學(xué)家們不再將抗原鑒定的目標集中于菌體本身或者分泌的抗原蛋白，而是開始應(yīng)用基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)分析標本中抗原的存在形式與結(jié)構(gòu)，逐漸關(guān)注抗原蛋白的體內(nèi)外差異，已經(jīng)在結(jié)核病患者血液和尿液中發(fā)現(xiàn)了一些不同于以往發(fā)現(xiàn)的任何天然蛋白的多肽序列。為避免抗原交叉反應(yīng)導(dǎo)致的假陽性和提升對活動性結(jié)核病及結(jié)核分枝桿菌潛伏感染的鑒別能力，一些研究采用聯(lián)合抗原檢測[54-55]，也有研究將不同的抗原表位進行融合，建立融合蛋白檢測，這是一個頗有潛力的思路[56]。另外，有的研究已經(jīng)關(guān)注到過度的信號放大給檢測結(jié)果帶來的不利影響，研究者在不進行任何信號放大的條件下，使用新型技術(shù)如無標記表面等離子共振生物傳感器直接對MTB抗原蛋白進行定量檢測。同時，基于適配體的抗原檢測技術(shù)也值得我們關(guān)注，適配體內(nèi)涵廣泛，核酸、蛋白、脂質(zhì)都可以作為抗原的適配體，并且隨著物質(zhì)互作分析技術(shù)的不斷發(fā)展，適配體技術(shù)將為MTB抗原蛋白的鑒定與檢測開創(chuàng)新的格局[57]。

結(jié) 論

MTB抗原鑒定是抗原檢測技術(shù)的基礎(chǔ)和前提，鑒定出具有臨床意義的抗原對MTB抗原檢測新技術(shù)的研發(fā)具有重要意義。而目前基因組學(xué)、蛋白組學(xué)等分子生物學(xué)方法的快速發(fā)展，為MTB抗原鑒定開辟了一條新渠道。另外，要著重關(guān)注抗原蛋白在機體內(nèi)的存在形式，探究抗原蛋白的體內(nèi)外差異，這將為MTB抗原蛋白鑒定創(chuàng)造積極意義，并且有助于疫苗的研發(fā)。同時，納米技術(shù)、生物傳感技術(shù)、抗原富集技術(shù)與MTB抗原檢測的不斷融合[58]，也將推動MTB抗原檢測技術(shù)的臨床應(yīng)用，使之獲得更多青睞。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻盛鋼：資料收集、分析與撰寫；褚洪遷和劉丁一：文章修改；孫照剛：提出文章撰寫思路