李淑瑩 楊振華 田 蕊 楊勝楠 婁小平

(ThePracticalJournalofCancer,2023,38:0152～0155)

非小細(xì)胞肺癌(non small cell lung cancer，NSCLC)屬于多發(fā)的肺癌類型，發(fā)病率可達(dá)肺癌的80%，發(fā)生原因可能與吸煙、大氣污染、電離輻射、遺傳等因素有關(guān)。且7%～10%的NSCLC患者初診時合并腦轉(zhuǎn)移，30%～50%患者會出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移癥狀。NSCLC腦轉(zhuǎn)移患者具有病情發(fā)展快，預(yù)后差的特點(diǎn)，隨著病情的發(fā)展，肺癌會占據(jù)肺的大部分面積，對肺呼吸功能造成嚴(yán)重影響，加重患者呼吸困難的癥狀，不利于患者的生命安全[1-2]。由于NSCLC腦轉(zhuǎn)移患者早期無典型癥狀，確診時大多已至中晚期，此時患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，不利于后期治療。因此，及早確定疾病并采取治療方案有利于提升患者生存質(zhì)量。表皮生長因子(EGFR)突變是NSCLC診斷中最常見的敏感基因類型，EGFR相關(guān)信號通路在肺癌的發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用，與腫瘤細(xì)胞增殖、血管生成、入侵和轉(zhuǎn)移等具有密切關(guān)系。但EGFR陰性突變與NSCLC腦轉(zhuǎn)移的臨床癥狀之間的關(guān)系仍不明確[3-4]。因此，本研究進(jìn)一步分析EGFR敏感突變陰性NSCLC腦轉(zhuǎn)移患者的臨床特征。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選取2016年1月至2020年12月我院92例EGFR突變陰性NSCLC患者為陰性組，并以1∶1比例選取同期92例EGFR突變陽性患者作為陽性組。陰性組：男性49例、女性43例，年齡42～78(59.68±2.46)歲；術(shù)后病理類型：腺癌79例，大細(xì)胞癌3例，鱗癌10例。陽性組：男性47例，女性45例；年齡42～78(59.52±2.44)歲；術(shù)后病理類型：腺癌71例，大細(xì)胞癌5例，鱗癌16例。2組一般資料均衡可比(P>0.05)。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)肺部或顱內(nèi)占位性病變；②腦轉(zhuǎn)移經(jīng)嚴(yán)格影像學(xué)檢查確診；③患者接受EGFR敏感基因突變檢測；④患者病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者經(jīng)治療后仍出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移需要進(jìn)行手術(shù)治療者；②患者伴有其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病。

1.3 方法

1.3.1 檢測儀器與試劑 使用Applied Biosytems 提供的實(shí)時熒光定量監(jiān)測儀，樣本DNA分離試劑盒及EGFR基因突變實(shí)時熒光檢測試劑盒均由廈門艾德生物提供。

1.3.2 處理標(biāo)本 將新鮮腦轉(zhuǎn)移病理標(biāo)本放置在10%的中性福爾馬林中進(jìn)行6～12 h的固定，并將標(biāo)本實(shí)施石蠟包埋、切片、染色，隨后實(shí)施病理細(xì)胞學(xué)查看及免疫檢測，確定病理類別。每例標(biāo)本需制成厚5～10 μm的5～8份切片，直接放置在1.5 ml的EP管內(nèi)，石蠟切片樣品并確保伴有腫瘤病變組織，腫瘤細(xì)胞組織比率需>50%，為確保切片組織中含有一定比例的腫瘤細(xì)胞，需加同樣細(xì)胞組織的染色片子。

1.3.3 DNA提取 選取石蠟切片，經(jīng)消融、去二甲苯、無水乙醇、消化、裂解、去交聯(lián)、沉淀、過柱結(jié)合、漂洗、二次漂洗、離心、揮發(fā)、洗脫等措施，獲取樣本DNA后，檢查DNA濃度，純化DNA樣本若超過6 h，并放置在-20 ℃溫度下儲存，操作過程需結(jié)合DNA試劑盒說明書實(shí)施。

1.3.4 基因突變檢測 使用擴(kuò)增阻滯突變研究18～21外顯子熱點(diǎn)突變狀況，并按照熒光檢測說明書實(shí)施操作，在試劑盒的反應(yīng)預(yù)混液8聯(lián)管各孔中均添加4.7 μL DNA，產(chǎn)生5 μL 反應(yīng)體系。反應(yīng)程序設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)：95 ℃ 5 min是1個循環(huán)；95 ℃ 25 s，64 ℃ 20 s，72 ℃ 20 s是15個循環(huán)；93 ℃ 25 s，60 ℃ 35 s，72 ℃ 20 s是31個循環(huán)。最后使用實(shí)時熒光定量監(jiān)測儀的操作流程實(shí)施擴(kuò)增，并結(jié)合擴(kuò)增曲線實(shí)施判斷，質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)石蠟切片Ct需維持在15～21左右，并在陰性對照符合條件下實(shí)施結(jié)果判斷。

1.4 觀察指標(biāo)

(1)EGFR陽性與陰性NSCLC患者的腦轉(zhuǎn)移發(fā)病率。(2)統(tǒng)計EGFR陰性NSCLC腦轉(zhuǎn)移患者的發(fā)病部位、病灶數(shù)目、大小。(3)統(tǒng)計EGFR陰性NSCLC腦轉(zhuǎn)移患者的發(fā)病癥狀。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 腦轉(zhuǎn)移發(fā)病情況

EGFR陽性患者初診腦轉(zhuǎn)移為26.09%、1年累積腦轉(zhuǎn)移39.13%，與EGFR陰性患者的25.00%、27.17%比較，無顯著差異(P>0.05)；但EGFR陰性組3年累積腦轉(zhuǎn)移率(28.26%)較陽性組(46.74%)低(P<0.05)。見表1。

表1 EGFR與腦轉(zhuǎn)移發(fā)病率的關(guān)系(例，%)

2.2 EGFR突變陰性NSCLC患者腦轉(zhuǎn)移的發(fā)病部位、病灶數(shù)目、大小

本組26例EGFR突變陰性NSCLC腦轉(zhuǎn)移患者中，發(fā)病部位幕上占61.54%、幕下占3.85%、幕上幕下同時累積30.77%、侵犯顱骨3.85%，其中幕上以頂葉(23.08%)和額葉(19.23%)較為常見。腦轉(zhuǎn)移病灶數(shù)1個、2～3個、>3個分別占34.62%、34.62%、30.77%。病灶大小范圍<1.0 cm、<2.0 cm、<3.0 cm分別占26.92%、34.62%、38.46%。見表2。

表2 EGFR突變陰性NSCLC患者腦轉(zhuǎn)移的發(fā)病部位、病灶數(shù)目、大小

2.3 EGFR突變陰性NSCLC患者腦轉(zhuǎn)移的發(fā)病癥狀

本組26例EGFR突變陰性NSCLC腦轉(zhuǎn)移患者中，臨床癥狀中呼吸系統(tǒng)癥狀占46.15%、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀占26.92%、疼痛11.54%、胸部影像學(xué)異常11.54%、食欲降低3.85%，其中神經(jīng)系統(tǒng)癥狀中包含癱瘓15.38%、癲癇3.85%、頭痛3.85%、運(yùn)動障礙3.85%。見表3。

表3 EGFR突變陰性NSCLC患者腦轉(zhuǎn)移的發(fā)病癥狀

3 討論

NSCLC是肺癌的一種類型，主要起源于腺體或支氣管黏膜，由環(huán)境、輻射、慢性感染病等多種因素共同作用引發(fā)。腦轉(zhuǎn)移是最常見的顱內(nèi)腫瘤之一，具有較高發(fā)病率和病死率，是肺癌的晚期表現(xiàn)，20%～45%的肺癌患者在疾病階段均確診為腦轉(zhuǎn)移。NSCLC腦轉(zhuǎn)移患者會出現(xiàn)顱內(nèi)壓增高、惡心、嘔吐、視力降低等癥狀，如不及時治療，患者體內(nèi)的癌細(xì)胞會進(jìn)一步增殖，嚴(yán)重者還會引起腦疝，壓迫患者呼吸循環(huán)中樞，造成呼吸心跳驟停[5-6]。臨床常采用手術(shù)治療NSCLC腦轉(zhuǎn)移，但術(shù)后復(fù)發(fā)的可能性較大，患者生存率低。因此，探索NSCLC腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，有利于診斷疾病，為后期治療和預(yù)后改善提供依據(jù)[7-8]。

EGFR是具有酪氨酸激酶活性的膜表面?zhèn)鞲衅?，是一個巨大的跨膜糖蛋白，其普遍表達(dá)于人體表皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞?；蛲蛔兪侵窫GFR基因序列出現(xiàn)變化而導(dǎo)致基因活性發(fā)生異常，引起疾病的產(chǎn)生發(fā)展，臨床上通過檢測EGFR基因突變可以明確惡性腫瘤類型，便于選取適當(dāng)?shù)乃幬镞M(jìn)行靶向治療。本研究結(jié)果表示，陰性組3年累積腦轉(zhuǎn)移率(28.26%)較陽性組(46.74%)低(P<0.05)，提示EGFR敏感突變陰性NSCLC患者腦轉(zhuǎn)移風(fēng)險相對較低。EGFR是目前肺癌治療中最主要的靶點(diǎn)，其屬于ErbB的家族成員之一，在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及分化中起到重要作用，可以通過細(xì)胞外區(qū)與配體結(jié)合，形成二聚體，調(diào)節(jié)細(xì)胞的侵襲和凋亡。EGFR基因突變可發(fā)生于較多基因位點(diǎn)，造成正常細(xì)胞生物學(xué)特征出現(xiàn)變化，引發(fā)癌癥，而異常的EGFR活化會促使腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、分化及血管新生，還可以抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，提高腫瘤的發(fā)病率[9-12]。經(jīng)進(jìn)一步研究表示，本組26例EGFR突變陰性NSCLC腦轉(zhuǎn)移患者中，發(fā)病部位以幕上為主，腦轉(zhuǎn)移病灶數(shù)目1個、2～3個、>3個占比分別為34.62%、34.62%、30.77%。病灶大小范圍<1.0 cm、<2.0 cm、<3.0 cm分別占26.92%、34.62%、38.46%。此外，EGFR敏感突變陰性NSCLC腦轉(zhuǎn)移患者主要表現(xiàn)為呼吸系統(tǒng)癥狀和神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。結(jié)合Balasubramanian等[13]研究，進(jìn)一步證實(shí)EGFR敏感突變陰性NSCLC腦轉(zhuǎn)移患者發(fā)病數(shù)目較少，但病灶體積較大。EGFR可以表達(dá)所有細(xì)胞的表面，在正常狀況下可以精準(zhǔn)地調(diào)控細(xì)胞的生長和死亡，當(dāng)其出現(xiàn)基因突變時，不再受制于配體，使細(xì)胞不受控制，進(jìn)一步誘發(fā)癌變癥狀，破壞腦部病灶周圍的神經(jīng)功能，誘發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常[14-15]。

綜上所述，EGFR敏感突變陰性NSCLC患者腦轉(zhuǎn)移風(fēng)險較低，發(fā)病部位主要為幕上，主要表現(xiàn)為呼吸系統(tǒng)癥狀和神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。