凌云志

人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）是目前臨床上已知的一種癌基因，其和乳腺癌的淋巴轉(zhuǎn)移、預(yù)后等密切相關(guān)[1-3]。巨囊性病液體蛋白15（GCDFP15）屬于乳腺囊液組成蛋白，其中正常的乳腺導(dǎo)管小葉基本不會(huì)分泌GCDFP15，而乳腺癌細(xì)胞會(huì)促進(jìn)其大量分泌，由此可知，GCDFP15 可能介導(dǎo)了腫瘤細(xì)胞繁殖、分化、侵襲及轉(zhuǎn)移等過(guò)程[4]。鈣調(diào)理蛋白（Calponin）可有效降低血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)，從而抑制血管的快速形成，可能在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵性作用[5]。鑒于此，本研究探究乳腺癌患者標(biāo)本組織內(nèi)HER2、GCDFP15及Calponin 表達(dá)及其與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，以期為乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)及干預(yù)提供新的靶點(diǎn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2018 年1 月-2020 年10 月朝陽(yáng)市中心醫(yī)院收治的91 例乳腺癌患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有入組人員均接受病理檢查并最終確診，且符合文獻(xiàn)[6]相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）均為成年女性；（3）均行腹腔鏡乳腺癌根治術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他惡性腫瘤；（2）重要臟器出現(xiàn)嚴(yán)重病變；（3）意識(shí)障礙或合并精神疾病。年齡36～83 歲，平均（68.18±7.49）歲；體重指數(shù)（BMI）18～30 kg/m2，平 均（21.22±1.39）kg/m2；合并疾病：糖尿病27 例，高血壓25 例，冠心病17 例，高脂血癥22 例；分化程度：低分化35 例，中高分化56 例；臨床TNM 分期：Ⅰ、Ⅱ期42 例，Ⅲ、Ⅳ期49 例。入組人員在知情同意書(shū)上簽字，經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法 采集所有受試者的乳腺癌組織及癌旁正常組織，以4%中性甲醛進(jìn)行固定，石蠟包埋處理，并以4 μm 為理想厚度作連續(xù)切片。以二甲苯脫蠟，加入5%雙氧水，于常溫條件下孵育10 min，之后以磷酸鹽緩沖液孵育5 min，再以蒸餾水重復(fù)沖洗3 次，5 min/次。隨后加入含有5%山羊血清抗體內(nèi)封閉，10 min 后分別滴加鼠抗人HER2 抗體、單克隆鼠抗人GCDFP15 抗體及鼠抗人Calponin 抗體。上述抗體均選用基因科技股份有限公司產(chǎn)品。放置在4 ℃條件下孵育過(guò)夜，以蒸餾水重復(fù)沖洗3 次。然后滴加相應(yīng)二抗，置于37 ℃條件下孵育30 min，以蒸餾水重復(fù)沖洗3 次，5 min/次。加入二代辣根酶標(biāo)記的工作液，于37 ℃條件下發(fā)育10 min。最后進(jìn)行顯色、脫水、透明、樹(shù)膠封片處理，于顯微鏡下觀察染色情況。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 免疫組化結(jié)果判定：（1）HER2 陽(yáng)性為＞10%癌細(xì)胞呈不完整或完整的細(xì)胞膜著色。（2）GCDFP15 陽(yáng)性：細(xì)胞質(zhì)存在棕黃色著色，且陽(yáng)性細(xì)胞占比＞5%。（3）Calponin 陽(yáng)性為肌上皮細(xì)胞或部分間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)著色[7]。對(duì)所有受試者均進(jìn)行隨訪觀察，隨訪頻率為1 次/月，隨訪形式以電話為主，以上門(mén)隨訪為輔。隨訪6 個(gè)月期間出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)（胸壁、腋下及鎖骨上的新發(fā)病灶）或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（轉(zhuǎn)移至骨、肺、肝、腦等）即為復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。其中復(fù)發(fā)的判定結(jié)果以病理檢查為準(zhǔn)；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移則是依靠影像學(xué)檢查及轉(zhuǎn)移病灶等實(shí)施綜合判斷。將所有受試者按照術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與否分成A 組（復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移）及B 組（無(wú)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移）。（4）血清細(xì)胞角蛋白19 片段抗原21-1（CYFRA21-1）及可溶性CD40 配體（sCD40L）水平檢測(cè)：分別采集所有受試者術(shù)后7 d 晨起進(jìn)食前靜脈血3 mL，以3 000 r/min 離心10 min，獲取血清通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法完成上述兩項(xiàng)指標(biāo)水平的檢測(cè)。具體操作以試劑盒說(shuō)明書(shū)完成，相關(guān)試劑盒選用深圳晶美生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)處理方式由SPSS 22.0 軟件完成，計(jì)量資料表示方式即（），分析開(kāi)展獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料表示方式即率（%），開(kāi)展χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同乳腺組織中HER2、GCDFP15、Calponin表達(dá)對(duì)比 乳腺癌組織中HER2、GCDFP15 陽(yáng)性表達(dá)率均高于癌旁正常組織，而Calponin 陽(yáng)性表達(dá)率低于癌旁正常組織（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 不同乳腺組織中HER2、GCDFP15、Calponin表達(dá)對(duì)比[例（%）]

2.2 兩組一般資料對(duì)比 兩組HER2、GCDFP15、Calponin 表達(dá)情況及CYFRA21-1、sCD40L 水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩組年齡、BMI、合并基礎(chǔ)疾病、臨床TNM 分期、分化程度比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組一般資料對(duì)比

表2（續(xù)）

2.3 乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移影響因素分析 經(jīng)多因素logistic 回歸分析可得，HER2 陽(yáng)性、GCDFP15 陽(yáng)性及血清CYFRA21-1、sCD40L 水平均是乳腺癌患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素，而Calponin 陽(yáng)性為保護(hù)性因素（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移影響因素分析

3 討論

有研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)乳腺癌患者均可從乳腺癌改良根治術(shù)中獲益，但其術(shù)后局部復(fù)發(fā)率高達(dá)3%～25%，繼而對(duì)患者的預(yù)后產(chǎn)生不利影響[8]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HER2 及GCDFP15 在乳腺癌組織中呈異常高表達(dá)，而Calponin 呈異常低表達(dá)?？紤]原因，HER2 屬于抗凋亡基因，在乳腺癌中的過(guò)表達(dá)可有效抑制腫瘤凋亡，繼而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程[9-10]。GCDFP15 主要表達(dá)于大汗腺、泌乳腺和涎腺，而乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展與大汗腺異常分化密切相關(guān)，因此其表達(dá)的異常升高可作為輔助診斷乳腺癌的指標(biāo)之一[11-12]。Calponin 陰性表達(dá)時(shí)，其抑制VEGF 生成的功能隨之缺失，繼而促進(jìn)了腫瘤新生血管的形成，為乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展創(chuàng)造了有利條件。此外，經(jīng)多因素logistic 回歸分析可得：HER2 陽(yáng)性、GCDFP15 陽(yáng)性均是乳腺癌患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素，而Calponin 陽(yáng)性為保護(hù)性因素（P＜0.05）。究其原因，HER2 過(guò)表達(dá)不僅會(huì)在一定程度上提升腫瘤細(xì)胞侵襲能力，而且可刺激淋巴血管新生，從而增加了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)會(huì)增加腫瘤細(xì)胞的抗藥性，最終導(dǎo)致術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)增加。GCDFP15 屬于大汗腺標(biāo)志物之一，乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的發(fā)生會(huì)導(dǎo)致乳腺囊液分泌出現(xiàn)異常改變，繼而引起GCDFP15 的過(guò)表達(dá)[13-15]。Calponin 是一種細(xì)胞骨架類蛋白，臨床上將其根據(jù)電點(diǎn)的差異分 成H1-Calponin、H2-Calponin 及H3-Calponin 三種亞型，其中H2-Calponin 亞型表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中，其表達(dá)的增加是腫瘤預(yù)后積極因素之一[16-17]。另外，血清CYFRA21-1 和sCD40L 水平均是乳腺癌患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的影響因素（P＜0.05）。分析原因，可能是血清CYFRA21-1 和sCD40L 均屬于乳腺癌的血清標(biāo)志物，其表達(dá)水平的升高往往反映了患者病情的加重及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的增加[18-19]。

綜上所述，HER2、GCDFP15、Calponin 表達(dá)和乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移息息相關(guān)，HER2、GCDFP15陽(yáng)性均是患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素，Calponin 陽(yáng)性是保護(hù)因素。