鄭曉霞，何小華，房紹英，馮仰輝，程艷玲

(1.山東省藥學(xué)科學(xué)院 山東省化學(xué)藥物重點實驗室，山東 濟南 250101 ； 2. 山東藥品食品職業(yè)學(xué)院，山東 威海 264210)

在對人和動物進行外科手術(shù)的過程中，術(shù)中出血會影響手術(shù)視野、干預(yù)手術(shù)進程、影響術(shù)部康復(fù)，嚴(yán)重的術(shù)部出血將導(dǎo)致個體死亡[1]。常見的毛細血管出血或動靜脈出血，采用電凝、壓迫或縫扎等常規(guī)方法即可有效止血。但是，在外科及創(chuàng)傷手術(shù)中廣泛出血或大量滲血的情況下，包括紗布、繃帶、棉紗等傳統(tǒng)的止血材料的止血效果并不理想。新型止血紗布和止血海綿雖然止血效果優(yōu)于傳統(tǒng)止血材料，但自身降解性能差，長期存在于創(chuàng)面組織，往往會引起機體的應(yīng)激反應(yīng)。可吸收止血產(chǎn)品能夠在較短的時間內(nèi)促使血液凝固，達到快速止血的目的，同時，還可被機體降解吸收，無需從受傷部位去除，因此具有重要的應(yīng)用前景[2-3]。本試驗旨在通過建立比格犬子宮出血模型，考察可吸收透明質(zhì)酸止血材料的止血作用，并觀察產(chǎn)品的組織相容性和降解性能，以評價其是否可作為臨床盆腔外科手術(shù)中的理想止血材料。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 18只雌性比格犬，由廣州醫(yī)藥研究總院有限公司提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK(粵)2018—0007，合格證號：44006900000450。犬只飼養(yǎng)于普通環(huán)境，用于試驗時體重為9.0～12.0 kg。

1.2 主要試劑 可吸收透明質(zhì)酸止血材料，山東省藥學(xué)科學(xué)院；外科術(shù)中止血裝置，巴德醫(yī)療科技(上海)有限公司；戊巴比妥鈉，德國默克公司；0.9%氯化鈉注射液，辰欣藥業(yè)股份有限公司；頭孢噻呋鈉，河南新正好生物工程有限公司。

1.3 主要儀器 電子臺秤(TSC-150型)、電子天平(LE203E/02型)，梅特勒-托利多(常州)測量技術(shù)有限公司；生物組織脫水機(櫻花VIP-6型)、全自動一體化染色機(櫻花Tisssue-Tek?PrismaTM型)，日本櫻花公司；生物組織包埋機(NP-B型)，湖北諾普醫(yī)療器械有限公司；切片機(RM2235型)，德國Leica公司。

1.4 試驗方法

1.4.1 子宮出血模型的構(gòu)建 18只比格犬按體重隨機分為供試品組、市售對照品組和紗布對照組，每組6只。犬按1 mL/(kg·bw)劑量靜脈注射給予3%戊巴比妥鈉溶液進行麻醉，腹部備皮，仰臥位固定，消毒、鋪巾，開腹，暴露子宮。在距離子宮體與子宮角交界處約1 cm的范圍，隨機選取微小血管(φ<1 mm)，用手術(shù)刀片在與血管垂直的角度劃出長度約5 mm的直線型創(chuàng)口，造成子宮出血模型。

1.4.2 各試驗組止血過程 供試品組處理方法：子宮出血創(chuàng)面造成后，迅速去除創(chuàng)面積血，暴露出血點，立即將適量供試品直接噴在出血部位，覆以無菌紗布壓迫止血，直至止血完成。市售對照品組做同樣處理。紗布對照組使用已精確稱重的無菌醫(yī)用紗布敷壓創(chuàng)口，止血完畢，用少量生理鹽水浸透紗布，輕輕揭開，以免造成再次出血。記錄各組的止血時間、出血量和材料用量。對于各組中創(chuàng)面較大的血管及止血無效的出血采用電凝止血。手術(shù)完畢后，去除多余樣品，還納子宮，常規(guī)逐層縫合。各組動物于術(shù)后每天分別用75%酒精和碘伏消毒傷口處1次，并按10 mg/(kg·bw·d)肌內(nèi)注射頭孢噻呋鈉，連續(xù)注射3 d，預(yù)防感染。

1.5 觀察指標(biāo)及方法 止血時間：在出血創(chuàng)面部位應(yīng)用止血樣品或紗布直至出血完全停止的時間間隔為止血時間。止血觀察時間最長為5 min，如5 min內(nèi)已止血，則記錄實際止血時間；大于5 min仍未止血，則止血無效，止血時間記錄為5 min。出血量：術(shù)前用分析天平精確稱重?zé)o菌醫(yī)用紗布，止血結(jié)束后稱重吸收血液后的紗布重量，根據(jù)公式計算出血量：出血量(mL)=(止血后紗布重量-止血前紗布重量)÷血液比重(1.050 g/mL)。材料用量：用差量法，即每次止血前后稱量樣品重量。術(shù)中止血效果評分：根據(jù)術(shù)中出血和術(shù)野情況，判斷止血效果并進行評分(表1)，評分≥2 分，表示止血有效；評分≥3 分，表示止血優(yōu)良。

表1 止血效果評分Table 1 Hemostatic effect score

1.6 大體解剖觀察及組織病理學(xué)檢查 術(shù)后7 d內(nèi)，每天觀察犬傷口愈合情況，記錄有無出血、滲出和感染等。術(shù)后7 d解剖各組比格犬，肉眼觀察供試品和市售對照品的殘留情況、創(chuàng)面的血腫和腹腔粘連情況；取創(chuàng)面處組織、損傷附近血管進行組織病理學(xué)檢查，顯微境下觀察樣品組織粘附性、降解情況、組織反應(yīng)和有無血栓形成。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析或非參數(shù)檢驗，數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。若計量資料的方差齊，采用單因素方差分析最小差異性檢驗法(Least-significant difference，LSD)檢驗進行組間比較；若計量資料的方差不齊，采用單因素方差分析Dunnet's T3檢驗。P<0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 止血時間、出血量、止血材料用量和止血效果評分 結(jié)果如表2所示，與紗布對照組相比，供試品組和市售對照品組均能夠明顯縮短犬子宮出血創(chuàng)面的止血時間(P<0.01)和減少出血量(P<0.05)；供試品在犬子宮出血創(chuàng)面的止血過程中用量比市售對照品略少；供試品組和市售對照品組之間在止血時間、出血量和材料用量上無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。與紗布對照組相比，供試品組和市售對照品組的止血效果評分有極顯著提高(P<0.01)，且供試品組的手術(shù)視野比市售對照品組稍好，滲血較少。

表2 各組比格犬子宮創(chuàng)面止血效果Table 2 Hemostatic effect of each group on uterine wound in beagle dogs

2.2 大體解剖觀察 術(shù)后7 d觀察期內(nèi)，各組動物進食、飲水、排便等基本體征均正常，未出現(xiàn)傷殘和死亡情況。除了個別動物傷口處出現(xiàn)線結(jié)反應(yīng)，有輕微紅腫，其余大部分動物的腹部傷口愈合良好，無明顯異味和分泌物，未見炎癥反應(yīng)，可見供試品和市售對照品對傷口愈合無明顯影響。術(shù)后7 d對比格犬進行大體解剖肉眼觀察發(fā)現(xiàn)，各組動物的子宮與周圍組織均無粘連，手術(shù)劃傷處愈合良好，供試品組和市售對照品組均未見樣品殘留(圖1)。

圖1 術(shù)后7 d各組比格犬子宮創(chuàng)面愈合情況Fig.1 Wound healing of uterus in each group 7 days after operationA:紗布對照組； B：供試品組； C：市售對照品組A:Gauze control group; B:Test group; C:Commercial control group

2.3 組織病理學(xué)檢查 術(shù)后7 d時，各組比格犬子宮外膜(主要由漿膜組成)結(jié)構(gòu)正常，未見變性、壞死、炎細胞浸潤等組織病理學(xué)變化(圖2)。紗布對照組有1只犬的子宮黏膜層有輕微出血，供試品組和市售對照品組均未見明顯異常。各組在顯微鏡下均未觀察到血栓、樣品殘留和異物組織，其他主要臟器(心、肝、脾、肺、腎、腦)亦未見明顯異常。

圖2 術(shù)后7 d各組比格犬子宮組織病理學(xué)觀察(H.E.染色，100×)Fig.2 Histopathological observation of uterus in each group 7 days after operation (H.E.staining,100×)A：紗布對照組； B：供試品組； C：市售對照品組A:Gauze control group; B:Test group; C:Commercial control group

3 討論

對于高效止血、抗菌、抗炎、促愈合、可生物降解、可吸收等功能多樣化的止血材料的研發(fā)，已成為當(dāng)前止血領(lǐng)域的研究熱點[4]?？晌胀该髻|(zhì)酸止血材料為以透明質(zhì)酸為主要原料，采用乳化交聯(lián)工藝制備的微球表面具有微孔結(jié)構(gòu)[5]，微孔具有親水性分子篩的作用，通過吸收水分，濃縮血液中的固形成分(如血小板、紅細胞、凝血酶和纖維蛋白原等)到微粒表面，形成凝膠狀基質(zhì)而加速自然止血[6-7]。

本試驗旨在考察可吸收透明質(zhì)酸止血材料對子宮部位大面積滲血的止血效果，并考察其降解特性，試驗選用犬的子宮出血模型，既滿足了出血部位不會自行凝血的要求，也模擬了適應(yīng)癥的使用部位。

本試驗結(jié)果顯示，與紗布對照組比較，供試品組在犬的子宮出血創(chuàng)面具有較好的止血作用，與市售對照品組的止血效果相當(dāng)；術(shù)后7 d肉眼觀察，供試品組和市售對照品組的子宮創(chuàng)面恢復(fù)良好，未見樣品殘留；術(shù)后7 d組織病理學(xué)觀察，子宮創(chuàng)面未見血栓、壞死、炎性細胞浸潤、組織增生等病理變化，其他主要臟器未見明顯異常。

綜上所述，可吸收透明質(zhì)酸止血材料對犬子宮出血模型具有較好的止血作用，且7 d即可降解完全，同時不影響傷口的愈合，創(chuàng)傷部位無感染，無血栓形成，不引起組織廣泛粘連，可作為臨床盆腔外科手術(shù)中一種理想的止血材料。