王新明，吳文娟，趙兵杰，許東勤，王潔

（鄭州安圖生物工程股份有限公司，河南 鄭州 450016）

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus）感染是全球范圍內一個重要的公共衛(wèi)生問題，分為急性感染和慢性感染。目前全球約有超過3.5 億的慢性乙型肝炎病毒感染者，我國為高發(fā)區(qū)，約有1 億人為HBV 攜帶者。慢性乙型肝炎病毒感染可造成慢性乙型病毒性肝炎（chronic hepatitis B,CHB）、肝硬化（liver cirrhosis,LC）和原發(fā)性肝細胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）等肝臟疾病，由慢性乙型肝炎病毒感染及其所引起的相關疾病所導致的死亡，全球每年超過100 萬人［1］。

臨床上針對乙型肝炎的診斷，主要有乙肝病毒血清標志物檢測、乙肝病毒DNA 檢測、肝臟生化指標（轉氨酶、膽紅素、球蛋白等）檢測、影像學檢測、病理學活檢等；其中血清標志物檢測是目前最常見和普遍的一個檢測方法，乙肝標志物的血清學檢測方法常見有膠體金、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、時間分辨熒光、化學發(fā)光等［2］。乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）是HBV 的S 基因含226 個氨基酸的HBV 外膜蛋白，常與Dane顆粒并存［3］，臨床上常把HBsAg 作為乙肝病毒感染和診斷乙型肝炎的指標。

乙肝HBsAg 檢測試劑盒主要用于臨床病人及健康體檢者血清及血漿HBsAg 濃度的檢測，而HBsAg 中和確認試劑基于乙肝表面抗原（HBsAg）與表面抗體（Anti-HBs）特異性中和的原理，對HBsAg 檢測結果呈可重復陽性的樣本進行確認，從而輔助乙肝的診斷。目前已批準上市的同類試劑有：Abbott Ireland Diagnostics Division（雅培）的乙型肝炎病毒表面抗原確認試劑盒（化學發(fā)光微粒子免疫檢測法）、Roche Diagnostics GmbH 的乙型肝炎病毒表面抗原確認試劑、珠海麗珠試劑股份有限公司的乙型肝炎病毒表面抗原確認試劑盒（中和試驗）、Siemens Healthcare Diagnostics Inc 的乙型肝炎病毒表面抗原確認試劑盒（化學發(fā)光法）。

本研究通過臨床樣本檢測，對鄭州安圖生物工程股份有限公司生產的乙型肝炎病毒表面抗原確認試劑盒（中和實驗法）（以下簡稱“考核試劑”）與已批準上市的同類產品Abbott Ireland Diagnostics Division 生產的乙型肝炎病毒表面抗原確認試劑盒（化學發(fā)光微粒子免疫檢測法）（以下簡稱“對比試劑”）的臨床性能進行等效性研究，為考核試劑的臨床應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本 本臨床試驗選擇門診、住院病人或體檢剩余的HBsAg 血清或肝素抗凝血漿樣本，或科室預先留存的樣本進行檢測。

1.1.2 樣本的采集與保存 樣本收集、處理后在室溫放置不超過8 h，如果不在8 h 內檢測則將樣本放置在2℃～8℃的冰箱中；若48 h 以上保存或運輸，則提取血清或血漿，轉至合適的存儲容器，凍存于-20℃以下，凍融不超過3 次，使用前恢復至室溫，輕輕搖動混勻。

1.1.3 試劑 對比試劑：雅培公司的乙型肝炎病毒表面抗原確認試劑盒（化學發(fā)光微粒子免疫檢測法）；對比配套試劑：雅培公司的乙型肝炎病毒表面抗原測定試劑盒（化學發(fā)光微粒子免疫檢測法）；考核試劑：安圖公司的乙型肝炎病毒表面抗原確認試劑盒（中和實驗法）；考核配套試劑：安圖公司的乙型肝炎病毒表面抗原檢測試劑盒（磁微粒化學發(fā)光法）。

1.1.4 主要儀器 雅培ARCHITECT 化學發(fā)光檢測儀，安圖AutoLumo A2000 Plus 化學發(fā)光檢測儀。

1.2 方法

采用盲法分別用配套試劑對收集的樣本進行檢測，然后用考核試劑和對比試劑對符合要求的樣本進行確認試驗。對配套試劑檢測結果不一致的樣本、考核試劑和對比試劑檢測結果不一致的樣本用第三方試劑進行復核或根據臨床診斷進行分析。考核試劑與對比試劑不一致樣本＞1%時使用第三方試劑復測，≤1%時無需復測。若樣本量不足，無需使用第三方試劑進行復測，結合臨床信息綜合進行判斷?？己嗽噭┡c對比試劑檢測結果的判定標準見表1、表2。

表1 考核試劑檢測結果判定標準

表2 對比試劑檢測結果判定標準

2 結果

2.1 考核配套試劑與對比配套試劑檢測結果符合率分析

1 186 例臨床血清樣本，考核配套試劑與對比配套試劑檢測結果符合情況匯總見表3。

表3 考核配套試劑與對比配套試劑檢測結果符合情況（例）

試驗結果表明，考核配套試劑與對比配套試劑陽性符合率為99.91%（95%CI：99.48%～99.98%），陰性符合率為 99.00%（95%CI：94.55%～99.82%），總符合率為99.83%（95%CI：99.39%～99.95%）。對檢測結果進行Kappa 檢驗，Kappa 值為0.989，本試劑盒檢測結果與對比試劑有較好的一致性。

2.2 考核試劑與對比試劑檢測結果符合率分析

1 087 例臨床血清樣本，考核試劑與對比試劑確認試驗檢測結果符合情況匯總見表4。

表4 考核試劑與對比試劑檢測結果符合情況（例）

試驗結果表明，考核試劑與對比試劑確認陽性符合率為99.82%（95%CI：99.33%～99.95%），總符合率為99.72%（95%CI：99.19%～99.91%），結果基本一致；考核試劑有2 例未確認陽性結果，未確認陽性結果少于10 例，不再進行未確認結果符合率分析，由于考核試劑與對比試劑不適用的樣本均未進行確認試驗，因此未進行Kappa檢驗。

2.3 血清血漿對比結果分析

215 例同一患者的臨床血清和血漿樣本用考核配套試劑進行平行比對，其中210 例檢測為陽性，考核試劑與對比試劑血清血漿對比檢測結果匯總見表5。

表5 考核試劑與對比試劑血清血漿對比結果（例）

試驗結果表明，考核試劑血清與血漿確認陽性符合率為100.00%（95%CI：98.20%～100.00%），無未確認陽性結果，血清血漿對比結果完全一致。

3 討論

目前，國內普遍采用定性或定量檢測HBV 感染血清標志物。HBsAg 診斷試劑盒靈敏度和特異性均較高，但無論定性檢測還是定量檢測，仍存在假陽性的結果。國外檢測HBsAg 試劑說明書中均提出測定結果呈陽性（有反應性）的樣本，應做中和試驗進行確認以排除可能出現(xiàn)的假陽性［4-5］。通過對大量HBsAg 陽性樣本進行確認試驗，O'BRIEN［6］發(fā)現(xiàn)確認為假陽性的樣本中絕大部分HBsAg 初篩呈弱陽性，因此對HBsAg 弱陽性的樣本進行確認試驗尤為重要。李金明［7］認為HBsAg 檢測結果呈弱陽性的樣本均應進行確認。《全國臨床檢驗操作規(guī)程》建議必要時應采用中和試驗對HBsAg 檢測結果進行確認［8］。

本研究完成1 186 例臨床血清樣本的檢測，其中陽性1 086 例，陰性100 例，考核配套試劑與對比配套試劑陽性符合率為99.91%，陰性符合率為99.00%，總符合率為99.83%，兩者具有較好的一致性。考核試劑與對比試劑1 087 例臨床樣本確認試驗結果顯示，確認陽性符合率為99.82%，總符合率為99.72%，結果基本一致，其中考核試劑有2 例未確認陽性結果。進行215 例同一患者臨床血清和血漿樣本的平行比對，其中210 例樣本考核配套試劑檢測為陽性，血清血漿對比試驗顯示，考核試劑血清血漿對比結果確認陽性符合率為100.00%，無未確認陽性結果，結果完全一致。

綜上所述，鄭州安圖生物工程股份有限公司研制的乙型肝炎病毒表面抗原確認試劑盒（中和實驗法）可以配套其生產的乙型肝炎病毒表面抗原檢測試劑盒（磁微粒化學發(fā)光法）使用，用于對HBsAg 檢測結果呈可重復陽性的臨床血清或血漿樣本進行結果確認，適用于臨床檢驗。