陳新華，楊笑天，陳博倫，王悅

（1.佳木斯大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154000；2.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 眼科，黑龍江 佳木斯 154000；3.佳木斯大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154000）

干眼癥是眼科臨床最常見(jiàn)的眼科疾病之一。新的國(guó)際眼科共識(shí)將其定義為一種以淚膜失衡為特征的多因素疾病，其中感覺(jué)神經(jīng)異常具有重要的影響。近幾十年來(lái)，干眼癥患者數(shù)量急劇增加。亞洲的干眼癥發(fā)病率高于歐洲和北美，表明文化或種族因素參與了干眼癥的病因?qū)W。我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)，2 045 名65 歲及以上的病例中有33.7%被發(fā)現(xiàn)有干眼癥狀［1］。目前干眼癥患病率也在逐步增加，嚴(yán)重程度可導(dǎo)致視力功能明顯減退而嚴(yán)重影響其正常生活。最常見(jiàn)的癥狀有干澀感、異物感、燒灼感、畏光和視力下降［2］。干眼癥治療的原則是根據(jù)干眼癥的類(lèi)型和嚴(yán)重程度進(jìn)行長(zhǎng)期的、個(gè)性化的治療，適應(yīng)于慢性病管理系統(tǒng)。治療方案選擇的基本原則是從簡(jiǎn)單到復(fù)雜，從無(wú)創(chuàng)到有創(chuàng)［3］?；谝陨媳狙芯繉⒗门；撬岬窝垡郝?lián)合玻璃酸鈉滴眼液對(duì)苯扎氯銨誘導(dǎo)兔干眼的治療變化與預(yù)后的相關(guān)性，并探討是否具有重要意義，為臨床應(yīng)用提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

選取新西蘭兔15 只（佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供），體質(zhì)量2～2.5 kg。在標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下，整個(gè)研究過(guò)程如下：室溫（25±1）°C，相對(duì)濕度（60±10）%，光-暗交替12 小時(shí)（上午8 點(diǎn)至晚上8點(diǎn)）。室溫條件下飼養(yǎng)，隨機(jī)提供食物和水。一切技術(shù)都將根據(jù)ARVO 關(guān)于對(duì)動(dòng)物進(jìn)行眼科和視覺(jué)科學(xué)研究的聲明而實(shí)施。

1.2 方法

1.2.1 新西蘭兔干眼模型的建立和分組 將根據(jù)動(dòng)物干眼實(shí)驗(yàn)的報(bào)道方法［4］，使用0.2%苯扎氯銨制造干眼動(dòng)物模型：除了正常組新西蘭兔，所有實(shí)驗(yàn)兔使用0.2%苯扎氯銨滴眼液每天兩次，持續(xù)兩周。造模成功的兔模型，被隨機(jī)分為以下三組：A 組：空白對(duì)照組，不進(jìn)行任何治療。B 組：0.1%濃度玻璃酸鈉滴眼液，每天四次點(diǎn)眼。C 組：0.1%玻璃酸鈉滴眼液和?；撬岬窝垡褐委煟刻焖拇吸c(diǎn)眼。

1.2.2 角膜熒光染色 該實(shí)驗(yàn)采用常見(jiàn)的眼表滴入熒光素鈉的方法來(lái)評(píng)估角膜上皮的破壞情況。先用0.9%的NaCl 溶液將兔結(jié)膜囊內(nèi)沖洗1～2 次保證眼表干凈后，再用方紗拭去眼周多余水分：然后，將熒光素鈉在眼科專(zhuān)用測(cè)試紙的熒光素鈉部分用0.9%的NaCl 溶液全部蘸濕浸潤(rùn)后，將蘸濕部分的熒光素鈉輕柔的接觸新西蘭兔的角膜表面，當(dāng)熒光素鈉液將角膜全部覆蓋后，在裂隙燈顯微鏡藍(lán)鈷燈下仔細(xì)觀察，并拍照記錄。而角膜損傷部分即為被染成的帶有熒光的黃綠色部分［5］。

1.2.3 淚膜破裂時(shí)間 本實(shí)驗(yàn)中評(píng)定新西蘭兔淚膜的穩(wěn)定性使用的是BUT 檢測(cè)方法。用移液槍?zhuān)瑢?.1%的熒光素鈉溶液以10 pL 小心滴入于兔外眥部的結(jié)膜囊內(nèi)約1/3 處，人為閉合其上下眼瞼并使其瞬目三次后，再人為保持新西蘭兔正常睜眼的狀態(tài)下，立即于數(shù)碼裂隙燈顯微鏡或藍(lán)鈷光下觀察，并記錄此時(shí)至染色結(jié)果范圍內(nèi)第一次發(fā)生黑色斑點(diǎn)（破裂點(diǎn)）的時(shí)間，最后取得三個(gè)平均值并進(jìn)行記錄［6］，BUT 測(cè)定數(shù)值：小于10 s 為淚膜不穩(wěn)定。

1.2.4 淚液分泌 新西蘭兔用Schirmer 辦法進(jìn)行測(cè)定淚液的分泌狀況，先選取淚液測(cè)試濾紙片條放在兔眼下方結(jié)膜囊內(nèi)，約5 min 后取出濾紙片條并記下該紙條的潤(rùn)濕長(zhǎng)度（mm）。治療前（D0）、治療后第3 天（D3）、第7 天（D7）、第14 天（D14）的同一時(shí)間段，本試驗(yàn)使用濾紙條對(duì)新西蘭兔進(jìn)行SIt 測(cè)試。用眼科專(zhuān)業(yè)鑷子將小紙條的一端放在兔眼的結(jié)膜囊中外1/3 處，靜待約60 s，然后專(zhuān)用尺進(jìn)行測(cè)定比對(duì)其已浸濕部分的直徑，并進(jìn)行記錄（精確到0.5 mm）。檢查之后用手指輕輕使新西蘭兔上下眼瞼閉合，防止角膜手術(shù)創(chuàng)傷和眼表遭受外部沖擊。Schirmer 檢測(cè)結(jié)果：淚液分泌的正常值，10～15 mm，＜10 mm 為淚液分泌不足，＜5 mm 為干眼癥。

1.2.5 角膜結(jié)膜組織學(xué)變化 本實(shí)驗(yàn)采用了對(duì)石蠟的切片，進(jìn)行了蘇木精-伊紅（HE）染色，在光鏡下觀察各組新西蘭兔角膜組織形態(tài)學(xué)各方面的改變；對(duì)石蠟切片進(jìn)行了高碘酸-雪夫（PAS）染色，在光鏡下觀察各組新西蘭兔結(jié)膜杯狀細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的改變。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 25 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用百分率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組新西蘭兔角膜熒光素染色檢測(cè)結(jié)果

治療后第7 天，A 對(duì)照組新西蘭兔角膜可見(jiàn)大片熒光素著染，B 組和C 組新西蘭兔角膜可見(jiàn)少量點(diǎn)狀熒光素著染；治療后第14 天，B 組仍可見(jiàn)少量熒光素著染，C 對(duì)照組更接近于正常。見(jiàn)圖1。

圖1 角膜熒光素染色檢測(cè)結(jié)果

2.2 各組淚膜破裂時(shí)間實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

實(shí)驗(yàn)干預(yù)治療前兩組之間的淚膜破裂時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均為P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)干預(yù)治療后第7 天和第14 天，數(shù)值B 組C 組淚膜破裂時(shí)間顯著高于A 組，C 組高于B 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均為P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組淚膜破裂時(shí)間實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較（,s）

表1 各組淚膜破裂時(shí)間實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較（,s）

注：1）與A 組比較，P＜0.05；2）與B 組比較，P＜0.05。

2.3 各組淚液分泌結(jié)果比較

實(shí)驗(yàn)干預(yù)治療前，兩組角膜淚液分泌水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)干預(yù)治療后第3 天，角膜分泌值與B 組C 組和A 組角膜淚液分泌量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。第7 天和第14 天，角膜淚液分泌量顯著高于A 組，數(shù)值C 組高于B 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組淚液分泌結(jié)果比較（,mm）

表2 各組淚液分泌結(jié)果比較（,mm）

注：1）與A 組比較，P＜0.05；2）與B 組比較，P＜0.05。

2.4 各組角膜上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

光鏡下觀察角膜組織結(jié)構(gòu)。角膜上皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化：A 對(duì)照組的新西蘭兔，角膜上皮層顯著性降低，可見(jiàn)細(xì)胞浸潤(rùn)，上皮細(xì)胞細(xì)胞膜界限不清而且排列紊亂，角膜表面不光滑；各給藥組兔的角結(jié)膜上皮情況與模型組對(duì)比均有所改善，其中C 組給藥組角膜上皮排列均較為比較完整，且上皮細(xì)胞體積也有恢復(fù)，病理情況有所改善，接近于正常水平。見(jiàn)圖2。

圖2 角膜上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

2.5 結(jié)膜杯狀細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

光鏡下觀察結(jié)膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)：結(jié)膜表面可見(jiàn)杯狀細(xì)胞，對(duì)照組A 結(jié)膜上皮細(xì)胞缺失，結(jié)膜杯狀細(xì)胞數(shù)量下降，微絨毛消失，細(xì)胞間的連接或斷裂固有層出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；B、C 治療組新西蘭兔富含結(jié)膜杯狀細(xì)胞，分泌顆粒豐富，杯狀細(xì)胞數(shù)量逐漸增多，上皮細(xì)胞的表面微絨毛也逐漸增多，細(xì)胞緊密，C 治療組更接近于正常，無(wú)水腫及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。見(jiàn)圖3。

圖3 結(jié)膜杯狀細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

3 討論

干眼的主要治療目標(biāo)是緩解癥狀，并維持正常視覺(jué)功能［7］。輕度和中度干眼癥是可逆的，在緩解癥狀的同時(shí)應(yīng)盡可能消除病因。重度干眼癥有不同的病因，而且大多是不可逆的。治療目標(biāo)是在合理治療的基礎(chǔ)上保留視覺(jué)功能，延緩癥狀。干眼的治療原則也是根據(jù)干眼的類(lèi)型和程度提供長(zhǎng)期的、個(gè)性化的治療［8-11］，并使患者適應(yīng)緩慢的疾病管理系統(tǒng)。治療方案的基本選擇原則是從簡(jiǎn)單到復(fù)雜，從無(wú)創(chuàng)性到有創(chuàng)性［12］。

人工淚液功能主要是潤(rùn)滑眼表，可以適用于各種各樣的干眼癥。在人工淚液中，富有代表性的是玻璃酸鈉。玻璃酸鈉自身具備很強(qiáng)的粘彈性、可塑力和吸濕特性，對(duì)眼表有著提高潤(rùn)滑、緩解眼表干澀癥狀的效果，而從眼表中獲得足夠的潤(rùn)滑劑又能夠減輕因受到外界影響的癥狀，又對(duì)眼淚膜的穩(wěn)定能力起到保障作用，另有科學(xué)研究表明，玻璃酸鈉在抗炎和抗氧化等幾個(gè)方面都有著重要的效果。在細(xì)菌生長(zhǎng)、分化和成熟過(guò)程中也有很大的影響［13］。玻璃酸鈉的使用可以改善干眼癥動(dòng)物模型的眼表?yè)p傷，促進(jìn)眼表的修復(fù)。

?；撬崾且环N特殊的、高滲透性的氨基酸，存在大腦、心臟和肌肉中，因此在心血管、顱神經(jīng)、運(yùn)動(dòng)、免疫和視覺(jué)系統(tǒng)中發(fā)揮著出色的調(diào)節(jié)功能［14］。牛磺酸也是一類(lèi)抗氧化劑，呈游離狀態(tài)下普遍出現(xiàn)于哺乳動(dòng)物機(jī)體，可以保護(hù)哺乳動(dòng)物機(jī)體的滲透壓均衡，并具有抵抗炎癥和控制細(xì)胞凋亡的功能，在一定的環(huán)境下可以產(chǎn)生相應(yīng)的細(xì)胞保護(hù)能力，以及對(duì)人類(lèi)角膜的自身修護(hù)功能［15］。?；撬峥梢源龠M(jìn)淚液分泌，緩解干眼角膜上皮增生情況。總之，牛磺酸滴眼液和玻璃酸鈉滴眼液的聯(lián)合使用可以改善新西蘭兔動(dòng)物模型中干眼的相關(guān)指標(biāo)。