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        食品質(zhì)量與安全專業(yè)探究性試驗(yàn)教學(xué)的實(shí)踐
        ——以肉制品基因組DNA提取為例

        2023-01-12 07:18:36張麗王小會楊瑤方瑩王海英
        食品工業(yè) 2022年12期
        關(guān)鍵詞:鹽法凝膠電泳瓊脂糖

        張麗*,王小會,楊瑤,方瑩,王海英

        中南民族大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院 武陵山區(qū)特色資源植物種質(zhì)保護(hù)與利用湖北省重點(diǎn)試驗(yàn)室(武漢 430074)

        為主動擁抱新科技革命和產(chǎn)業(yè)變革的機(jī)遇與挑戰(zhàn),我國教育部、中央政法委、科技部等13個部門于2019年4月29日在天津聯(lián)合啟動“六卓越一拔尖”計(jì)劃2.0,全面推進(jìn)新工科、新醫(yī)科、新農(nóng)科、新文科(簡稱“四新”)建設(shè),以提高高校服務(wù)經(jīng)濟(jì)社會發(fā)展能力[1]。新農(nóng)科要用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)改造升級涉農(nóng)專業(yè),助力打造天藍(lán)水凈、食品安全、生活恬靜的美麗中國[2]。實(shí)踐教學(xué)是理論聯(lián)系實(shí)際、培養(yǎng)學(xué)生掌握科學(xué)方法和提高動手能力的重要平臺,是培養(yǎng)具有創(chuàng)新意識的高素質(zhì)現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)人員的重要環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)實(shí)踐教學(xué)存在試驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容陳舊、方法單一的問題,學(xué)生在固定的操作步驟下機(jī)械地完成試驗(yàn)過程,缺乏主動積極思考的機(jī)會。要提高學(xué)生的綜合素質(zhì),培養(yǎng)學(xué)生解決現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)發(fā)展中科學(xué)問題的能力,為現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)培養(yǎng)創(chuàng)新型、應(yīng)用型人才,需要對實(shí)踐教學(xué)進(jìn)行深入的改革。研究以肉制品基因組DNA提取為例對食品質(zhì)量與安全專業(yè)探究性實(shí)踐教學(xué)的改革進(jìn)行探索,為本專業(yè)的實(shí)踐教學(xué)改革提供示范。

        肉及肉制品是人類飲食的重要組成部分,肉及肉制品的質(zhì)量與安全關(guān)乎人們的身體健康和生命安全[3]。然而肉制品摻假屢禁不止,肉制品以次充好時(shí)有發(fā)生。2013年歐洲馬肉冒充牛肉事件,沃爾瑪濟(jì)南泉城分店銷售的五香牛肉摻狐貍和貉肉,上海雞肉染色變牛肉事件等造成了嚴(yán)重的社會影響[4-5]。為了防止此類肉制品摻假事件發(fā)生,需要建立準(zhǔn)確可靠的鑒定方法?;贒NA的檢測方法近年來獲得了飛速的進(jìn)步以及廣泛的應(yīng)用。動物所有的組織細(xì)胞中都含有DNA,經(jīng)過加工后的肉制品仍然可以通過DNA來進(jìn)行鑒定?;贒NA的檢測方法的實(shí)施首先需要提取高質(zhì)量的基因組DNA[6]。目前,在肉制品樣品的前處理以及基因組DNA的提取方面,不同的研究團(tuán)隊(duì)有不同的處理方式。常規(guī)提取DNA的方法有SDS法、試劑盒法、異硫氰酸胍法、CTAB法、濃鹽法等[7-8]。在樣品的前處理方面,Kim等[9]、Amaral等[10]、Meira等[11]采用121 ℃高壓滅菌處理;張菊[12]、Cai等[13]采取80 ℃、72 h的烘干處理;Hou等[14]進(jìn)行100 ℃和121 ℃烘干處理。哪一種基因組DNA提取方法效果更好?哪一種樣品前處理方式提取的基因組DNA質(zhì)量更好?圍繞這些問題展開資料檢索、試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)、試驗(yàn)結(jié)果分析等科研探索步驟,以激發(fā)學(xué)生的主觀能動性,培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 試驗(yàn)材料

        2)生活習(xí)性。桃小食心蟲在渭北果區(qū)每年發(fā)生1~2代,以老熟幼蟲在土壤內(nèi)結(jié)繭越冬。一般5月下旬至6月上旬越冬幼蟲破繭出土,成蟲多產(chǎn)卵于果實(shí)梗(萼)洼處。幼蟲孵化后,蛀入果實(shí),在果實(shí)內(nèi)蛀食20天左右,老熟后咬破果皮,脫果而出;脫果早的在土表作夏繭化蛹發(fā)生第2代,脫果晚的入土越冬。6月下旬至7月上中旬出現(xiàn)第1代成蟲,8月上中旬出現(xiàn)第2代幼蟲,在采果前大部分脫果。

        生鮮牛肉、豬肉、羊肉、鴨肉等均購于附近超市,洗凈后剔除多余的結(jié)締組織和脂肪,切成小塊分裝,放于-20 ℃冰箱備用。

        1.1.2 儀器與試劑

        負(fù)責(zé)該段施工的班長趙華寧和黨員張維柱得知這一消息,心急如焚。他倆忘記了一天的疲勞,丟下手中的飯碗,火速趕到現(xiàn)場。由于管線已下溝埋入泥土中,如用鐵鍬挖土,一不小心就會破壞已防腐的管線。

        Hieff qPCR SYBR Green Master Mix(實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增預(yù)混和溶液,上海翊圣生物技術(shù)有限公司,貨號為11201ES03);氯仿、乙醇、異丙醇、氯化鈉(分析純,購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限責(zé)任公司);EDTA、Tris-HCl、SDS、CTAB(分析純,購于Sigma-Aldrich)。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1 樣品制備

        4) 按4 ℃ 12 000 r/min離心5 min,使蛋白/SDS復(fù)合物沉淀出來。

        RW20懸臂式攪拌器(IKA);JK-WB-400三孔水浴鍋(上海精科);MLS3780高壓滅菌鍋(三洋);BSC-1304ⅡB2生物安全柜(蘇凈安泰);5415D微型臺式離心機(jī)(eppendorf);CFXConnect熒光定量PCR儀(Bio-Rad);NanoPhotometer-N80超微量紫外分光光度計(jì)(Implen);UVCI-1100凝膠成像系統(tǒng)(major science)。

        1.2.2 DNA提取方法的比較

        經(jīng)過文獻(xiàn)檢索與比對,選擇改良CTAB法、高鹽法、改良SDS法三種具有代表性的基因組DNA提取方法進(jìn)行比較研究。

        1.2.2.1 改良CTAB法

        1.2.2.3 改良SDS法

        2) 加入5 μL 20 mg/mL蛋白酶K,渦旋振蕩30 s。

        3) 將離心管轉(zhuǎn)入65 ℃水浴鍋,溫浴60 min。

        4) 加入5 μL 10 mg/mL RNase A,充分混勻,于65℃水浴10 min。

        綠化荒山、改善區(qū)域生態(tài)環(huán)境是蘭州石化的“綠色約定”。經(jīng)過幾十年的努力,蘭州石化將蘭州市南山東起馬耳山溝底、西到大元峁一帶的2500畝荒山建成了省級森林公園。如今,這里春有花、夏有蔭、秋有果、冬有青,成為市民休閑健身的理想場所。

        5) 按13 000 r/min離心10 min,轉(zhuǎn)移上清液到新的2 mL離心管,加入800 μL氯仿,顛倒混勻。

        6) 重復(fù)步驟(5),取上清液,加入2倍體積沉淀緩沖液(5 g/L CTAB,0.04 mol/L NaCl),室溫下放置60 min。

        7) 按13 000 r/min離心10 min,棄上清液。

        8) 加入175 μL 1.2 mol/L NaCl溶解沉淀。

        9) 加入等體積的氯仿,渦旋振蕩30 s,按13 000 r/min離心10 min。

        10) 吸取上清液,加入0.6倍體積的異丙醇,室溫下放置10 min。

        11) 按13 000 r/min離心10 min,棄上清液,用750 μL 70%乙醇洗滌DNA沉淀。

        當(dāng)然,以上對被害人陳述進(jìn)行證偽思維審查的前提是被害人必須出庭接受質(zhì)證,否則僅對被害人陳述的筆錄進(jìn)行書面審查則審查不全面或?qū)彶楦纱噙M(jìn)行不下去。有鑒于此,人民法院在刑事審判中必須通知被害人出庭接受質(zhì)證。

        12) 按13 000 r/min離心10 min,棄上清液,在37℃干燥DNA沉淀30 min。

        13) 加入100 μL提前預(yù)熱的ddH2O溶解DNA。

        14) 將提取好的DNA,儲存于4 ℃,若要長期存放,放置于-20 ℃。

        1) 將牛肉剔除結(jié)締組織,稱取5 g切碎,放入烘干機(jī)中80 ℃烘干72 h,再將其磨成牛肉粉[13]。

        1) 取50 mg粉末轉(zhuǎn)入1.5 mL滅菌離心管中,向離心管中加入400 μL DNA提取液[0.4 mol/L NaCl,10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0),2 mmol/L EDTA(pH 8.0),1%SDS,20 μg/mL胰RNA酶],用漩渦混合器渦旋30 s。

        2) 加入8 μL 20 mg/mL蛋白酶K(終濃度400 μg/mL)。充分混勻后,放入55~65 ℃水浴鍋中溫浴2 h。期間不停顛倒混勻,直至溶液透明。

        現(xiàn)代工業(yè)經(jīng)濟(jì)不斷提升,為我國的經(jīng)濟(jì)發(fā)展做出了重要的貢獻(xiàn),同時(shí)環(huán)保問題隨之顯現(xiàn),成為了重大的環(huán)境污染源之一,所以,必須踐行制造生產(chǎn)、環(huán)保優(yōu)先的和諧發(fā)展理念[6]。

        紫外分光光度法:每份DNA樣品取1.5 μL,利用超微量紫外分光光度計(jì)測定基因組DNA的A260/280,每個樣品重復(fù)測定3次。當(dāng)A260=1時(shí)dsDNA濃度約為50 μg/mL,純度較好的DNA的A260/280在1.7~1.9之間。如果比值偏高,則說明有RNA未除干凈或基因組DNA降解;如果比值偏低,則說明存在蛋白質(zhì)和酚類等殘留[12]。

        4) 加入等體積異丙醇,混勻,離心管放置在-20℃ 1 h。

        被并購方:雅士利,雅士利創(chuàng)始于1983年,是中國嬰幼兒奶粉產(chǎn)業(yè)中的領(lǐng)導(dǎo)品牌,該企業(yè)還從事營養(yǎng)產(chǎn)品的開發(fā)與發(fā)展。

        5) 按10 000 r/min離心15 min,棄上清液,保留底部乳白色沉淀。

        6) 用250 μL 70%乙醇洗滌沉淀,靜置20 min。

        7) 按10 000 r/min離心5 min,棄上清液,風(fēng)干DNA沉淀。

        8) 向離心管中加入100 μL ddH2O溶解沉淀。將提取好的DNA,儲存于4 ℃,若要長期存放,放置于-20 ℃。

        由所求得的相對重要度可知,人力資源政策對精益生產(chǎn)實(shí)施結(jié)果的影響最大,其次依次是企業(yè)績效管理系統(tǒng)、持續(xù)改善思想等。由影響因素的相對重要度排序得,在企業(yè)實(shí)施精益生產(chǎn)時(shí),最應(yīng)該注意的就是企業(yè)的人力資源政策,好的人力資源政策可以凝聚員工的向心力,使員工可以更好地全身心參與精益改革的過程中去,推動改革的成功。

        1) 取50 mg粉末轉(zhuǎn)入2 mL的滅菌離心管中。加入100 μL水和250 μL CTAB提取緩沖液(20 g/L CTAB,1.4 mol/L NaCl,0.1 mol/L Tris-HCl,20 mmol/L Na2EDTA),置于渦旋振蕩器上充分振蕩至徹底懸浮。

        1) 取50 mg粉末轉(zhuǎn)入1.5 mL滅菌離心管中,加入600 μL預(yù)冷的TE(pH 8.0),然后向裂解液中加60 μL 10% SDS溶液和10 μL 20 mg/mL的蛋白酶K,于55℃放置3~16 h。

        2) 將消化液降至室溫,加入10 μL無DNase的RNase,于37 ℃放置15~60 min。

        3) 將樣品降至室溫,然后加入200 μL的醋酸鉀溶液(3 mol/L,pH 4.8),在振蕩器上劇烈振蕩20 s,使其充分混合。

        取2 g待測樣本,剔除結(jié)締組織和脂肪,將其切成小塊并放入研缽,向研缽中倒入液氮,迅速研磨至樣品成細(xì)小的粉末狀為止。

        5) 小心將上清液轉(zhuǎn)移到新離心管中,加入等體積的氯仿-異戊醇(24∶1,V/V)溶液,充分混合后,按12 000 r/min離心5 min,多次重復(fù)此操作步驟,直到兩相中間不能看到明顯的變性蛋白質(zhì)為止。

        6) 將上清液轉(zhuǎn)移到加有600 μL異丙醇的新離心管中,充分混合后在室溫下按12 000 r/min離心5 min,收集DNA沉淀。

        7) 將DNA沉淀溶解于100 μL ddH2O中。將提取好的DNA,儲存于4 ℃,若要長期存放,放置于-20 ℃。

        1.2.3 前處理方法的比較

        對樣品進(jìn)行前處理可以減少水、脂肪等成分對肉制品定量檢測的干擾。在進(jìn)行干燥處理的同時(shí)需避免對基因組DNA提取質(zhì)量產(chǎn)生影響。根據(jù)查閱文獻(xiàn)中所使用的方法,最終選取以下5種前處理方法進(jìn)行比較,每種處理重復(fù)提取2次。

        1.2.2.2 高鹽法

        2) 將牛肉剔除結(jié)締組織,稱取5 g切碎,放入烘干機(jī)中100 ℃烘干至恒重,再向研缽中加入液氮,將樣品研磨成粉末[15]。

        3) 將牛肉剔除結(jié)締組織,稱取5 g切碎,放入烘干機(jī)中60 ℃烘干72 h,再將其磨成牛肉粉[16]。

        4) 將牛肉剔除結(jié)締組織,稱取5 g切碎,用蒸餾水洗凈,放入蒸餾水中浸泡過夜后,放入烘干機(jī)中70 ℃烘干4 h,將樣品研磨成粉末[17]。

        5) 將牛肉剔除結(jié)締組織,稱取5 g切碎,在121 ℃和150 kPa的高壓鍋中加熱15 min,再將其磨成牛肉粉[9]。

        1.2.4 DNA提取質(zhì)量評估

        3) 加入300 μL 6 mol/L NaCl,在旋渦混合器上高速混合30 s,按10 000 r/min離心30 s,移上清液到另一離心管中。

        瓊脂糖凝膠電泳法:每份DNA樣品取2.5 μL,進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。利用凝膠成像系統(tǒng)觀察電泳條帶?;蚪MDNA的濃度越高,亮度越亮;如果泳道上有彌散條帶,則表明基因組DNA有降解;如果點(diǎn)樣孔很亮,表明基因組DNA中有蛋白質(zhì)殘留[8]。

        PCR法:采用真核生物18S rDNA通用引物對所稀釋的DNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增,引物序列為18S-EUKF:AGCCTGCGGCTTAATTTGAC,18S-EUKR:CAACTAAGAACGGCCATGCA,擴(kuò)增片段為120 bp。實(shí)時(shí)熒光定量PCR體系:2×Hieff qPCR SYBR Green Master Mix 10 μL,10 μmol/L上下游引物各0.4 μL,基因組DNA模板1 μL,加ddH2O補(bǔ)齊至20 μL。PCR反應(yīng)程序:95 ℃預(yù)變性2 min;95 ℃變性5 s,60 ℃退火和延伸30 s,讀板,40個循環(huán)。根據(jù)擴(kuò)增曲線及擴(kuò)增Ct(閾值循環(huán)數(shù),Cycle threshold)值判斷基因組DNA的可擴(kuò)增性,擴(kuò)增曲線典型、Ct值較低,則表明基因組DNA質(zhì)量較好[16]。

        根據(jù)工程的復(fù)雜程度,對設(shè)計(jì)資質(zhì)提出具體要求,如對提灌站、壓力輸水管道、100 m以上的深井、規(guī)模較大的建筑物等技術(shù)含量較高的工程必須聘請有相應(yīng)資質(zhì)的單位進(jìn)行設(shè)計(jì),從源頭抓好工程質(zhì)量。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 DNA提取方法比較

        2.1.1 紫外分光光度法評估

        將1.2.2小節(jié)所述三種方法提取的鴨、豬、牛、羊肉基因組DNA采用紫外分光光度法測定濃度與純度。檢測結(jié)果如表1所示。從濃度上進(jìn)行比較,改良SDS法提取的濃度最高,改良CTAB法提取的濃度最低,高鹽法居中。從純度上比較,改良CTAB法所提取出的DNA的A260/280基本都接近2.0,改良SDS法所提取出的DNA的A260/280大多低于1.7,高鹽法所提取的DNA的A260/280在1.7~1.9之間,相對其他兩種方法較為理想。

        配置根保護(hù)主要為了防止新加入到網(wǎng)絡(luò)中的交換機(jī)被選舉為根交換機(jī),從而影響網(wǎng)絡(luò)的穩(wěn)定.當(dāng)交換機(jī)端口啟用根保護(hù)后,該端口將會成為指定端口,并且在任何情況下也不會被選舉為根端口.在這里我們以交換機(jī)SW2為例,給出根保護(hù)的詳細(xì)配置命令.

        2.1.2 瓊脂糖凝膠電泳法評估

        綜上所述,在開展小學(xué)語文教學(xué)的過程中,合理地借助網(wǎng)絡(luò)資源開展教學(xué),不僅能夠開拓學(xué)生的學(xué)習(xí)層面,提升學(xué)生的人文素養(yǎng),同時(shí)也能夠提高學(xué)生的實(shí)踐能力以及表達(dá)能力,促進(jìn)學(xué)生的綜合發(fā)展。因此,在開展教學(xué)的過程中,教師需要下載網(wǎng)絡(luò)資源,并對其進(jìn)行分析篩選,選擇適合學(xué)生接受的知識開展教學(xué),保證學(xué)生的學(xué)習(xí)質(zhì)量,促進(jìn)學(xué)生綜合素養(yǎng)的形成。

        將提取的鴨、豬、牛、羊肉基因組DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,結(jié)果如圖1所示。三種方法提取出來的基因組DNA都有明亮的主帶,但改良SDS法提取的基因組DNA條有明顯的彌散條帶,表明基因組DNA降解較為嚴(yán)重。高鹽法和改良CTAB法提取的基因組DNA在瓊脂糖凝膠電泳中條帶差別不大。

        圖1 三種方法提取鴨、豬、牛、羊肉基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳圖

        2.1.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法評估

        4.家長的榜樣作用不夠。父母是孩子的第一任老師,是孩子成長的榜樣。調(diào)查中發(fā)現(xiàn),有許多的學(xué)困生父母,都有價(jià)值觀不正確或生活習(xí)慣差的問題。

        用真核生物18S rDNA通用引物對所提取的DNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增曲線及其擴(kuò)增Ct值如圖2和表2所示。圖2表明3種方法所提取的基因組DNA對18S rDNA引物均有典型擴(kuò)增。對擴(kuò)增獲得的Ct值進(jìn)行方差分析,結(jié)果表明,改良CTAB法、高鹽法、改良SDS法提取的DNA在Ct值之間具有顯著差異(P<0.05)。SDS法的Ct值最低,改良CTAB法的Ct值最高,高鹽法居中。這與紫外分光光度法測得的DNA濃度結(jié)果較為一致,DNA濃度越高,Ct值則越低。結(jié)合圖1中瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果,雖然改良SDS法提取的基因組DNA有較為明顯的降解,但是該降解并未對18S rDNA 120 bp短片段靶標(biāo)的擴(kuò)增造成影響。Kim等[9]研究也表明短片段靶標(biāo)適合于DNA有降解的檢測。

        圖2 三種方法提取鴨、豬、牛、羊肉基因組DNA 18S rDNA定量擴(kuò)增曲線

        表2 不同基因組DNA對18S rDNA擴(kuò)增Ct值

        2.2 前處理方法比較

        2.2.1 紫外分光光度法評估

        整個教學(xué)設(shè)計(jì)由導(dǎo)入、體驗(yàn)和歸納三個階段組成。在導(dǎo)入階段,以一部學(xué)生已經(jīng)非常熟悉的電影展開回顧并提問,在這一過程中導(dǎo)入本課主題的概述;在體驗(yàn)階段,教師將電影內(nèi)容分層次再現(xiàn),并布置合理的學(xué)習(xí)任務(wù),要求學(xué)生模仿完成練習(xí)并加以運(yùn)用;在歸納階段,學(xué)生根據(jù)教師引導(dǎo),對所學(xué)虛擬語氣的三個基本形態(tài)予以歸納總結(jié),形成系統(tǒng)知識,進(jìn)一步提高他們的自學(xué)能力。

        利用高鹽法提取經(jīng)過5種不同前處理方法的牛肉,將提取后的DNA用超微量紫外分光光度計(jì)測定3次,檢測結(jié)果如表3所示。從60 ℃至121 ℃提取的DNA濃度越來越低,證明隨著處理溫度的提高,DNA的得率降低。其中,121 ℃所提取的基因組DNA的A260/A280比值小于1.7,且濃度較低,說明經(jīng)過高溫高壓處理后,提取的DNA降解嚴(yán)重,質(zhì)量較差。

        表3 不同處理方法提取?;蚪MDNA純度與濃度測定結(jié)果

        2.2.2 瓊脂糖凝膠電泳法評估

        將經(jīng)過5種不同前處理方法的牛肉基因組DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,結(jié)果如圖3所示。經(jīng)60 ℃處理后提取的基因組DNA總體上清晰完整,條帶明亮。70,80和100 ℃所提取的基因組DNA條有明顯的彌散條帶。121 ℃處理后所提取的基因組DNA無明顯可見的基因組DNA條帶,表明基因組DNA隨著處理溫度的提高逐漸發(fā)生降解。

        圖3 牛肉不同處理方法提取DNA電泳結(jié)果

        2.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法評估

        用真核生物18S rDNA通用引物對60,70,80,100和121 ℃ 5種不同前處理方法提取到的DNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增Ct值及其擴(kuò)增曲線如表4和圖4所示。結(jié)果表明所提取的基因組DNA對引物18S rDNA引物均有擴(kuò)增,且Ct值均小于36,表明提取的樣品基因組DNA均具有可擴(kuò)增性,能夠滿足PCR檢測的需求。其中60 ℃處理后提取的DNA的Ct值最低,這與紫外分光光度法和瓊脂糖凝膠電泳法測得的濃度最高相符。60,70和80 ℃處理總體上對DNA的Ct值影響較小。100 ℃和121 ℃處理后,Ct值有明顯的增大。

        表4 不同處理?;蚪MDNA對18S rDNA擴(kuò)增Ct值

        圖4 不同處理方式提取牛基因組DNA 18S rDNA定量擴(kuò)增曲線

        3 結(jié)論與討論

        分別使用改良CTAB法、高鹽法、改良SDS法三種不同的提取方法提取鴨、豬、牛、羊肉的基因組DNA,并且采用五種不同的方式對牛肉進(jìn)行前處理。對所提取的基因組DNA分別通過紫外分光光度法測定A260/280、瓊脂糖凝膠電泳法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR測定Ct三種不同的方法評估DNA質(zhì)量。研究結(jié)果表明,高鹽法提取的基因組DNA沒有明顯的DNA降解和蛋白質(zhì)殘留,質(zhì)量較好。且高鹽法在操作過程中不涉及氯仿、異戊醇等有毒有害試劑,操作步驟和時(shí)間也較短,在本科試驗(yàn)教學(xué)中優(yōu)先推薦該方法的使用。在樣品的前處理方面,60,70,80,100和121 ℃的不同肉制品前處理方式中,60 ℃處理所提取的DNA濃度最高,質(zhì)量也較好。研究結(jié)果為快速、簡單地提取肉制品基因組DNA提供參考,為基于基因組DNA的肉制品成分鑒定提供技術(shù)支持。

        此研究是食品質(zhì)量與安全專業(yè)探究性試驗(yàn)教學(xué)改革實(shí)踐。在整個實(shí)踐教學(xué)過程中,首先需要檢索國內(nèi)外文獻(xiàn),查閱肉制品基因組DNA提取的方法、了解各種方法的基本原理,確定試驗(yàn)方案。文獻(xiàn)檢索與文獻(xiàn)分析實(shí)踐過程,有助于培養(yǎng)大學(xué)生的信息素養(yǎng)。然后要掌握評估基因組DNA質(zhì)量的方法,這些方法在理論課中多有提及,但是學(xué)生往往一知半解,通過實(shí)踐操作,可以加深學(xué)生對理論知識的理解與應(yīng)用。綜合使用三種不同的評價(jià)方法來對基因組DNA質(zhì)量進(jìn)行評估,有助于學(xué)生對知識的融會貫通與綜合運(yùn)用,讓學(xué)生獲得完整的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),以防止學(xué)生的知識點(diǎn)零散、知識體系窄化脫離實(shí)際應(yīng)用。此研究以肉制品基因組DNA提取為例對實(shí)踐教學(xué)進(jìn)行改革,在凸顯教學(xué)內(nèi)容的系統(tǒng)性及完整性的同時(shí),強(qiáng)調(diào)試驗(yàn)的設(shè)計(jì)性,有助于提高學(xué)生的實(shí)踐能力和創(chuàng)新思維能力,培養(yǎng)符合現(xiàn)代化社會發(fā)展需求的創(chuàng)新型、應(yīng)用型人才。

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