馬 欣，劉倩雯，孫銘釩，寇寶實，李 穎，李鑫淳，高欣然，張 崇，姜 軍*

(1.中國煙草總公司遼寧省公司，遼寧沈陽 110013；2.沈陽紅旗林藥有限公司，遼寧沈陽 110141；3.沈陽農(nóng)業(yè)大學植物保護學院，遼寧沈陽 110866;4.遼寧省撫順市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)及扶貧開發(fā)促進中心，遼寧撫順 113001)

煙草赤星病(Alternariaalternata)作為煙草的重要葉部病害在我國各煙區(qū)普遍而嚴重發(fā)生。赤星病造成的病斑常常連片、出現(xiàn)枯焦，導致葉片脫落，整片葉破碎無法使用[1-2]。目前，生產(chǎn)上防治煙草赤星病仍以化學藥劑為主，朱宇航[3]比較95%苯醚甲環(huán)唑等多種化學藥劑在四川煙草田間防治效果，陳玉國等[4]研究了30%氟醚·吡唑嘧菌酯水劑等化學藥劑的防控作用，化學藥劑在有效控制煙草赤星病的同時，也易促使產(chǎn)生抗藥性并造成環(huán)境污染。農(nóng)用抗生素如多抗霉素系列產(chǎn)品在煙草上有許多登記，但已經(jīng)使用多年，目前已有抗藥性產(chǎn)生。微生物殺菌劑因其具有提高農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量、改善農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)、減少農(nóng)藥用量、降低成本、保護生態(tài)環(huán)境等特點，正日益受到青睞[4-9]。近年來，登記防治煙草赤星病的微生物殺菌劑如哈茨木霉、枯草芽孢桿菌等已進入市場，但混合菌制劑尚未見有獲得農(nóng)藥登記。多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyza)是已被證實的一類具有廣泛宿主的促生菌和生防菌；枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)是一種可以在需氧或厭氧條件下存活，具有多種生理活性的一類細菌。2種芽孢桿菌抑制病原菌的種類和參與誘導寄主系統(tǒng)抗性的基因種類有所差異，但2種芽孢桿菌混合后制成的穩(wěn)定菌劑可擴大抑菌譜，互補誘導抗性基因種類，從而更好地提高控制效果，節(jié)約成本[10]。近年，混合制劑105億CFU/g 多粘菌·枯草芽孢桿菌WP獲得正式登記(PD20200380)，登記作物和防治對象為煙草赤星病。筆者對該產(chǎn)品室內(nèi)抑菌效果進行比較，并對田間防治煙草赤星病效果和應用技術(shù)進行了探究，旨在為防控煙草赤星病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 室內(nèi)抑菌試驗

1.1.1供試菌株及藥劑。供試菌株：煙草赤星病菌(Alternariaalternata),由沈陽農(nóng)業(yè)大學植物保護學院保存。供試培養(yǎng)基：PDA 培養(yǎng)基。供試藥劑及濃度：105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP(沈陽紅旗林藥有限公司)，稀釋600倍(A)；10億CFU/g 多粘類芽孢桿菌WP(市售)，稀釋500倍(B)；100億CFU/g 枯草芽孢桿菌WP(市售)，稀釋600倍(C)；10%多抗霉素WP(市售)，稀釋800倍(D)；40%菌核凈WP(市售)，稀釋400倍(E)；清水處理(空白對照)(F)。

1.1.2試驗方法。將實驗室保存的病原菌進行活化，用直徑5 mm無菌打孔器在赤星病菌菌落邊緣打孔，用接種針挑取菌塊倒置于PDA培養(yǎng)皿的中央，并在28 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48 h備用。

將牛津杯(內(nèi)直徑6 mm)和PDA培養(yǎng)基在121 ℃下滅菌30 min，隨后將已滅菌的PDA培養(yǎng)基進行倒板，待平板完全凝固后，將牛津杯分別置于距平板中心2 cm處，擺放完成后輕輕按壓牛津杯，確保后續(xù)加入藥液無滲出。將準備好的赤星病菌放置于PDA平板的中心；在每個牛津杯內(nèi)用移液槍添加100 μL藥液，以加入清水為對照，每個處理3 次重復；待對照病原菌長滿PDA平板時，觀察供試藥劑對煙草赤星病菌的抑菌效果并計算抑菌率。

1.1.3結(jié)果測定及數(shù)據(jù)分析。將處理組與對照組(CK)進行比較，利用游標卡尺進行測量，按以下公式求出抑菌率：

對照組菌落直徑=對照菌落直徑-菌餅直徑

抑菌率=(對照組抑菌圈直徑-處理組抑菌圈直徑)/對照組抑菌圈直徑×100%

1.2 田間防治試驗

1.2.1試驗地概況。試驗地塊選在遼寧省丹東市鳳城市武莊煙站和鐵嶺市開原市八棵樹煙站。試驗地塊土壤平整，肥料均勻，栽培條件一致，煙株長勢較好，赤星病常年嚴重發(fā)生，試驗前未施用任何防治煙草病蟲害的藥劑，符合試驗要求。試驗分別在2020和2021年煙草生育期進行。

1.2.2試驗材料。試驗藥劑及用量：105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP(沈陽紅旗林藥有限公司)，975 g/hm2(A)。其他藥劑及用量：10億CFU/g 多粘類芽孢桿菌WP，1 200 g/hm2(B)；100億CFU/g 枯草芽孢桿菌WP，1 200 g/hm2(C)；10%多抗霉素WP，225 g/hm2(D);40%菌核凈WP，3 750 g/hm2(E)，均為市售；以等量清水處理為空白對照(F)。

1.2.3試驗設(shè)計。試驗共設(shè)6個處理，每個藥劑處理重復4次，每小區(qū)面積為60 m2，小區(qū)分布隨機排列。

采用均勻噴霧法，使用衛(wèi)士-16型背負式手動噴霧器，工作壓力0.2～0.4 MPa。于煙草打頂期開始施藥，每隔7 d施藥1次，共施藥3次。

1.2.4調(diào)查方法。2個試驗區(qū)分別于第2次施藥后7 d、第3次施藥后7 d調(diào)查病情分級；每小區(qū)對角線5點取樣調(diào)查，每點調(diào)查10株，共調(diào)查50株全部葉片發(fā)病情況。

病情分級標準：0級，無??；1級，病斑面積占葉面積的1%以下；3級，病斑面積占葉面積的2%～5%；5級，病斑面積占葉面積的6%～10%；7級，病斑面積占葉面積的11%～20%；9級，病斑面積占葉面積的21%以上。

2 結(jié)果與分析

2.1 生防菌及其他藥劑對煙草赤星病菌抑制作用通過室內(nèi)抑菌試驗，5種供試藥劑均對赤星病菌有抑制作用，但抑菌率差別較大，表現(xiàn)為40%菌核凈WP(93.22%)>10%多抗霉素WP(88.32%)>105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP(76.67%)>10億CFU/g 多粘類芽孢桿菌WP(67.43%)>100億CFU/g 枯草芽孢桿菌WP(65.65%)。由此可知，40%菌核凈WP對煙草赤星病菌(A.alternata)菌絲生長抑制效果最好。

2.2 105億CFU/g多粘菌·枯草菌WP對煙草赤星病的田間防治效果2020—2021年在遼寧省2個市2個縣(市)的煙田開展了105億CFU/g多粘菌·枯草菌WP對煙草赤星病防治試驗。由表1可知，各藥劑處理結(jié)果均較理想，病情指數(shù)均遠低于對照組，但防效存在差異。其中遼寧省丹東市鳳城市武莊煙站調(diào)查結(jié)果顯示，105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP(975 g/hm2)末次施藥后防效最高，為82.58%，10億CFU/g 多粘類芽孢桿菌WP(1 200 g/hm2)防效最低，為62.25%，兩者防效差異顯著;其中105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP在第2次和第3次施藥后防治效果分別為83.80%和82.58%，防治效果最佳且均顯著高于其他對照藥劑(P<0.05)。

表1 105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP對煙草赤星病的防治效果(2020—2021年)

遼寧省開原市八棵樹煙站調(diào)查結(jié)果顯示，試驗藥劑105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP處理對煙草赤星病的末次施藥后防治效果為79.10%，其他藥劑10億CFU/g 多粘類芽孢桿菌WP、100億CFU/g 枯草芽孢桿菌WP、10%多抗霉素WP和40%菌核凈WP處理區(qū)的防治效果分別為75.45%、71.82%、62.72%和70.00%；其中105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP 2次防效分別為77.51%和79.10%，相較于其他藥劑，105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP防效更加穩(wěn)定，且與其他藥劑差異顯著(P<0.05)。

根據(jù)2020—2021年在遼寧2地開展的105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP與多種藥劑對煙草赤星病的田間防效調(diào)查結(jié)果可知，105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP可有效防治煙草赤星病，且防治效果顯著。同時根據(jù)不同地區(qū)的持效性比較，105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP的防治效果更加穩(wěn)定，施用975 g/hm2為最佳用藥劑量。

2.3 105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP對煙草安全性經(jīng)田間觀察，試驗期間，各處理區(qū)煙草株高、葉色正常，沒有畸形、生長不良等明顯藥害癥狀，也沒有發(fā)現(xiàn)該藥劑對其他生物有明顯致害性影響。

3 結(jié)論與討論

通過室內(nèi)抑菌試驗，發(fā)現(xiàn)105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP抑菌率(76.67%)比40%菌核凈WP(93.22%)和10%多抗霉素WP(88.32%)低，但仍達76%以上，對赤星病菌有顯著的抑制作用。

遼寧省丹東市鳳城地區(qū)多年連續(xù)種植煙草，赤星病年發(fā)生較重，如不及時防治會造成明顯的產(chǎn)量損失。該研究田間試驗結(jié)果表明，試驗藥劑105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP對煙草赤星病有很好的防治效果，當制劑用量為975 g/hm2時，2次防效分別為83.80%和82.58%，顯著優(yōu)于其他藥劑10億CFU/g 多粘類芽孢桿菌WP(66.22%和62.25%)、100億CFU/g 枯草芽孢桿菌WP(72.18%和71.87%)、10%多抗霉素WP(72.18%和71.87%)和40%菌核凈WP的防治效果(75.25%和63.89%)，且存在顯著差異(P<0.05)。

根據(jù)遼寧省鐵嶺市開原市田間試驗，105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP藥劑防治煙草赤星病效果最為突出，2020和2021年2次防效分別達77.51%和79.10%，相較于其他藥劑的防治效果更佳且更穩(wěn)定，在存在顯著差異(P<0.05)。

多粘類芽孢桿菌和枯草類芽孢桿菌的混合制劑已被證明可有效防控煙草赤星病，同時不會對煙草產(chǎn)生不良反應[10]。通過該試驗，進一步證明新藥劑105億CFU/g 多粘菌·枯草菌WP對煙草赤星病有很好的防治效果。但由于赤星病是一種煙草生長后期的病害，只有煙葉進入成熟采收期才表現(xiàn)感病，因此，此類活體微生物農(nóng)藥使用時有一定的技術(shù)要求，應在發(fā)病前噴施在葉片上，連續(xù)施用2～3次，使生防菌能大量繁殖起來，才能發(fā)揮更好的預防和治療效果。