涂遠(yuǎn)璐 湯海江 張 凱 賈學(xué)敬 白云峰* 洪 偉
(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所,南京210014;2.農(nóng)業(yè)部種養(yǎng)結(jié)合重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,南京210014;3.邳州市小河科技發(fā)展有限公司,徐州221300;4.上海美農(nóng)生物科技股份有限公司,上海200157)
目前我國(guó)規(guī)?;驁?chǎng)以妊娠毒血癥為代表的營(yíng)養(yǎng)代謝疾病頻發(fā),據(jù)報(bào)道,2015年至2020年,浙江省海鹽縣多家規(guī)模羊場(chǎng)持續(xù)出現(xiàn)妊娠后期綿羊大量死亡情況,經(jīng)調(diào)查,診斷為妊娠毒血癥,母羊發(fā)病率達(dá)20%以上,死亡率達(dá)70%以上[1]。妊娠毒血癥在母羊懷孕后期較為常見(jiàn),高產(chǎn)多胎母羊發(fā)病最為嚴(yán)重,綿羊比山羊高發(fā)[2-3],它的發(fā)病機(jī)制與圍產(chǎn)期奶牛能量負(fù)平衡(NEB)相似[4]。母羊懷孕后期,胎兒發(fā)育快,對(duì)葡萄糖(GLU)需求大幅增加,但由于飼料單一、精料比例低,從飼糧中攝入的糖類不足以滿足自身和胎兒需要,加之活動(dòng)量少,以及胎兒對(duì)腹腔的壓迫,干物質(zhì)采食量持續(xù)下降,機(jī)體十分容易處于能量負(fù)平衡狀態(tài),導(dǎo)致大量體脂動(dòng)員,產(chǎn)生大量β-羥基丁酸(BHBA)和游離脂肪酸(NEFA),超出肝臟氧化能力,進(jìn)而引發(fā)代謝紊亂而發(fā)病[5-6]。
妊娠毒血癥沒(méi)有特效藥物,預(yù)防意義遠(yuǎn)大于治療[7]。通過(guò)營(yíng)養(yǎng)調(diào)控措施改善NEB是奶牛生產(chǎn)中最普遍也最有效的方法[8]。研究發(fā)現(xiàn),補(bǔ)充過(guò)瘤胃葡萄糖(RPG),增加小腸可利用GLU含量,對(duì)調(diào)節(jié)奶牛脂類代謝有積極作用[9-10];過(guò)瘤胃膽堿(RPC)可以減少甘油三酯在肝臟中的異常沉積,促進(jìn)NEFA的完全氧化,近年來(lái)也得到很多學(xué)者重視[11-12],但它們?cè)陴B(yǎng)羊生產(chǎn)上應(yīng)用很少。劉春海等[13-14]發(fā)現(xiàn)添加25 g/(d·頭) RPG有助于提高母羊妊娠期血清GLU含量,對(duì)緩解母羊產(chǎn)后失重有較好的效果。趙政等[15]研究表明,整個(gè)妊娠期添加1% RPC可以改善乳山羊繁殖性能。張凱等[16]研究發(fā)現(xiàn),育肥羊飼糧中添加0.4% RPC可以提高湖羊生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)通過(guò)研究RPC和RPG添加對(duì)于緩解母羊圍產(chǎn)期能量負(fù)平衡,預(yù)防妊娠毒血癥的效果,并考察其對(duì)母羊產(chǎn)羔、血清生化指標(biāo)和羔羊生長(zhǎng)情況的影響,以期為其在生產(chǎn)中應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
選取80頭胎次、預(yù)產(chǎn)期、體重相近妊娠后期母羊(湖羊),妊娠期(120~130日齡)隨機(jī)分為4組,每組20頭。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧,RPC組添加3 g/(d·頭)RPC,PRG組添加15 g/(d·頭)RPG,PRC+PRG組則是組合添加3 g/(d·頭) PRC和15 g/(d·頭)RPG。RPC中氯化膽堿含量≥25%,過(guò)瘤胃率≥80%,小腸釋放率≥90%,RPG中GLU含量≥50%,過(guò)瘤胃率≥80%,小腸釋放率≥90%。
試驗(yàn)預(yù)試期7 d,正試期50 d(母羊產(chǎn)前30 d到產(chǎn)后20 d)。每天08:00和16:00各飼喂1次,各組添加劑均于采食基礎(chǔ)飼糧前單獨(dú)飼喂,為了減少添加劑氣味,取少量飼糧與添加劑混勻,待母羊采食完再投喂當(dāng)日飼糧。羔羊出生后與母羊同欄直至其45日齡斷奶。
參照NRC(2007)中50 kg綿羊母羊妊娠后期(2胎)營(yíng)養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn),結(jié)合試驗(yàn)羊場(chǎng)實(shí)際情況,設(shè)計(jì)低能水平飼糧,加工成全混合日糧(TMR)作為基礎(chǔ)飼糧,其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。
表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))
續(xù)表1項(xiàng)目 Items含量 Content玉米 Corn6.9豆粕 Soybean meal2.1麩皮 Bran4.0玉米胚芽粕 Corn germ meal10.7石粉 Limestone0.2磷酸氫鈣 CaHPO40.5氯化鈉 NaCl0.1小蘇打 Na2HCO30.5膨化尿素 Extruded urea0.3預(yù)混料 Premix1)1.3合計(jì) Total100.0營(yíng)養(yǎng)水平 Nutrient levels2)代謝能 ME/(MJ/kg)7.49干物質(zhì) DM56.42粗蛋白質(zhì) CP12.55粗脂肪 EE3.13粗灰分 Ash12.17中性洗滌纖維 NDF49.87酸性洗滌纖維 ADF30.91鈣 Ca0.34總磷 TP0.21
1.3.1 妊娠毒血癥發(fā)病率
試驗(yàn)期間,每日觀察母羊情況,統(tǒng)計(jì)各組妊娠毒血癥發(fā)病數(shù),計(jì)算臨床發(fā)病率、亞臨床發(fā)病率、總發(fā)病率和病死率,計(jì)算公式如下:
亞臨床發(fā)病率(%)=100×亞臨床病例數(shù)/樣本數(shù); 臨床發(fā)病率(%)=100×臨床病例數(shù)/總樣本數(shù);總發(fā)病率(%)=100×總病例數(shù)/樣本數(shù);病死率(%)=100×病死數(shù)/總病例數(shù)。
發(fā)病診斷一方面依據(jù)臨床癥狀,主要表現(xiàn)為精神萎靡不振,臥地不起,食欲下降,排尿量減少,呼出氣體有丙酮?dú)馕?;另一方面則依據(jù)血清中BHBA含量,當(dāng)BHBA含量<2 mmol/L時(shí)羊只健康,2 mmol/L 1.3.2 產(chǎn)羔性能 母羊產(chǎn)羔時(shí)詳細(xì)記錄其產(chǎn)羔狀態(tài)(順產(chǎn)、難產(chǎn)、流產(chǎn)、早產(chǎn)),奶水情況(優(yōu)、良、差)及產(chǎn)羔數(shù)(活羔數(shù)、死羔數(shù)、弱羔數(shù)),其中弱羔定義為出生體重小于2 kg且無(wú)法自然吮吸母乳的羔羊。分別計(jì)算單羔率、雙羔率、多羔率、流產(chǎn)率、早產(chǎn)率、奶水不良率、羔羊出生成活率、弱羔率和產(chǎn)羔率,計(jì)算公式如下: 單羔率(%)=100×產(chǎn)單羔母羊數(shù)/產(chǎn)羔母羊總數(shù); 1.3.3 血清生化指標(biāo) 正式試驗(yàn)第15天早晨對(duì)所有母羊集中空腹采血,而后母羊分娩當(dāng)天和產(chǎn)后第10、20天分3次單獨(dú)采血。血液樣品經(jīng)3 500 r/min離心10 min后分離血清,-20 ℃保存待測(cè)。血清中BHBA含量使用怡成-Ⅱ奶牛酮病快速檢測(cè)儀測(cè)定,其余樣品送至北京瑞格博科技股份有限公司測(cè)定血清GLU、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性,血清三碘甲狀腺原氨基酸(T3)和甲狀腺素(T4)含量采用放射免疫法測(cè)定。 1.3.4 羔羊生長(zhǎng)情況 羔羊出生后上耳標(biāo),記錄其初生重,45日齡斷奶,記錄斷奶重,統(tǒng)計(jì)羔羊存活情況,計(jì)算羔羊平均日增重和斷奶成活率,計(jì)算公式如下: 平均日增重(g/d)=[羔羊斷奶重(g)- 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料如樣本數(shù)以數(shù)值表示,發(fā)病率等則以數(shù)值百分率(計(jì)算公式)表示,計(jì)量資料數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,差異性統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)采用卡方檢驗(yàn)Fisher精確概率法,計(jì)量數(shù)據(jù)采用GLM雙因素方差分析,用Duncan氏法進(jìn)行多重比較,顯著水平為P<0.05。 由表2可知,各組間妊娠毒血癥的亞臨床發(fā)病率、臨床發(fā)病率、病死率均無(wú)顯著差異(P>0.05)。 表2 添加PRC和RPG對(duì)母羊妊娠毒血癥發(fā)病的影響 由表3可知,各組間母羊的早產(chǎn)率、流產(chǎn)率、奶水情況、單羔率、雙羔率和多羔率差異均不顯著(P>0.05)。湖羊多胎性能好,產(chǎn)羔率達(dá)到250.00%以上,各組間羔羊出生成活率和弱羔率差異不顯著(P>0.05),但試驗(yàn)組有提高羔羊斷奶成活率趨勢(shì)(0.10>P>0.05)。 表3 添加PRC和RPG對(duì)母羊產(chǎn)羔性能的影響 由表4可知,試驗(yàn)第15天,發(fā)病母羊血清中BHBA含量顯著高于健康母羊(P<0.05),但血清GLU含量及ALT和AST活性并未表現(xiàn)出顯著變化(P>0.05),根據(jù)觀察,此時(shí)母羊也沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的妊娠毒血癥臨床癥狀。 表4 發(fā)病母羊與健康母羊試驗(yàn)第15天時(shí)血清中BHBA、GLU含量及AST和ALT活性 由表5可見(jiàn),從不同時(shí)間點(diǎn)的結(jié)果來(lái)看,各組中的血清BHBA含量在產(chǎn)前(試驗(yàn)第15天)到分娩當(dāng)天呈升高趨勢(shì),在分娩當(dāng)天達(dá)到峰值,產(chǎn)后10 d時(shí)均降至1.80 mmol/L以下,但僅PRG組血清BHBA含量在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)間差異不顯著(P>0.05);血清中的GLU含量,各組均為產(chǎn)前最低,顯著低于其他時(shí)間點(diǎn)(P<0.05)。 進(jìn)一步從不同組間的雙因素方差分析結(jié)果來(lái)看,在分娩當(dāng)天,添加RPG顯著降低血清中BHBA含量(P<0.05),其他時(shí)間點(diǎn),添加RPC和RPG對(duì)血清BHBA和GLU含量影響均不顯著(P>0.05),添加RPC+RPG對(duì)血清BHBA和GLU含量的影響也無(wú)顯著交互作用(P>0.05)。 由表6可知,從不同時(shí)間點(diǎn)的結(jié)果來(lái)看,各組中母羊在分娩當(dāng)天血清中TP含量最低,顯著低于其余3個(gè)時(shí)間點(diǎn)(P<0.05),產(chǎn)后開(kāi)始逐漸升高;血清中ALB含量,對(duì)照組和RPC組在各時(shí)間點(diǎn)的差異不顯著(P>0.05),RPG組產(chǎn)后10 d最低,顯著低于其他時(shí)間點(diǎn)(P<0.05),RPC+RPG組分娩當(dāng)天最低,顯著低于產(chǎn)前和產(chǎn)后20 d(P<0.05)。從不同組間的雙因素方差分析結(jié)果來(lái)看,在母羊分娩當(dāng)天,與對(duì)照組相比,添加PRC和PRG均顯著提高了血清中TP含量(P<0.05),添加RPC還顯著降低了血清中ALB含量(P<0.05),產(chǎn)后20 d時(shí),添加RPC顯著降低了血清中的TP含量(P<0.05),其他時(shí)間點(diǎn),各組間的差異均不顯著(P>0.05);添加RPC+RPG對(duì)血清TP和ALB含量影響也無(wú)顯著交互作用(P>0.05)。 表5 添加PRC和PRG對(duì)母羊血清中BHBA和GLU含量的影響 表6 添加PRC和PRG對(duì)母羊血清中TP和ALB含量的影響 由表7可知,從不同時(shí)間點(diǎn)的結(jié)果來(lái)看,對(duì)照組在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)血清中的T3和T4含量差異均不顯著(P>0.05),而3個(gè)試驗(yàn)組產(chǎn)前的血清T3含量均顯著高于產(chǎn)后10 d(P<0.05),血清T4含量產(chǎn)后10 d時(shí)均顯著高于產(chǎn)前(P<0.05),RPG組分娩當(dāng)天和產(chǎn)后10 d時(shí)血清中ALT活性顯著低于產(chǎn)前(P<0.05),4組的血清AST活性均在產(chǎn)后10 d達(dá)到最高,顯著高于產(chǎn)前(P<0.05)。 從不同組間的雙因素方差分析結(jié)果來(lái)看,添加RPC顯著提高分娩當(dāng)天母羊血清中T3含量(P<0.05),還顯著提高分娩當(dāng)天和產(chǎn)后20 d血清ALT活性(P<0.05),添加RPG顯著提高母羊產(chǎn)后10 d血清T4含量(P<0.05),對(duì)其他指標(biāo)的影響不顯著(P>0.05);添加RPC+PRG對(duì)血清T3和T4含量及ALT和AST活性無(wú)顯著交互作用(P>0.05)。 表7 添加PRC和PRG對(duì)母羊血清中T3和T4含量和AST和ALT活性的影響 由表8可見(jiàn),RPC+RPG組初生重顯著高于其他組(P<0.05);對(duì)照組斷奶重和平均日增重顯著高于其他組(P<0.05),這主要由于對(duì)照組羔羊斷奶存活率低,羔羊死亡數(shù)多導(dǎo)致。添加RPC和RPG對(duì)羔羊初生重均有顯著影響(P<0.05),有效提高了羔羊初生重,但兩者間交互作用不顯著(P>0.05)。 表8 添加PRC和PRG對(duì)羔羊初生重和平均日增重的影響 奶牛酮病診斷通常以血清BHBA和NEFA含量顯著升高,GLU含量顯著降低為依據(jù)[18]。妊娠毒血癥的嚴(yán)重程度會(huì)導(dǎo)致血清生化指標(biāo)發(fā)生變化[19]。當(dāng)母羊表現(xiàn)出臨床癥狀時(shí),往往已是晚期,治療效果差,因此早期診斷至關(guān)重要。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)開(kāi)始第15天,生病母羊還未表現(xiàn)出臨床癥狀時(shí),其血清中BHBA含量已顯著高于健康母羊,達(dá)到4.40 mmol/L,遠(yuǎn)高于3 mmol/L臨界值[20],而血清AST和ALT活性此時(shí)差異并不顯著,很容易被忽視,因此,我們認(rèn)為羊妊娠毒血癥早期診斷應(yīng)以血清BHBA含量顯著增高為主要特征。 血清BHBA和GLU含量直接反映了母羊的體脂動(dòng)員和能量狀況。本試驗(yàn)中,母羊分娩前血清中BHBA含量不斷升高,分娩當(dāng)天達(dá)到峰值,產(chǎn)前血糖值也一直低于正常水平(3.33~4.99 mmol/L)[1],說(shuō)明臨產(chǎn)前母羊身體負(fù)擔(dān)很重,處于能量負(fù)平衡狀態(tài),GLU供給量小于需求量,血液中GLU含量下降,此時(shí)母羊動(dòng)用體脂供能,大量游離脂肪酸進(jìn)入血液,使得血液中NEFA含量升高,肝臟內(nèi)糖的缺乏使得脂肪酸β-氧化過(guò)程增強(qiáng),乙酰輔酶A的生成量增加,進(jìn)而血清BHBA含量升高。RPG組母羊分娩當(dāng)天血清BHBA含量顯著降低,這對(duì)于緩解母羊能量負(fù)平衡十分關(guān)鍵,說(shuō)明RPG添加起到了補(bǔ)糖的效果,減少了脂肪動(dòng)用,避免了過(guò)量酮體產(chǎn)生,但從提升血糖效果來(lái)看并不顯著,這可能與RPG添加時(shí)間短或添加量偏低有關(guān)。除此之外,RPG添加還顯著提高了分娩當(dāng)天母羊血清中TP含量,說(shuō)明蛋白質(zhì)利用效率得到提高,血清T4含量產(chǎn)后10 d也顯著高于其他組,T4可以刺激細(xì)胞內(nèi)氧氣消耗和熱量產(chǎn)生,從而提高基礎(chǔ)代謝率,增加GLU利用率并改變脂質(zhì)代謝[21],說(shuō)明母羊產(chǎn)后機(jī)體代謝加強(qiáng)。Wang等[22]通過(guò)代謝組學(xué)分析了RPG對(duì)泌乳早期奶牛代謝的影響,發(fā)現(xiàn)RPG主要是通過(guò)減少脂肪動(dòng)用來(lái)改善能量平衡,與本試驗(yàn)結(jié)果一致。李妍等[23]研究發(fā)現(xiàn),奶牛飼糧中200和400 g/d RPG均可以提高血液中GLU含量,降低酮體水平,改善能量負(fù)平衡,本試驗(yàn)中RPG添加量設(shè)計(jì)偏低,最初主要是考慮到經(jīng)濟(jì)可行性,未來(lái)研究中將就其最適宜添加量開(kāi)展進(jìn)一步研究。 RPC添加對(duì)血清GLU和BHBA含量影響均不顯著,表明它并沒(méi)有改變圍產(chǎn)期母羊能量負(fù)平衡狀態(tài),這點(diǎn)與張凡建等[24]對(duì)圍產(chǎn)期奶牛產(chǎn)前添加RPC的結(jié)果一致。Humer等[12]通過(guò)評(píng)估2018年以前發(fā)表的數(shù)據(jù)得出,RPC對(duì)奶牛產(chǎn)后干物質(zhì)采食量有積極影響,但它并不會(huì)改善奶牛能量負(fù)平衡和代謝情況,也證明了這一點(diǎn)。但從張凡建[24]的研究結(jié)果來(lái)看RPC仍顯著提高了母牛泌乳量同時(shí)改善了肝臟功能,有關(guān)RPC補(bǔ)充對(duì)能量負(fù)平衡改善的研究大都集中在奶牛,奶牛上添加量有15[25]、30 g/d[24],但圍產(chǎn)期母羊的適宜添加量暫無(wú)參考值,從本試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,3 g/d的RPC添加對(duì)肝臟功能指標(biāo)血清ALT和AST活性的改善效果并不好,而孫菲菲[25]研究卻發(fā)現(xiàn),圍產(chǎn)期奶牛添加RPC可以調(diào)控肝細(xì)胞能量和脂質(zhì)代謝,緩解能量負(fù)平衡,降低血清中NEFA和BHBA含量,改善肝臟功能。這可能與飼糧組成、RPC添加時(shí)間、添加水平和試驗(yàn)動(dòng)物品種有關(guān)。 有關(guān)RPC和RPG組合添加研究較少,本試驗(yàn)中未觀察到RPC和RPG對(duì)母羊血清生化指標(biāo)的顯著交互效應(yīng)。劉春海等[13]分析了過(guò)瘤胃組合物(25 g RPG+3 g RPC+15 g過(guò)瘤胃賴氨酸+5 g過(guò)瘤胃蛋氨酸)對(duì)絨山羊血清生化指標(biāo)的影響,發(fā)現(xiàn)RPG對(duì)血清BHBA含量影響較大,而組合物對(duì)其影響較小,這點(diǎn)與本試驗(yàn)結(jié)果一致,但其緩解圍產(chǎn)期GLU供能不足,單純添加RPG效果不如組合物效果好,與其組合物中還額外補(bǔ)充了賴氨酸和蛋氨酸也有關(guān)系。 本試驗(yàn)中,PRC和PRG添加對(duì)降低妊娠毒血癥、改善母羊流產(chǎn)、早產(chǎn)和奶水情況效果并不顯著,但從羔羊存活情況來(lái)看,試驗(yàn)組均表現(xiàn)出較好的正面效應(yīng),RPC和RPG添加提高了羔羊斷奶成活率,RPG組效果最好,除此之外,它們的添加還顯著提高了羔羊初生重,PRC+RPG組最佳。研究指出,飼喂RPG可以顯著提高產(chǎn)奶量,有利于促進(jìn)奶牛產(chǎn)后泌乳,而且RPG對(duì)為奶牛提供大量外源性GLU,改善奶牛能量負(fù)平衡,節(jié)約生糖氨基酸,還可以促進(jìn)乳蛋白合成,有助于提高母乳中乳蛋白水平[23],這可能是RPG組羔羊斷奶成活率高的原因之一。妊娠后期母體營(yíng)養(yǎng)變化可以對(duì)子代產(chǎn)生永久性影響,改變后代生長(zhǎng)性能[26],羔羊初生重增加也進(jìn)一步佐證了RPG添加對(duì)母羊圍產(chǎn)期的能量負(fù)平衡的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控有作用,但其適宜添加量還有待進(jìn)一步研究。 母羊圍產(chǎn)期(產(chǎn)前30 d到產(chǎn)后20 d)飼糧中添加15 g/(d·頭) RPG有助于降低血清中BHBA含量,減少脂肪動(dòng)員,緩解能量負(fù)平衡,而3 g/(d·頭) RPC添加效果不顯著,但添加RPC和RPG均可以提升羔羊斷奶成活率,提高羔羊初生重。
雙羔率(%)=100×產(chǎn)雙羔母羊數(shù)/產(chǎn)羔母羊總數(shù);
多羔率(%)=100×產(chǎn)多羔母羊數(shù)/產(chǎn)羔母羊總數(shù);
流產(chǎn)率(%)=100×流產(chǎn)母羊數(shù)/產(chǎn)羔母羊總數(shù);
早產(chǎn)率(%)=100×早產(chǎn)母羊數(shù)/產(chǎn)羔母羊總數(shù);
奶水不良率(%)=100×奶水不足母羊數(shù)/
產(chǎn)羔母羊總數(shù);
產(chǎn)羔率(%)=100×產(chǎn)羔總數(shù)/產(chǎn)羔母羊總數(shù);
羔羊出生成活率(%)=100×活羔數(shù)/產(chǎn)羔總數(shù);
弱羔率(%)=100×弱羔數(shù)/產(chǎn)羔總數(shù)。
羔羊初生重(g)]/45;
斷奶成活率(%)=100×羔羊斷奶成活數(shù)/活羔數(shù)。1.4 統(tǒng)計(jì)與分析
2 結(jié)果與分析
2.1 添加RPC和RPG對(duì)母羊妊娠毒血癥發(fā)病情況影響
2.2 添加RPC和RPG對(duì)母羊產(chǎn)羔性能的影響
2.3 添加RPC和RPG對(duì)母羊血清生化指標(biāo)的影響
2.4 添加RPC和RPG對(duì)羔羊生長(zhǎng)性能的影響
3 討 論
3.1 湖羊母羊圍產(chǎn)期妊娠毒血癥早期診斷
3.2 添加RPC和RPG對(duì)母羊血清生化指標(biāo)的影響
3.3 添加RPC和RPG對(duì)圍產(chǎn)母羊產(chǎn)羔和羔羊生長(zhǎng)的影響
4 結(jié) 論