黃象娟，黃象艷

1 山東醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校濟(jì)南校區(qū)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系，濟(jì)南 250002；2 解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九六〇醫(yī)院輸血醫(yī)學(xué)科

新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）的持續(xù)大流行不僅引發(fā)了全球衛(wèi)生緊急情況，而且對(duì)經(jīng)濟(jì)、公共衛(wèi)生等方面帶來(lái)了挑戰(zhàn)。在這場(chǎng)危機(jī)中，我國(guó)和世界各地的科學(xué)家以及研究人員不斷努力，以各種可能的方式遏制這種疾病，包括疫苗接種、治療和診斷。為了控制COVID-19 的傳播，準(zhǔn)確有效的早期診斷至關(guān)重要［1］。臨床診斷COVID-19 時(shí)，除了依據(jù)流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)和計(jì)算機(jī)斷層掃描（CT）結(jié)果外，最重要的是通過(guò)新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行確診，包括核酸檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)［2］。無(wú)癥狀攜帶者的不斷增加，進(jìn)一步說(shuō)明了只有對(duì)人群中病毒攜帶者進(jìn)行正確檢測(cè)才能對(duì)抗病毒的快速傳播，快速準(zhǔn)確的病毒檢測(cè)對(duì)于控制和預(yù)防COVID-19 具有重要作用。SARS-CoV-2 的檢測(cè)方法主要分為分子生物學(xué)方法和免疫學(xué)方法兩大類(lèi)。分子生物學(xué)方法是基于SARS-CoV-2 RNA 的檢測(cè)方法，在正確的時(shí)間從準(zhǔn)確的部位收集標(biāo)本對(duì)于分子生物學(xué)方法檢測(cè)至關(guān)重要。免疫學(xué)方法可以檢測(cè)呼吸道分泌物中的病毒抗原，也可以檢測(cè)血液中的抗體。便攜式病原體快速檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快的特點(diǎn)，也在迅速發(fā)展［3］。各種SARS-CoV-2 檢測(cè)方法可根據(jù)需求應(yīng)用于不同的場(chǎng)景［4］，包括無(wú)癥狀人群篩查、有針對(duì)性的高危人群篩查、接觸者調(diào)查、臨床診斷、疾病嚴(yán)重程度監(jiān)測(cè)、傳染性監(jiān)測(cè)和回顧性全人群篩查。本研究對(duì)SARS-CoV-2 檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用情況進(jìn)行綜述，為不同檢測(cè)目的和需求下選擇合適的檢測(cè)技術(shù)和標(biāo)本類(lèi)型提供參考，從而有效管理COVID-19病例并限制病毒進(jìn)一步傳播。

1 分子生物學(xué)方法的應(yīng)用

SARS-CoV-2 的基因組結(jié)構(gòu)包含大約30 kb 的RNA，核酸檢測(cè)是確認(rèn)SARS-CoV-2感染的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室診斷。隨著SARS-CoV-2基因組序列的發(fā)布，形成了包含引物、探針和熱循環(huán)條件的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)推薦方案［5］。核酸擴(kuò)增試驗(yàn)（NAAT）是最靈敏的試驗(yàn)，通常是檢測(cè)早期病毒感染的首選試驗(yàn)。目前已開(kāi)發(fā)不同類(lèi)型的NAAT 方法用于SARS-CoV-2 檢測(cè)，包括逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)（LAMP）技術(shù)、成簇的規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列（CRISPR）技術(shù)和基因測(cè)序技術(shù)［6］，同時(shí)需要注意，NAAT需要高質(zhì)量的病毒RNA［2］。

1.1 RT-PCR 技術(shù)的應(yīng)用 進(jìn)行鼻咽標(biāo)本SARSCoV-2 RNA 檢測(cè)的RT-PCR 技術(shù)廣泛用于病毒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室［3］，從全球角度來(lái)看，這是最流行的金標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)［4，7］。即使是低水平的病毒，這種檢測(cè)也能通過(guò)擴(kuò)增在早期發(fā)現(xiàn)疾病，所以它是最常用和最可靠的檢測(cè)方法，在病毒感染的初始階段很有價(jià)值。基于RT-PCR 技術(shù)的病毒核酸檢測(cè)，是針對(duì)病毒的特定核酸序列進(jìn)行檢測(cè)。病毒基因組存在3個(gè)保守區(qū)域：位于開(kāi)放閱讀框1ab（ORF1ab）中的RNA 依賴RNA 聚合酶（RdRP）基因、核衣殼蛋白（N）基因和包膜蛋白（E）基因［8］。ORF1ab 基因和N 基因常被作為檢測(cè)靶點(diǎn)［9］；與N 基因相比，RdRP 基因和E 基因檢測(cè)限更低、靈敏度更高［8］。另外，檢測(cè)靶位點(diǎn)還包括S 基因和ORF1b 或ORF8 區(qū)域［10］。在RT-PCR 反應(yīng)中檢測(cè)兩個(gè)或多個(gè)基因，可以增強(qiáng)對(duì)真陽(yáng)性的識(shí)別，實(shí)驗(yàn)室通常檢測(cè)2個(gè)靶點(diǎn)，檢測(cè)過(guò)多的靶點(diǎn)用以確認(rèn)結(jié)果是費(fèi)力和費(fèi)時(shí)的。

COVID-19 是一種病毒感染，主要攻擊呼吸道。在正確的時(shí)間從準(zhǔn)確的部位采集標(biāo)本對(duì)于正確的分子生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果至關(guān)重要。標(biāo)本的選擇取決于檢測(cè)場(chǎng)景、臨床特征和疾病階段。一般認(rèn)為上呼吸道和下呼吸道標(biāo)本的病毒檢測(cè)是診斷活動(dòng)性臨床感染的主要手段，標(biāo)本采集對(duì)核酸檢測(cè)結(jié)果影響很大，支氣管肺泡灌洗液、痰液和鼻拭子的檢出率最高［11］。對(duì)于早期感染或無(wú)癥狀的病例，建議使用上呼吸道標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。鼻咽抽吸物（NPA）傳統(tǒng)上被認(rèn)為是診斷呼吸道病毒感染的首選標(biāo)本，在病毒檢測(cè)中的檢出率最高，常應(yīng)用于甲型流感［12］，但是由于在收集NPA 時(shí)存在抽吸過(guò)程，有產(chǎn)生氣溶膠的潛在風(fēng)險(xiǎn)，因此，不建議收集NPA 用于SARS-CoV-2檢測(cè)［5］。鼻咽拭子（NPS）是NPA 的良好替代品，并且比口咽拭子的結(jié)果更可靠［13］。NPS 和口咽拭子現(xiàn)在是診斷COVID-19 活動(dòng)性感染最常用的標(biāo)本類(lèi)型之一［5］。自行采集唾液標(biāo)本的優(yōu)點(diǎn)是不需要衛(wèi)生保健專(zhuān)業(yè)人員采集，尤其是在個(gè)人防護(hù)設(shè)備短缺的情況下，采集唾液標(biāo)本會(huì)減少給醫(yī)護(hù)人員帶來(lái)繼發(fā)感染的風(fēng)險(xiǎn)。研究［5］表明，與鼻咽標(biāo)本相比，自行采集的唾液標(biāo)本的相對(duì)敏感性超過(guò)85%。由于方法和研究設(shè)計(jì)的異質(zhì)性，世界衛(wèi)生組織不建議使用唾液標(biāo)本作為COVID-19 感染臨床診斷的惟一標(biāo)本類(lèi)型［5］。與上呼吸道標(biāo)本相比，下呼吸道標(biāo)本具有更高的病毒載量，更有可能檢出陽(yáng)性結(jié)果［11］，建議在已經(jīng)表現(xiàn)咳嗽的患者、COVID-19病程后期或臨床高度懷疑但上呼吸道標(biāo)本檢測(cè)為陰性的患者中采集下呼吸道標(biāo)本。自發(fā)產(chǎn)生的痰是最容易收集的下呼吸道標(biāo)本；為了防止產(chǎn)生氣溶膠的風(fēng)險(xiǎn)，不推薦誘導(dǎo)痰，避免使醫(yī)護(hù)人員處于危險(xiǎn)之中［5］。嚴(yán)格遵守感染控制指導(dǎo)的前提下，在閉環(huán)機(jī)械通氣和適當(dāng)?shù)沫h(huán)境（例如通風(fēng)良好的負(fù)壓室）中，可從重癥患者身上收集氣管內(nèi)抽吸物和支氣管肺泡灌洗液。在極少數(shù)情況下可以在血漿中檢測(cè)到SARS-CoV-2病毒核酸，可以將其視為重癥至危重癥的標(biāo)志物［14］，但其輔助臨床診斷的作用有限。另外，研究［14］發(fā)現(xiàn)，較大比例的COVID-19 患者糞便中存在SARS-CoV-2病毒，在病情較重的患者中和患病第二周后的概率更高。有研究［15］發(fā)現(xiàn)，肛拭子陽(yáng)性與重癥相關(guān)，可被視為嚴(yán)重疾病的警告指標(biāo)。臨床強(qiáng)烈懷疑COVID-19 但呼吸道標(biāo)本核酸檢測(cè)陰性的患者，也可以考慮采集糞便標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)［5］。

在SARS-CoV-2大規(guī)模人群篩查和監(jiān)測(cè)時(shí)，往往采用混合樣本采集策略［16］?；觳珊突鞕z都是為了提升檢測(cè)效率，一般認(rèn)為混采模式是既可以保證靈敏度又能提高檢測(cè)效率的方式，但混檢會(huì)隨著混樣數(shù)量的增加而降低分析靈敏度。值得注意的是，我國(guó)的研究［17］表明，混采引入的大量人基因組DNA 也會(huì)干擾提取和擴(kuò)增效率，所以混采進(jìn)行核酸檢測(cè)時(shí)應(yīng)注意加大樣本提取體積、選擇性能好的提取試劑和檢測(cè)靈敏度高的擴(kuò)增試劑、選擇大模板量上樣，才能提高檢測(cè)靈敏度和穩(wěn)定性，降低漏檢風(fēng)險(xiǎn)。

采集標(biāo)本的時(shí)間是影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的另一個(gè)因素，因?yàn)椴《据d量在感染后的不同天數(shù)會(huì)有所不同。因此，標(biāo)本在采集時(shí)病毒載量低或采樣過(guò)程不標(biāo)準(zhǔn)會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。懷疑患病而初檢陰性后24～48 h 可考慮復(fù)檢，尤其是有下呼吸道感染證據(jù)時(shí)，可留存下呼吸道標(biāo)本。有研究［5］建議始終謹(jǐn)慎解讀實(shí)驗(yàn)室結(jié)果，當(dāng)遇到檢測(cè)結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符、Ct 值高或熔解曲線異常的弱陽(yáng)性核酸檢測(cè)結(jié)果、來(lái)自兩種不同分析的結(jié)果相互矛盾時(shí)，應(yīng)重新取樣和重新檢測(cè)，尋求參考實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。陰性檢測(cè)結(jié)果不一定排除感染，假陰性結(jié)果可能發(fā)生在分析前步驟（標(biāo)本收集不當(dāng)、采樣不當(dāng)）、分析步驟（PCR抑制、靶點(diǎn)突變）和分析后步驟（轉(zhuǎn)錄錯(cuò)誤）［5］。對(duì)于診斷COVID-19，胸部CT 雖然特異性低，但其高靈敏度有助于糾正從RT-PCR獲得的假陰性結(jié)果，RT-PCR和CT結(jié)合使用將提高靈敏度并提高檢測(cè)效力［18］。

1.2 LAMP技術(shù)的應(yīng)用 LAMP是一種基于PCR的核酸擴(kuò)增，它能夠在等溫條件下非常有效、快速地特異性擴(kuò)增目標(biāo)序列。該方法依賴于使用四或六種不同的引物來(lái)識(shí)別目標(biāo)基因上的特定四或六個(gè)區(qū)域，使用鏈置換DNA 聚合酶在恒溫下延長(zhǎng)鏈，是一種在60～65 ℃下運(yùn)行的快速、高效和高特異性的擴(kuò)增方法。LAMP 循環(huán)反應(yīng)可在15～60 min 左右實(shí)現(xiàn)109～1010倍的目標(biāo)拷貝［19］。這種方法的擴(kuò)增可以在常規(guī)的水浴/加熱模塊中進(jìn)行，并且可以通過(guò)添加熒光染料目視識(shí)別擴(kuò)增產(chǎn)物。由于SARS-CoV-2 是RNA 病毒，因此需要逆轉(zhuǎn)錄LAMP（RT-LAMP）。RT-LAMP 是一種簡(jiǎn)單實(shí)用的技術(shù)，通過(guò)PCR 管中顏色、熒光或濁度的變化來(lái)分析結(jié)果。使用RT-LAMP進(jìn)行SARS-CoV-2檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)是背景信號(hào)少、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)更具特異性，并且不需要熱循環(huán)儀［8］。另一方面，為了獲得最佳檢測(cè)限，RT-LAMP 在設(shè)計(jì)引物、優(yōu)化時(shí)間和溫度等方面還存在挑戰(zhàn)。PARK 等［20］開(kāi)發(fā)了RT-LAMP 方法，用于檢測(cè)SARS-CoV-2 的Nsp3區(qū)域，該技術(shù)可以檢測(cè)到低至100個(gè)拷貝的SARSCoV-2 RNA。YU 等［21］使用6 種靶向ORF1ab 基因的引物進(jìn)行RT-LAMP，發(fā)現(xiàn)每個(gè)反應(yīng)檢測(cè)到SARSCoV-2 RNA 可低至10個(gè)拷貝。由于RT-LAMP 的準(zhǔn)確性也會(huì)受到病毒引物結(jié)合區(qū)域突變的影響，所以在設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避開(kāi)這些突變位點(diǎn)，以提高檢出率。盡管開(kāi)發(fā)了許多基于RT-LAMP的分子技術(shù)，但由于分析中的交叉反應(yīng)性，很少有人將其商業(yè)化［2］。

1.3 CRISPR 技術(shù)的應(yīng)用 CRISPR 作為基因組編輯工具在科學(xué)界廣受歡迎，CRISPR 和CRISPR 相關(guān)的Cas 蛋白具有許多潛在的應(yīng)用，包括糾正遺傳缺陷、治療和預(yù)防疾病傳播。它們?cè)谠\斷應(yīng)用中的潛力正在慢慢顯現(xiàn)［2］。CRISPR 需要引導(dǎo)RNA 結(jié)合目標(biāo)互補(bǔ)序列和核酸酶在精確位點(diǎn)切割。在病毒核酸檢測(cè)時(shí)，稱為向?qū)NA（gRNA）的小RNA 片段將依次與病毒基因的目標(biāo)片段結(jié)合，然后使用特殊的CRISPR 相關(guān)核酸酶，如Cas9、Cas12 或Cas13 來(lái)切割目標(biāo)分子，導(dǎo)致報(bào)告RNA 的裂解，產(chǎn)生檢測(cè)信號(hào)。因此，CRISPR 技術(shù)成為檢測(cè)SARS-CoV-2 的合理候選者。研究人員在CRISPR 系統(tǒng)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)了新穎的診斷方法用于檢測(cè)SARS-CoV-2，包括高靈敏度酶促報(bào)告基因解鎖（SHERLOCK）技術(shù)和DNA核酸內(nèi)切酶靶向CRISPR 反式報(bào)告基因技術(shù)（DETECTR），為病毒感染提供基于CRISPR-Cas13 的快速準(zhǔn)確檢測(cè)分析［22］。SHERLOCK 是一種高特異度和高靈敏度的檢測(cè)方法，因?yàn)镃as13 在目標(biāo)RNA 中有兩個(gè)或多個(gè)錯(cuò)配的情況下不會(huì)被激活，它可以輕松區(qū)分SARS-CoV-2和其他類(lèi)似病毒；該技術(shù)的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)材料可以冷凍干燥運(yùn)輸。應(yīng)用該項(xiàng)技術(shù)也存在挑戰(zhàn)，如反應(yīng)混合物和核苷酸的設(shè)計(jì)、多步核酸擴(kuò)增等［8］。KAMINSKI 等［23］的報(bào)道表明，利用CRISPR技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)在家中、護(hù)理點(diǎn)和現(xiàn)場(chǎng)的準(zhǔn)確檢測(cè)。

1.4 基因測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用 對(duì)感染患者臨床標(biāo)本的二代測(cè)序可以快速識(shí)別SARS-CoV-2。宏基因組測(cè)序方法不僅有助于病原體檢測(cè)，還有助于提供遺傳信息，從而進(jìn)一步促進(jìn)對(duì)病毒進(jìn)化、分子流行病學(xué)和接觸者追蹤的分析。此外，基因測(cè)序使我們能夠評(píng)估SARS-CoV-2的基因突變率，該信息對(duì)于確定抗病毒治療效果和疫苗免疫效力非常有用［2］。

2 免疫學(xué)方法的應(yīng)用

在許多情況下，通常需要不止一種檢測(cè)來(lái)確認(rèn)疾病，免疫學(xué)方法是分子生物學(xué)方法的有效補(bǔ)充。盡管RT-PCR 技術(shù)是檢測(cè)SARS-CoV-2 活躍病例的最成熟技術(shù)，但由于采樣時(shí)間、病毒標(biāo)本處理不當(dāng)?shù)雀鞣N因素也可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果，這些挑戰(zhàn)促進(jìn)了免疫學(xué)方法的開(kāi)發(fā)［2］。研究人員和醫(yī)療公司已經(jīng)研發(fā)了多種SARS-CoV-2免疫測(cè)定法，包括抗原檢測(cè)技術(shù)、抗體檢測(cè)技術(shù)、抗原抗體快速檢測(cè)技術(shù)等，以識(shí)別COVID-19 患者體內(nèi)是否存在相應(yīng)的抗原或抗體。

2.1 抗原檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用 SARS-CoV-2基因組編碼大約27種蛋白質(zhì)，其中結(jié)構(gòu)蛋白包括刺突糖蛋白（S）、膜糖蛋白（M）、包膜蛋白（E）和核衣殼蛋白（N）。S 蛋白已用于SARS-CoV-2 檢測(cè)；N 蛋白約40 kDa，高豐度存在于臨床標(biāo)本中，是檢測(cè)的理想候選者，也是最常選擇的靶標(biāo)［24］?？乖瓩z測(cè)可測(cè)試呼吸道標(biāo)本中是否存在SARS-CoV-2 病毒蛋白。大多數(shù)商品試劑盒需要從鼻腔或鼻咽部采集標(biāo)本，有的還可使用唾液標(biāo)本。檢測(cè)技術(shù)主要利用免疫技術(shù)，如側(cè)流夾心免疫測(cè)定、微流體免疫熒光測(cè)定和色譜數(shù)字免疫測(cè)定［5］。這些測(cè)試套裝通常包括檢測(cè)所需的所有材料，操作簡(jiǎn)單，可用作基于普通實(shí)驗(yàn)室的測(cè)試或即時(shí)檢驗(yàn)（POCT），這種快速診斷測(cè)試可以在15～30 min內(nèi)出結(jié)果。高度敏感和特異的抗原檢測(cè)發(fā)展還存在一些挑戰(zhàn)，第一個(gè)挑戰(zhàn)是選擇正確的抗體［25］，開(kāi)發(fā)成功的抗體不僅需要對(duì)S 蛋白具有高親和力，并且不會(huì)與其他冠狀病毒的S 蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)；第二個(gè)挑戰(zhàn)是信號(hào)強(qiáng)度，與分子生物學(xué)方法不同，抗原檢測(cè)不會(huì)放大目標(biāo)分子，因此與分子生物學(xué)檢測(cè)相比，這些檢測(cè)的靈敏度較低。此外，進(jìn)行這些檢測(cè)的最佳時(shí)間是病毒載量處于最高水平時(shí)?？乖瓩z測(cè)的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，特別是在NAAT 測(cè)試的條件和可操作性有限的情況下以及對(duì)預(yù)計(jì)高病毒載量的患者進(jìn)行測(cè)試時(shí)，可以選擇抗原檢測(cè)［5］。

2.2 抗體檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用 當(dāng)SARS-CoV-2感染發(fā)生后，會(huì)觸發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)抗體。非定量抗體檢測(cè)在流行病學(xué)調(diào)查中可以用于調(diào)查特定人群的發(fā)病率。相比之下，半定量或定量分析可以量化抗體產(chǎn)生水平進(jìn)而檢測(cè)抗體滴度的變化，雖然不是急性感染的首選檢測(cè)方法，但可以在診斷急性感染中發(fā)揮作用?？贵w檢測(cè)分析通常針對(duì)兩種SARS CoV-2 抗原，也就是N 或S 蛋白?；趯?shí)驗(yàn)室的檢測(cè)，通常采用酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)（ELISA）和化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)（CLIA），也可使用側(cè)流免疫測(cè)定法、膠體金或熒光標(biāo)記技術(shù)［5］。COVID-19 患者抗體的血清學(xué)轉(zhuǎn)換取決于癥狀的出現(xiàn)，因此進(jìn)行檢測(cè)的日期是一個(gè)重要因素［1］。ADNAN 等［26］研究顯示，ELISA系統(tǒng)對(duì)Ct 值≤30 并在-80 ℃保存的樣品顯示出較高的靈敏度（92.9%），靈敏度隨Ct 值和保持溫度的增加成比例地降低，而特異性在98.3%～100%。通常在血清學(xué)檢測(cè)中測(cè)定免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）這兩種類(lèi)型的抗體，也可以測(cè)定免疫球蛋白A（IgA）的存在和水平。IgA 主要存在于呼吸道和消化道等黏膜中，也可以在唾液、眼淚、血液、泌尿生殖道和鼻咽中找到［27］。IgM 抗體的存在表明最近有病毒感染，而IgG 抗體表明以前發(fā)生過(guò)SARSCoV-2 感染。因此，免疫分析對(duì)于針對(duì)COVID-19 的疫苗研究非常關(guān)鍵，也有助于確定沒(méi)有活動(dòng)性感染人群的感染程度?？贵w的產(chǎn)生需要幾天到幾周的時(shí)間［5］。IgM 和IgA 的出現(xiàn)早于IgG，COVID-19 患者在癥狀出現(xiàn)5.5 d 后，IgM ELISA 的檢測(cè)效率較高［28］。在一項(xiàng)對(duì)38項(xiàng)研究的系統(tǒng)評(píng)價(jià)中，評(píng)估了出現(xiàn)癥狀后的時(shí)間和抗體檢測(cè)的敏感性之間的關(guān)聯(lián)，發(fā)現(xiàn)IgM 在一周內(nèi)檢出率為23%，兩周內(nèi)檢出率為58%，三周內(nèi)檢出率為75%；相應(yīng)的IgG 檢出率為30%、66%和88%［29］。另 一 研 究［30］表 明，IgG 陽(yáng) 性 率 在16～20 d 時(shí)接近100%?？贵w水平預(yù)計(jì)將在癥狀出現(xiàn)后大約三到四個(gè)星期達(dá)到峰值水平。因此，收集至少相隔14 d的配對(duì)血清進(jìn)行半定量或定量分析可用于診斷近期感染。與輕度或無(wú)癥狀感染者相比，嚴(yán)重疾病者的抗體產(chǎn)生速度更快且水平更高［31］。在急性感染的情況下，可使用相隔2～4 周的配對(duì)血清樣本來(lái)檢測(cè)抗體滴度是否有四倍上升。然而，血清學(xué)檢測(cè)不能作為急性SARS-CoV-2 感染的獨(dú)立診斷方法［5］。目前尚不清楚SARS-CoV-2 特異性抗體在無(wú)癥狀個(gè)體中持續(xù)多久，有的無(wú)癥狀患者可能不發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換，因此，COVID-19 輕癥或無(wú)癥狀感染者中可能無(wú)法檢測(cè)到血清抗體。

2.3 抗原抗體快速檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用 快速檢測(cè)、有效隔離有癥狀的病例以及系統(tǒng)地追蹤密切接觸者對(duì)于遏制SARS-CoV-2 感染的社區(qū)傳播至關(guān)重要，因此，不斷有檢測(cè)SARS-CoV-2的快速試劑被研發(fā)。免疫快速抗原檢測(cè)（RAD）特別適用于即時(shí)檢測(cè)，因?yàn)樗鼈儫o(wú)需設(shè)備即可輕松執(zhí)行和報(bào)告，價(jià)格低廉，并且可以縮短周轉(zhuǎn)時(shí)間。然而，RAD 檢測(cè)靈敏度的研究報(bào)道各不相同，可能與患者臨床特征和年齡、檢測(cè)地點(diǎn)、處理的標(biāo)本類(lèi)型和測(cè)試時(shí)間等不同有關(guān)［32］。許多實(shí)驗(yàn)室報(bào)告了基于側(cè)流免疫層析技術(shù)的血清學(xué)檢測(cè)方法，主要以膠體金為示蹤劑，檢測(cè)患者血清、尿液、口腔液等生物標(biāo)本中的病原體抗原或其特異性抗體［1］。與RT-PCR 技術(shù)不同，抗原抗體快速檢測(cè)技術(shù)在性能和靈敏度方面存在局限性。床旁形式的血清學(xué)檢測(cè)主要用于社區(qū)內(nèi)的監(jiān)測(cè)。然而，對(duì)這些快速測(cè)試的放松管制或?yàn)E用會(huì)在社會(huì)上造成額外的恐慌。

3 其他檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用

近期各種新的檢測(cè)研究不斷被研發(fā)報(bào)道。有研究［33］描述了一種基于涂有His 標(biāo)記的SARS-CoV-2抗原的Ni2+磁性顆粒和96 孔板，用于檢測(cè)人類(lèi)SARS-CoV-2 血清學(xué)轉(zhuǎn)換，是一種超快速、高通量和廉價(jià)的檢測(cè)方法，允許同時(shí)分析96個(gè)樣品并在7 min 內(nèi)提供高精度結(jié)果。基于生物識(shí)別和電化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相結(jié)合的平臺(tái)，即生物電化學(xué)平臺(tái)，為感知和研究SARS-CoV-2 提供了獨(dú)特的機(jī)會(huì)［34］。SHARMA 等［35］的研究揭示了氧化石墨烯釉面雙叉指電容（DIDC）生物傳感平臺(tái)在檢測(cè)SARS-CoV-2 S1蛋白方面具有的前景，可適用于即時(shí)診斷應(yīng)用。

綜上所述，基于核酸和抗原/抗體的檢測(cè)可用于SARS-CoV-2 感染分析。核酸檢測(cè)或抗原檢測(cè)可用于診斷目的，抗體檢測(cè)可用于評(píng)估病毒暴露或人群的血清監(jiān)測(cè)。不同檢測(cè)技術(shù)的靈敏度差異很大。大多數(shù)基于核酸的檢測(cè)使用兩個(gè)基因目標(biāo)，RT-PCR技術(shù)仍然是檢測(cè)SARS-CoV-2 感染的金標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。核酸檢測(cè)的結(jié)果也取決于所使用的標(biāo)本和感染的階段。準(zhǔn)確及時(shí)檢測(cè)SARS-CoV-2，可以有效預(yù)防和管理COVID-19病例并遏制其傳播。