甘誠(chéng)燕 張心慧 王沙 樊瑤羽薇 招雪晴 苑兆和

（南京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院 南方現(xiàn)代林業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心，南京 210037）

SQUAMOSA 啟動(dòng)子結(jié)合類蛋白（SQUAMOSA promoter binding protein-like，SPL）是一類特異存在于植物中的轉(zhuǎn)錄因子，在植物生長(zhǎng)發(fā)育中起重要作用［1］。該蛋白含有76 個(gè)氨基酸組成的SBP 結(jié)構(gòu)域，包含2 個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)和1 個(gè)核定位信號(hào)［2］，能夠識(shí)別并結(jié)合SQUAMOSA 啟動(dòng)子，參與花發(fā)育的調(diào)控，能參與調(diào)控植物的開花時(shí)間、成花轉(zhuǎn)變、花序及花柄的發(fā)育以及花器官發(fā)育等生物學(xué)過程［3］。

SPL 是多基因家族，在多種植物中被分離鑒定，AtSPL3、AtSPL2、AtSPL10、AtSPL11可激活花分生組織特異基因LFY、FRUITFULL（FUL）和APETALA1（AP1）的表達(dá)［4］，促進(jìn)花誘導(dǎo)或花分生組織同一性［5］，調(diào)控開花時(shí)間和成花轉(zhuǎn)化。如異源轉(zhuǎn)化葡萄VvSBP11，促使擬南芥提早開花，表明VvSBP11可促進(jìn)葡萄從營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)向生殖生長(zhǎng)轉(zhuǎn)變［6］；與擬南芥類似，當(dāng)沉默金魚草AmSBP1會(huì)延遲開花時(shí)間［7］；在煙草中過量表達(dá)NtSPL3可以促進(jìn)煙草早開花［8］。

石榴（Punica granatumL.） 是千屈菜科（Lythraceae）石榴屬（Punica）的落葉小喬木［9］，栽培范圍廣泛，是集生態(tài)、經(jīng)濟(jì)價(jià)值于一體的優(yōu)良樹種［10］。隨著國(guó)家鄉(xiāng)村振興策略發(fā)展，石榴產(chǎn)業(yè)欣欣向榮，成為脫貧攻堅(jiān)、特色小鎮(zhèn)建設(shè)等的良好選擇，因此，近年來我國(guó)石榴發(fā)展面積不斷壯大。根據(jù)花器官構(gòu)造的不同，Wetzstein 等［11］將石榴花分為兩性花（完全花）和功能性雄花（不完全花）兩種類型，完全花雌蕊正常發(fā)育，最后形成果實(shí)；不完全花不能受精結(jié)實(shí)，最后脫落［12］。石榴在生長(zhǎng)發(fā)育過程中花期長(zhǎng)、花量大，但因雌蕊敗育、落果現(xiàn)象嚴(yán)重，自然坐果率低。研究發(fā)現(xiàn)影響石榴產(chǎn)量的因素主要是冬春季的凍害和花期連陰雨［13］，仲春是石榴第三批花芽分化的高峰期［14］，寒冷天氣會(huì)使花芽?jī)?nèi)部組織發(fā)育不正常，影響花芽分化［15］，對(duì)于已經(jīng)開放的花，輕者花瓣、花藥、花絲和雌蕊會(huì)變褐變黑，重者則子房變褐［16］，嚴(yán)重影響石榴花的生長(zhǎng)發(fā)育。且石榴花期正值春夏之交，大多年份都會(huì)出現(xiàn)10 d 左右的連陰雨，花粉容易受到雨水沖刷，加上光照不足，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)積累不足，花芽分化質(zhì)量差，授粉不良［17］，導(dǎo)致其經(jīng)濟(jì)效益得不到提高，影響生產(chǎn)發(fā)展。因此，通過噴施生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑延遲花期避開自然災(zāi)害的措施，對(duì)石榴花發(fā)育的影響具有重要意義［18］。

前人研究已證實(shí)SPL 轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控開花時(shí)間和成花轉(zhuǎn)變中有重要作用，但在石榴花發(fā)育中是否有作用還未被闡明。

本研究以‘突尼斯’軟籽石榴為試材，采用同源克隆基因技術(shù)從石榴葉片、籽粒、花和果皮的混合樣品中分離出PgSPL2，并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，通過過表達(dá)擬南芥驗(yàn)證PgSPL2對(duì)花發(fā)育的影響，對(duì)石榴花進(jìn)行不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑噴施處理后分析該基因的表達(dá)特性以探究，為進(jìn)一步研究石榴花發(fā)育的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試驗(yàn)材料為種植于江蘇省南京市六合區(qū)虎崗石榴園的‘突尼斯’軟籽石榴。選擇樹勢(shì)一致，生長(zhǎng)狀態(tài)良好的石榴樹作為試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)株。選取多效唑（PP333）、6-芐氨基嘌呤（6-BA）和吲哚丁酸（IBA）3 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑以及清水作為對(duì)照組（CK）進(jìn)行噴施至葉面滴水，每個(gè)處理噴施9 株，3 株用于采樣，3 株用于統(tǒng)計(jì)。處理時(shí)保證各處理植株間的相對(duì)距離，以盡量排除相互之間的影響。分別于2021年4月20日（春季展葉期）、5月15日（始花期至盛花期）、5月30日（盛花期末）進(jìn)行單株處理，自5月10日起每7 d 采集不同發(fā)育階段的完全花與不完全花，參照陳利娜［19］對(duì)石榴花形態(tài)及胚胎學(xué)差異的研究，按照花蕾縱徑的大小分為3 個(gè)階段（圖1），P1：花蕾縱徑3.0-5.0 mm；P2：花蕾縱徑5.1-13.0 mm；P3：花蕾縱徑13.1-25.0 mm，以及完全花相對(duì)應(yīng)的時(shí)期，以清水組（CK）為對(duì)照，液氮處理后-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

圖1 石榴不同發(fā)育階段的不完全花（a）與完全花（b）Fig.1 Incomplete（a）and complete（b）flowers at different developmental stages of pomegranate（Punica granatum L.）

1.2 方法

1.2.1 生物信息學(xué)分析 使用FGENESH 在線工具（http://www.softberry.com/）預(yù)測(cè)PgSPL2的基因結(jié)構(gòu)與氨基酸序列。使用在線工具ProtParam（https://web.expasy.org/protparam/）分析序列基本特性。利用在線工具Plant-mPLoc（http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/plant-multi/）預(yù)測(cè)其亞細(xì)胞定位。利用Pfam 網(wǎng)站（http://Pfam.sanger.ac.uk/）分析其保守結(jié)構(gòu)域。使用在線工具PlantTFDB（http://planttfdb.gao-lab.org/）下載石榴、擬南芥、葡萄、番茄的基因組序列與gff 文件，使用TBtools 軟件將其翻譯為蛋白序列；使用Pfam 數(shù)據(jù)庫在線工具（http://pfam.xfam.org/）下載SBP（PF03110）保守結(jié)構(gòu)域隱馬可夫模型文件（SBP.hmm）。基于SBP.hmm 文件，利用HMMER3.0 軟件分別在石榴、擬南芥、葡萄和番茄的蛋白質(zhì)序列文件中搜索包含SBP 結(jié)構(gòu)域的成員；運(yùn)用MEGA7.0 軟件對(duì)序列進(jìn)行進(jìn)化分析并采用最大似然法（maximum likelihood，ML）構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育樹，參數(shù)設(shè)置：Bootstrap method 1 000，其余采用默認(rèn)值；利用Fig tree 軟件美化系統(tǒng)發(fā)育樹；使用DNAMAN 和WebLogo 分別對(duì)氨基酸序列進(jìn)行多序列比對(duì)和可視化。

1.2.2 石榴PgSPL2的克隆 利用總RNA 提取試劑盒提取石榴葉片、籽粒、花和果皮的混合樣品中的總RNA，并合成cDNA 第一鏈，采用Oligo 7.0 軟件設(shè)計(jì)PgSPL2引物（表1）。使用高保真酶擴(kuò)增目的基因，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，回收并送至上海生工測(cè)序，獲得石榴PgSPL2的CDS 序列，利用ExPaSy-Translate 在線工具（https://web.expasy.org/translate/）將其翻譯為氨基酸序列。

1.2.3 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)石榴完全花成花率及花期的影響 采用人工統(tǒng)計(jì)方法，掛牌編號(hào)標(biāo)記的處理植株，記錄花期；于石榴盛花期記錄單株開花數(shù)和完全花數(shù)，計(jì)算完全花比率：

完全花成花率（%）=完全花數(shù)/單株開花數(shù)×100%。

1.2.4 石榴PgSPL2在不同組織中及不同處理?xiàng)l件下的表達(dá)分析 依據(jù)克隆的PgSPL2核酸序列，設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR 引物，并以石榴PgAction為內(nèi)參（表1）。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測(cè)不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理下石榴完全花、不完全花在不同時(shí)期PgSPL2的表達(dá)量，以P1 階段的表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn)；以未處理的石榴新葉、花蕾、嫩莖、果肉的cDNA 為模板，利用RT-qPCR 檢測(cè)PgSPL2在石榴不同組織中的表達(dá)模式，熒光染料為The BioEasy Master Mix Plus（SYBR Green），反應(yīng)程序?yàn)?5℃ 3 min；95℃ 30 s；60℃ 15 s；72℃ 20 s，40 個(gè)循環(huán)。3 次生物學(xué)重復(fù)，使用2-ΔΔCt法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.2.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的擬南芥轉(zhuǎn)化 構(gòu)建帶有GUS 標(biāo)簽的pBI121-GUS-PgSPL2表達(dá)載體（表1），轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌GV3101，按1∶100 的比例將活化后的農(nóng)桿菌接種于50 mL 的LB 液體培養(yǎng)基中，28℃ 210 r/min振蕩培養(yǎng)16 h，然后4 000 r/min 離心10 min，收菌，采用滲透液（0.05% sliwet77+5%蔗糖+1/2 MS 培養(yǎng)基）重懸菌體后，沾花法轉(zhuǎn)化擬南芥。侵染后的擬南芥植株用保鮮袋罩住，每隔一周侵染1 次，共3 次，待收獲時(shí)，收集成熟的擬南芥種子。將第一次侵染后收獲的擬南芥種子消毒后種在1/2 MS 固體培養(yǎng)基上，當(dāng)?shù)谝粚?duì)真葉展開且生根后進(jìn)行移栽（泥炭土∶蛭石∶珍珠巖=3∶2∶1），置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)鑒定，待T1擬南芥植株成熟后進(jìn)行DNA 鑒定，重復(fù)上述步驟，選取T2幼苗種植2-3 周后選擇成活的擬南芥幼苗觀察表型，采集T2種子培養(yǎng)基篩選后選取部分幼苗進(jìn)行GUS 染色，待植株成熟后采集野生型與T3轉(zhuǎn)基因擬南芥的花序與葉片提取RNA、反轉(zhuǎn)錄，進(jìn)行RT-qPCR 熒光定量分析。

表1 基因克隆、功能驗(yàn)證以及特異性表達(dá)分析引物表Table 1 Primers for the gene cloning，functional verification and specific expressions

2 結(jié)果

2.1 石榴PgSPL2生物信息學(xué)分析

對(duì)PgSPL2進(jìn)行理化特性分析，編碼產(chǎn)物分子式為C915H1486N308O301S10，分子量為21 938.35 kD，脂溶指數(shù)為44.85，總平均親水指數(shù)為-1.176，理論等電點(diǎn)（pI）為9.16，不穩(wěn)定系數(shù)為70.9。PlantmPLoc 預(yù)測(cè)其定位于細(xì)胞核上。Pfam 數(shù)據(jù)庫檢索發(fā)現(xiàn)該蛋白具有SBP 保守結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果（圖2）顯示，石榴PgSPL2 與擬南芥AtSPL3、AtSPL4、AtSPL5 聚在同一分支上，表明其親緣關(guān)系較近。將與PgSPL2 同一分支的蛋白進(jìn)行多重比對(duì)，結(jié)果顯示（圖3），PgSPL2 具有高度保守的SBP 結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域由76 個(gè)氨基酸構(gòu)成，包含2 個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)Cys-Cys-Cys-His（C3H）、Cys-Cys-His-Cys（C2HC）和1 個(gè)核定位信號(hào)（NLS）。

圖2 石榴、擬南芥、番茄和葡萄SPL 系統(tǒng)進(jìn)化分析Fig.2 Phylogenetic analysis of SPL proteins in Pomegranate，Arabidopsis，Solanum lycopersicum and Vitis vinifera

圖3 蛋白多重序列比對(duì)Fig.3 Multiple sequence alignment of protein

2.2 石榴PgSPL2的克隆

提取石榴葉片、籽粒、花和果皮混樣組織中的總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，使用PgSPL2的特異引物（表1）進(jìn)行擴(kuò)增，獲得與預(yù)期目標(biāo)片段一致的單一條帶（圖4）。測(cè)序獲得PgSPL2的編碼區(qū)序列，長(zhǎng)度為591 bp，編碼196 個(gè)氨基酸，該基因含有完整的SBP 保守結(jié)構(gòu)域（圖5）。

圖4 石榴PgSPL2 的PCR 擴(kuò)增Fig.4 PCR amplification of PgSPL2 in pomegranate

圖5 PgSPL2 的CDS 序列及其編碼氨基酸序列Fig.5 CDS sequence and deduced amino acid sequence of PgSPL2 gene

2.3 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)石榴完全花成花率及花期的影響

分析不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)石榴花期的影響（表2），結(jié)果顯示，噴施生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑后初花期延遲3-5 d，盛花期延遲2-4 d，花末期提前3-5 d。

表2 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)石榴花期的影響Table 2 Effects of growth regulators on pomegranate flower stage

分析不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)石榴完全花成花率的影響（表3），結(jié)果顯示，噴施生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑后能顯著增加石榴完全花比率。與CK 相比，噴施PP333 后，完全花成花率增加了7.53%；噴施6-BA 后，完全花成花率增加了4.79%；噴施IBA 后，完全花成花率增加了4.40%。

表3 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)石榴完全花成花率的影響Table 3 Effects of growth regulators on complete flowering rate of pomegranate

2.4 石榴不同組織中及不同處理后PgSPL2的表達(dá)分析

采集石榴不同組織進(jìn)行qPCR 檢測(cè)（圖6-A），發(fā)現(xiàn)PgSPL2在各個(gè)組織中均有表達(dá)，在果肉中表達(dá)量最高，其次是花蕾，在葉片和嫩莖中表達(dá)量最低。

PP333 處理后，與對(duì)照CK 相比，不完全花中PgSPL2在P2、P3 階段均上調(diào)，完全花中PgSPL2表達(dá)量均顯著下調(diào)（圖6-B）；6-BA 處理后，不完全花中PgSPL2在P2、P3 階段表達(dá)量差異不大，完全花中，PgSPL2在P2 階段表達(dá)量顯著上調(diào)，P3 階段表達(dá)量顯著下調(diào)（圖6-C）；IBA 處理后，不完全花中PgSPL2在P2、P3 階段均有所上調(diào)，完全花中PgSPL2表達(dá)量均顯著下調(diào)（圖6-D）。

圖6 PgSPL2 在石榴不同組織及不同處理后不同發(fā)育階段的相對(duì)表達(dá)量Fig.6 Relative expressions of PgSPL2 gene in different tissues of pomegranate and at different developmental stages after different treatments

2.5 轉(zhuǎn)基因擬南芥的鑒定

將T0轉(zhuǎn)基因擬南芥種子種植在含卡那霉素的培養(yǎng)基中，能夠正常生根和展出真葉，初步篩出轉(zhuǎn)基因植株（圖7-A）。移栽，待植株成熟后，分別提取T1轉(zhuǎn)基因植株DNA 進(jìn)行檢測(cè)，得到與預(yù)期結(jié)果一致的目的片段（圖7-B），鑒定為陽性單株。繼續(xù)重復(fù)上述步驟，篩選出T2植株（圖7-C），開花期選擇長(zhǎng)勢(shì)一致的野生型對(duì)照及轉(zhuǎn)基因植株（圖7-D）進(jìn)行觀察，與野生型植株相比，發(fā)現(xiàn)過量表達(dá)PgSPL2擬南芥植株蓮座數(shù)、葉片數(shù)和莖粗明顯較弱，并出現(xiàn)早花現(xiàn)象。收集T2轉(zhuǎn)基因擬南芥種子，種植后，進(jìn)行GUS 染色拍照（圖7-E），發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因擬南芥的根和莖上均出現(xiàn)藍(lán)色。為了進(jìn)一步增強(qiáng)基因轉(zhuǎn)化在花中的遺傳穩(wěn)定性，獲得轉(zhuǎn)基因純合株系，繼續(xù)篩選下一代，采取T3轉(zhuǎn)基因擬南芥花序進(jìn)行GUS 染色拍照（圖7-F），發(fā)現(xiàn)PgSPL2轉(zhuǎn)基因擬南芥的花瓣和雄蕊上均出現(xiàn)藍(lán)色。

圖7 PgSPL2 轉(zhuǎn)基因植株的檢測(cè)與表型Fig.7 Detection and performance observation of the PgSPL2 transgenic plants

為進(jìn)一步研究PgSPL2對(duì)花發(fā)育的作用，通過RT-qPCR 分析PgSPL2與其下游相關(guān)基因AtFUL、AtLFY及AtSOC1之間的關(guān)系。結(jié)果（圖8）表明，過表達(dá)轉(zhuǎn)基因植株中，PgSPL2的表達(dá)量在花序、葉中均顯著高于野生型（圖8-A），其下游基因AtFUL、AtLFY及AtSOC1在花序、葉中的表達(dá)量均顯著高于野生型。

圖8 PgSPL2 轉(zhuǎn)基因植株與下游相關(guān)基因的表達(dá)量Fig.8 PgSPL2 transgenic plants and downstream associated gene expressions

3 討論

在植物生長(zhǎng)發(fā)育過程中，越來越多的SPL 轉(zhuǎn)錄因子被挖掘，其在開花時(shí)間調(diào)控過程中是一個(gè)重要的樞紐，SPL 通過激活下游花分生特異組織LFY、FUL和AP1，促進(jìn)開花誘導(dǎo)，促進(jìn)植物營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)向生殖生長(zhǎng)過程的轉(zhuǎn)變［20］。本研究從石榴中分離出一個(gè)與花發(fā)育相關(guān)的SPL 基因PgSPL2。生物信息學(xué)分析表明，PgSPL2 編碼196 個(gè)氨基酸，亞細(xì)胞定位在細(xì)胞核，含有2 個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)和1 個(gè)核定位信號(hào)的SBP 高度保守結(jié)構(gòu)域，第二個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)和核定位信號(hào)有部分重疊區(qū)域，可以引導(dǎo)SBP-box進(jìn)入細(xì)胞核調(diào)控下游基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)［21］。系統(tǒng)發(fā)育樹表明，PgSPL2和擬南芥AtSPL3、AtSPL4、AtSPL5聚成一簇，AtSPL3/AtSPL4/AtSPL5在擬南芥幼年期向成年期的轉(zhuǎn)變中起重要作用，能促進(jìn)花分生組織特異基因的表達(dá)，促使擬南芥提前開花［22］，暗示著PgSPL2與其同源基因可能具有相似的功能。

通過組織特異表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，PgSPL2在石榴不同組織均有表達(dá)，且在花和果肉中表達(dá)量遠(yuǎn)高于葉片與嫩莖，說明其在花果發(fā)育中可能起到非常重要的作用［23］。為了進(jìn)一步說明PgSPL2在成花過程中的作用，本研究分析了石榴不完全花、完全花在不同發(fā)育階段PgSPL2的表達(dá)情況，并用生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑PP333［24］、6-BA［25］、IBA［26］進(jìn)行處理。結(jié)果表明，與對(duì)照相比，石榴初花期、盛花期均有所推遲且完全花比率提高；噴施生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑后，不完全花中PgSPL2含量高于完全花中的含量。這可能是因?yàn)樽鳛閿M南芥AtSPL3/AtSPL4/AtSPL5的同源基因，PgSPL2可能同樣具有促進(jìn)早花這一作用，石榴花芽分化時(shí)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)積累不足，不能及時(shí)供給花芽分化［27］，因此，不完全花中該基因表達(dá)量較高；當(dāng)噴施生長(zhǎng)調(diào)劑后石榴花期延遲，有利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)積累，提供給花的生長(zhǎng)發(fā)育，促進(jìn)雌花的形成［28］，PgSPL2表達(dá)量在完全花生長(zhǎng)后期降低，完全花比率顯著提高。各處理完全花各時(shí)期PgSPL2表達(dá)量都有所降低，除了6-BA 處理下，PgSPL2在完全花敗育關(guān)鍵期含量高于不完全花，這可能由于PgSPL2功能冗余，也可能因?yàn)镾PL 基因家族成員較多，有其他基因進(jìn)一步參與調(diào)節(jié)6-BA 信號(hào)來響應(yīng)花器官發(fā)育。

通過沾花法轉(zhuǎn)化PgSPL2擬南芥植株出現(xiàn)早花現(xiàn)象，表明PgSPL2可能起著調(diào)節(jié)開花時(shí)間的作用。GUS 染色轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗后，在其莖和葉上出現(xiàn)不同程度及范圍的藍(lán)色，轉(zhuǎn)基因擬南芥長(zhǎng)大后，采集花序進(jìn)行GUS 染色，在其花序及雄蕊上出現(xiàn)不同程度及范圍的藍(lán)色，表明PgSPL2在莖、葉和花上具有活性。通過RT-qPCR 分析發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因PgSPL2擬南芥后其花序、葉中基因表達(dá)量顯著高于野生型擬南芥，下游相關(guān)基因AtFUL、AtLFY及AtSOC1表達(dá)量都顯著提高，這可能是因?yàn)镻gSPL2與擬南芥AtSPL3/AtSPL4/AtSPL5是同源基因，LFY是AtSPL3的直接下游靶基因，過量表達(dá)AtSPL3可以顯著提高LFY的表達(dá)水平，AtSPL3/AtSPL4/AtSPL5會(huì)識(shí)別下游的花分生組織關(guān)鍵基因AtAP1、AtFUL、AtLFY啟動(dòng)子區(qū)，調(diào)控這些基因的表達(dá)，從而促進(jìn)擬南芥開花［29］。因此，在石榴生產(chǎn)中可通過噴施生長(zhǎng)調(diào)劑或其他措施，降低PgSPL2的表達(dá)量，延遲花期，使花期避過春季倒春寒和連陰雨，使花芽正常分化，提高石榴的經(jīng)濟(jì)效益。

4 結(jié)論

從‘突尼斯’軟籽石榴中克隆得到了PgSPL2基因，其具有高度保守的SBP 結(jié)構(gòu)域。該基因轉(zhuǎn)化擬南芥后發(fā)現(xiàn)其花序下游調(diào)控基因表達(dá)量顯著提高，使擬南芥提前開花。生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑噴施處理石榴后，花期延遲，花組織中PgSPL2基因表達(dá)量顯著下調(diào)，因此該基因在石榴中參與開花時(shí)間的調(diào)控。