王麗云 孫紅紅 高海旭 夏耀輝 楊武才 昝林森 趙春平

(西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院，楊凌712100)

犢牛出生后，瘤胃和瘤胃微生物區(qū)系逐步發(fā)育，消化機(jī)能還不完善。新生犢牛免疫力低下，發(fā)病率高，特別是腹瀉率高，嚴(yán)重影響了犢牛的生長發(fā)育和成年后的生長性能。在禁抗背景下，如何促進(jìn)哺乳期犢牛生長發(fā)育和健康狀況，降低犢牛疾病發(fā)生率和死亡率，是多數(shù)養(yǎng)殖場最關(guān)注的問題之一。益生菌廣泛存在于動物體消化道、呼吸道和生殖道內(nèi)，被世界衛(wèi)生組織聯(lián)合專家組統(tǒng)一定義為：攝入合適數(shù)量后對宿主健康產(chǎn)生有益作用的活的微生物[1]。益生菌作為新型飼料添加劑越來越多地被應(yīng)用于動物生產(chǎn)中，以提高動物生長發(fā)育，促進(jìn)健康，降低環(huán)境污染，從而提高養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益和促進(jìn)畜牧業(yè)健康發(fā)展。目前已有大量關(guān)于益生菌對犢牛生長性能和健康的研究，但是由于試驗條件、品種選擇、試驗動物個體差異、飼糧組成以及添加益生菌的種類、添加量、品質(zhì)、添加方式等的差異，所得的研究結(jié)果并不一致。例如，一些研究表明，益生菌對犢牛的生長發(fā)育具有顯著提高作用[2]，還可以提高犢牛血清免疫球蛋白G(IgG)含量[3]，促進(jìn)免疫應(yīng)答[4]，減少胃腸道病原體定植[5-6]，抑制犢牛腹瀉[7-8]。而在另一些研究中顯示，添加益生菌對犢牛增重、飼料效率和干物質(zhì)采食量影響不顯著[9-12]。采用傳統(tǒng)的定性文獻(xiàn)分析方法很難準(zhǔn)確地總結(jié)犢牛飼糧中添加益生菌的多個研究，難以明確益生菌對犢牛生長發(fā)育和健康的影響。因此，使用薈萃分析(Meta分析)進(jìn)行系統(tǒng)循證性研究與評價顯得至關(guān)重要。

Meta分析是對相同方向的多個單一原始研究進(jìn)行數(shù)據(jù)合并，增加樣本數(shù)量，同時根據(jù)研究異質(zhì)性來源從不同角度解析效應(yīng)值，從而提高了檢驗效果，獲得更精確的研究結(jié)果，為決策提供更客觀有力的依據(jù)[13]。近年來，Meta分析方法已在畜牧獸醫(yī)研究領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用。已有Meta分析系統(tǒng)評價了益生菌對犢牛的作用效果，但因其選擇的牛品種過于龐雜(包括荷斯坦牛、夏洛萊牛、安格斯牛、雜交牛、秦川牛、韓牛等黃牛以及印度水牛、摩拉水牛等)，飼養(yǎng)條件差異大，研究異質(zhì)性高[14]，或者納入的文獻(xiàn)較早(2012年以前)且數(shù)量偏少(15個研究)[15]，致使不能全面準(zhǔn)確地反映益生菌的應(yīng)用效果。因此，本研究利用Meta分析方法，系統(tǒng)評價益生菌對哺乳期犢牛生長發(fā)育和健康指標(biāo)的影響，同時根據(jù)差異來源進(jìn)行亞組分析，比較不同益生菌組成、不同飼糧組成、不同菌屬的作用效果，以期為益生菌在犢牛生產(chǎn)管理中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

本研究遵循系統(tǒng)評價和元分析(PRISMA)方法，使用系統(tǒng)回顧方法對已發(fā)表文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析[16]。

1.1 檢索策略

因為排除非英文發(fā)表文獻(xiàn)中的數(shù)據(jù)和證據(jù)并不會改變Meta分析的結(jié)論[17]，所以本研究檢索了4個英文數(shù)據(jù)庫：NCBI、Science Direct、Web of Science和Google Scholar。使用的關(guān)鍵詞為：“probiotics”、“probiotic”、“calves”、“calf”，還使用了關(guān)鍵詞“Lactobacillus”、“Bifidobacterium”、“Pediococcus”、“Bacillus”、“Lactococcus”、“Enterococcus”、“Streptococcus”、“Saccharomyces”、“Aspergillus”。檢索時間段為文獻(xiàn)建庫至2021年3月10日。

1.2 文獻(xiàn)篩選標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：1)研究主題為飼喂益生菌對犢牛生長性能影響；2)試驗犢牛健康無?。?)試驗飼糧中無抗生素或其他添加劑；4)試驗犢牛為未斷奶的奶牛；5)研究結(jié)果中包含犢牛生長性狀和血清指標(biāo)數(shù)據(jù)，包括益生菌組和對照組的樣本量、平均值、標(biāo)準(zhǔn)差或標(biāo)準(zhǔn)誤；6)英文發(fā)表。

1.2.2 文獻(xiàn)排除標(biāo)準(zhǔn)

排除標(biāo)準(zhǔn)：1)排除綜述、沒有經(jīng)過同行評議的會議和摘要論文等；2)排除重復(fù)發(fā)表文獻(xiàn)；3)排除病牛試驗研究；4)排除飼糧中含其他添加劑的研究；5)排除試驗結(jié)果數(shù)據(jù)不完整的研究，比如缺失平均值或標(biāo)準(zhǔn)差，或通過換算無法得到相應(yīng)數(shù)據(jù)的研究；6)排除非英文文獻(xiàn)。

1.3 數(shù)據(jù)提取

在數(shù)據(jù)庫中按照關(guān)鍵詞檢索，根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格進(jìn)行篩選。篩選后提取數(shù)據(jù)：作者、發(fā)表年、發(fā)表國家、試驗動物品種、樣本量、試驗動物初始日齡、試驗持續(xù)時間、添加益生菌的種類、飼糧組成、測定指標(biāo)及相應(yīng)數(shù)據(jù)(平均值、標(biāo)準(zhǔn)誤或標(biāo)準(zhǔn)差)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

使用STATA/MP14.0軟件(College Station，TX)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。使用Q統(tǒng)計量和I2評估異質(zhì)性(若I2<25則無異質(zhì)性；若25≤I2<50則為輕度異質(zhì)性；若50≤I2<75則為中度異質(zhì)性；若75≤I2<100則為高度異質(zhì)性)[18]?？紤]犢牛飼養(yǎng)試驗研究內(nèi)部和研究之間的異質(zhì)性，因此本研究選擇隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析[13]。而且隨機(jī)效應(yīng)模型的分析結(jié)果被認(rèn)為比固定效應(yīng)模型更保守[19]。通過使用隨機(jī)效應(yīng)模型來計算合并效應(yīng)量，比較添加益生菌組和對照組之間的2組數(shù)的原始均數(shù)差(raw mean difference, RMD)，RMD的P值小于0.05被認(rèn)為差異顯著，小于0.01被認(rèn)為差異極顯著。

為了探究異質(zhì)性的來源，從益生菌組成(單一菌或復(fù)合菌)、飼糧組成(全乳或代乳料)、不同種屬益生菌(芽孢桿菌屬、酵母屬和乳酸桿菌屬)幾個方面對影響益生菌作用效果的因素進(jìn)行亞組分析。通過漏斗圖評估發(fā)表偏倚，如果存在發(fā)表偏倚，則漏斗圖不對稱[20]。使用STATA中metainf命令進(jìn)行敏感性分析，通過1次排除1項研究，計算剩余研究的效應(yīng)值，評估分析該單一研究是否影響Meta分析結(jié)果[21]。

2 結(jié)果與分析

2.1 納入文獻(xiàn)的基本特征

本研究從4個英文數(shù)據(jù)庫(NCBI、Science Direct、Web of Science和Google Scholar)中共檢索到5 058篇文獻(xiàn)，其他來源文獻(xiàn)2篇。去重后得到3 116篇文獻(xiàn)，根據(jù)制定的篩選標(biāo)準(zhǔn)，最后共有34篇文獻(xiàn)納入后續(xù)的Meta分析中，文獻(xiàn)篩選過程的流程圖見圖1。

納入文獻(xiàn)均為英文發(fā)表，研究對象為哺乳期荷斯坦牛，試驗組和對照組總共1 202頭犢牛，試驗組均在飼糧中添加益生菌，對照組為空白對照組。納入Meta分析的文獻(xiàn)特征如表1。犢牛開始試驗時間在1～28日齡，試驗持續(xù)時間為26～90 d，飼糧組成包括全乳、代乳粉、開食料、脫脂乳和酸化乳等。飼糧中加入的益生菌有單一菌種，也有2個或多個組成的復(fù)合益生菌。共計使用了39種益生菌，其中嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)使用11次，植物乳桿菌(L.plantarium)使用9次，糞腸球菌(E.faecium)和釀酒酵母(S.cerevisiae)各6次，枯草芽孢桿菌(B.subtilis)和干酪乳桿菌(L.casei)各5次，雙歧桿菌(B.bifidum)和鼠李糖乳桿菌(L.rhamnosus)各3次，其余益生菌為1～2次。

圖1 文獻(xiàn)篩選過程的流程圖

2.2 Meta分析結(jié)果

2.2.1 益生菌對犢牛生長性能的影響

飼糧中添加益生菌對犢牛生長性能影響的Meta分析結(jié)果如表2所示。整體來看飼糧中添加益生菌可極顯著提高犢牛的平均日增重(ADG)和體重(BW)(P<0.001)，極顯著降低料重比(F/G)(P<0.001)，但對總干物質(zhì)采食量(TDMI)沒有顯著影響(P>0.05)。

飼喂益生菌犢牛的ADG提高了52.602 g/d(P<0.001，I2=48.0%)，輕度異質(zhì)性，結(jié)果穩(wěn)定可靠。對應(yīng)亞組分析結(jié)果顯示，飼糧中添加單一益生菌組犢牛ADG(RMD=58.657 g/d，P<0.001)比復(fù)合益生菌組的犢牛ADG(RMD=45.236 g/d，P<0.001)增加了29.67%。另外，全乳中添加益生菌犢牛ADG(RMD=59.255 g/d，P<0.001)比代乳粉中添加益生菌的犢牛ADG(RMD=29.879 g/d，P=0.001)提高了98.32%。

表1 納入研究的特征

續(xù)表1序號No.作者Author 出版年P(guān)ublication year國家Country品種Breed日齡Days of age數(shù)量n益生菌Probiotic單一/復(fù)合Single/compound持續(xù)時間Duration time/d飼糧Diets20Khaziakhmetov等[39]2020巴什科爾托斯坦荷斯坦牛720大腸桿菌、嗜酸乳桿菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌、棕色固氮菌、褐球固氮菌、短乳酸桿菌、植物乳桿菌、屎腸球菌復(fù)合83全乳、開食料21Kong等[40]2019中國荷斯坦牛2824熱帶假絲酵母單一53代乳粉、開食料22Morrison等[41]2010英國荷斯坦牛540屎鏈球菌單一84代乳粉23Le等[42]2017澳大利亞荷斯坦牛2824解淀粉芽孢桿菌單一56全乳、開食料24Zhang等[43]2016中國荷斯坦牛716植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌復(fù)合75代乳粉25Zhang等[44]2017中國荷斯坦牛812植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌復(fù)合84代乳粉、開食料26Rychen等[45]2018歐盟荷斯坦牛1280枯草芽孢桿菌單一56代乳粉、開食料27Salazar等[46]2019巴西荷斯坦牛620屎鏈球菌單一54全乳、開食料28Saremi等[47]2003伊朗荷斯坦牛112釀酒酵母單一9029Seifzadeh等[48]2017伊朗荷斯坦牛510植物乳桿菌、保加利亞乳桿菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、兩歧雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌、糞腸球菌、米曲霉、皮托念珠菌復(fù)合60全乳30Strzetelski等[49]1998波蘭荷斯坦牛720嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、植物乳桿菌、糞腸球菌、嗜酸乳桿菌、兩歧雙歧桿菌復(fù)合74代乳粉31Sun等[50]2010中國荷斯坦牛712納豆芽孢桿菌單一全乳32Takemura等[51]2020日本荷斯坦牛2024釀酒酵母單一50全乳33Terré等[52]2015西班牙荷斯坦牛9.5120釀酒酵母單一56代乳粉、開食料34Zhang等[53]2019中國荷斯坦牛1124鼠李糖乳桿菌單一42代乳粉

飼糧中添加益生菌試驗結(jié)束時犢牛BW增加了2.390 kg(P<0.001，I2=8.0%)，異質(zhì)性低。亞組分析結(jié)果顯示，添加單一益生菌犢牛BW(RMD=2.517 kg，P<0.001)比添加復(fù)合益生菌犢牛BW(RMD=2.303 kg，P<0.001)提高了9.29%。全乳中添加益生菌的犢牛BW(RMD=2.518 kg，P<0.001)比飼喂代乳粉犢牛(RMD=1.589 kg，P=0.004)提高了58.46%。

犢牛飼糧中添加益生菌可以使F/G下降0.107(P<0.001，I2=37.4%)，輕度異質(zhì)性。亞組分析結(jié)果顯示，飼喂單一益生菌F/G極顯著下降0.127(P<0.001，I2=56.2%)，而飼喂復(fù)合益生菌F/G有下降的趨勢(RMD=-0.093，P=0.066)。代乳粉中添加益生菌F/G顯著下降0.098(P=0.026)，而全乳中添加益生菌對F/G沒有顯著影響(P=0.108)。

表2 飼糧中添加益生菌對犢牛生長性能影響的Meta分析

2.2.2 益生菌對犢牛血清免疫球蛋白含量和糞便評分的影響

益生菌對犢牛血清中免疫球蛋白含量和糞便評分影響Meta分析結(jié)果如表3所示。飼糧中添加益生菌可顯著提高犢牛血清中IgG含量(P<0.05)，極顯著降低犢牛糞便評分(P<0.001)，但對血清IgA和IgM含量沒有顯著影響(P>0.05)。

雖然飼糧中添加益生菌對于犢牛血清中IgA含量沒有顯著影響(P>0.05)，但是亞組分析結(jié)果顯示，添加復(fù)合益生菌犢牛血清IgA含量極顯著增加(RMD=0.892 g/L，P=0.003，I2=0.0%)；全乳中添加益生菌IgA含量極顯著增加(RMD=0.892 g/L，P=0.003，I2=0.0%)。

飼糧中添加益生菌可顯著提高犢牛血清IgG含量(P=0.028，I2=21.50%)，無異質(zhì)性。亞組分析結(jié)果顯示，添加單一益生菌犢牛血清IgG含量顯著增加(RMD=0.331 g/L，P=0.013，I2=0.0%)；代乳料中添加益生菌有提高血清IgG含量的趨勢(RMD=0.222 g/L，P=0.098，I2=0.0%)。

雖然飼糧中添加益生菌對于犢牛血清中IgM含量沒有顯著影響(P>0.05)，但是亞組分析結(jié)果顯示，添加復(fù)合益生菌犢牛血清IgM含量顯著增加(RMD=0.470 g/L，P=0.049，I2=0.0%)。

此外，飼糧中添加益生菌可以使?fàn)倥＜S便評分極顯著降低0.080(P<0.001，I2=57.0%)，中度異質(zhì)性。亞組分析顯示，飼喂單一益生菌可以極顯著降低糞便評分(RMD=-0.073，P<0.010)，而飼喂復(fù)合益生菌有降低糞便評分的趨勢(P=0.050)。全乳中添加益生菌的犢牛糞便評分(RMD=-0.157，P=0.009)比代乳粉中添加益生菌的犢牛糞便評分(RMD=-0.068，P<0.001)降低了130.88%。

表3 飼糧中添加益生菌對犢牛血清免疫球蛋白含量和糞便評分影響的Meta分析

2.2.3 不同菌屬對犢牛的影響

由于研究之間采用的益生菌種類各異，而且前面各項分析結(jié)果顯示添加單一益生菌對犢牛的生長性能和健康狀況有顯著影響。因此，我們將添加單一益生菌的研究按照益生菌的屬進(jìn)行分類統(tǒng)計，然后進(jìn)行亞組分析。統(tǒng)計結(jié)果顯示，芽孢桿菌屬(Bacillus)、酵母屬(Saccharomyces)和乳酸桿菌屬(Lactobacillus)是單一添加使用頻率最高的3個屬(研究數(shù)量均為16項)。然后對單獨添加這3個屬益生菌研究進(jìn)行Meta亞組分析，結(jié)果如表4所示。犢牛飼糧中添加芽孢桿菌屬可以極顯著提高ADG(RMD=73.523 g/d，P<0.001)，顯著提高BW(RMD=3.097 kg，P=0.029)，極顯著降低F/G(RMD=-0.399，P<0.001)；但是對TDMI沒有顯著影響(P>0.05)。另外，添加乳酸桿菌屬極顯著降低F/G(RMD=-0.151，P<0.001)，有降低糞便評分的趨勢(RMD=-0.076，P=0.072)，有增加血清中IgM含量的趨勢(RMD=0.130 g/L，P=0.082)。此外，添加酵母屬顯著提高了ADG(RMD=50.274g/d，P=0.010)，有降低糞便評分的趨勢(RMD=-0.076，P=0.094)。

表4 飼糧中添加不同菌屬的益生菌對犢牛生長性能影響的Meta分析亞組分析

2.3 敏感性分析

敏感性分析分別顯示每一項研究對整體估計的影響，以此評估研究結(jié)果的穩(wěn)健性或穩(wěn)定性。Meta分析的敏感性分析結(jié)果表明，對于ADG、BW、TDMI、F/G、糞便評分及血清IgA、IgG和IgM含量這8個表型指標(biāo)，沒有一項研究影響每個指標(biāo)的總體效應(yīng)值，在不同的研究中，全局估計穩(wěn)定，表明某個特定的試驗不會改變整體結(jié)果，證實了本研究結(jié)果的統(tǒng)計穩(wěn)定性。

2.4 發(fā)表偏倚評價

圖2為對本研究進(jìn)行發(fā)表偏倚評估的結(jié)果。從圖中可以看出，隨著納入研究的規(guī)模和精度的增加，益生菌的干預(yù)效果的精確度也相應(yīng)增加。對于數(shù)據(jù)量較小表型指標(biāo)的Meta分析，效應(yīng)值廣泛地分布在圖的底部，而對于數(shù)據(jù)量大的表型指標(biāo)的研究，分布將更集中。本結(jié)果顯示，TDMI和F/G的漏斗圖存在一定程度的不對稱性，提示這2項指標(biāo)的Meta分析結(jié)果存在發(fā)表偏倚。其余表型指標(biāo)的評價結(jié)果中代表研究結(jié)果的小圖形較為集中，且無明顯的不對稱性，說明Meta分析納入的研究同質(zhì)性較好，不存在顯著的發(fā)表偏倚，證實了本研究結(jié)果的統(tǒng)計穩(wěn)定性。

3 討 論

犢牛階段的飼養(yǎng)管理對其生長發(fā)育、健康狀況和成年后的生長性能非常關(guān)鍵，因此許多促進(jìn)生長和健康的飼料添加劑被廣泛研究并應(yīng)用在犢牛生產(chǎn)中。其中，益生菌已被廣泛應(yīng)用并發(fā)現(xiàn)可以提高飼料轉(zhuǎn)化率、促進(jìn)犢牛生長性能和健康狀況，但研究結(jié)果并不完全一致，甚至完全相反。因此，本研究以荷斯坦牛為研究對象，納入最新研究文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析，全面系統(tǒng)評價益生菌對犢牛的應(yīng)用效果。

Se(SMD)：標(biāo)準(zhǔn)化均數(shù)差的對數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤 Log standard error of SMD；SMD：標(biāo)準(zhǔn)化均數(shù)差 standardized mean difference；Compound：復(fù)合；Single：單一；Lower CI：置信區(qū)間下限 lower confidence interval；Upper CI：置信區(qū)間上限 upper confidence interval；Pool：合并效應(yīng)值；Funnel plot with pseudo 95% confidence limits：95%置信區(qū)間的漏斗圖。

3.1 益生菌對犢牛生長性能的影響

本次Meta分析表明，飼糧中添加益生菌可以顯著提高犢牛ADG和BW，降低F/G，但對TDMI沒有顯著影響。Frizzo等[30]的Meta分析結(jié)果也顯示添加益生菌可有效提高犢牛的增重和飼料效率。本試驗Meta分析中，飼喂益生菌犢牛的ADG提高了52.602 g/d。Alawneh等[14]對不同品種的牛進(jìn)行亞組分析，結(jié)果顯示使用益生菌荷斯坦牛犢牛的ADG增加了57.10 g/d。另外，本試驗Meta分析中，飼糧中添加益生菌可以使F/G下降0.107，Alawneh等[14]的Meta分析結(jié)果中F/G下降0.13。機(jī)理研究表明，犢牛飼糧中添加益生菌，可以促進(jìn)瘤胃發(fā)育，調(diào)節(jié)瘤胃pH，改變瘤胃發(fā)酵模式，改善胃腸道微生態(tài)平衡，特別是增加瘤胃中分解纖維素的微生物群體，從而提高瘤胃中纖維降解率，進(jìn)而提高犢牛對營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收利用率，從而提高ADG和體重，降低F/G，顯著提高犢牛生長性能[14,54]。

3.2 益生菌對犢牛健康狀況的影響

本試驗Meta分析結(jié)果表明，飼糧中添加益生菌可以顯著提高犢牛血清中IgG含量，與Sun等[55]的研究結(jié)果一致。此外，Alawneh等[14]的Meta分析發(fā)現(xiàn)，添加益生菌犢牛血清中IgG含量提高了75.31 mg/dL，對血清IgA和IgM含量沒有顯著影響。多項研究表明，益生菌可以促進(jìn)免疫器官的生長發(fā)育，還可以刺激免疫細(xì)胞，使其產(chǎn)生不同類型的細(xì)胞因子，從而誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，提高機(jī)體的抗病力[28,56-58]。

糞便評分是生產(chǎn)中用來判斷犢牛腹瀉發(fā)生率和健康狀況的重要指標(biāo)[59]，有研究表明，添加益生菌可以降低犢牛糞便評分[48,60]，減少犢牛發(fā)病率[61]。Lee等[60]發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌和植物乳桿菌聯(lián)合飼喂可以縮短犢牛腹瀉的持續(xù)時間，幫助平衡腸道菌群，預(yù)防犢牛腹瀉。Mohamad等[61]也觀察到在斷奶前添加益生菌對犢牛健康有顯著影響。Alawneh等[14]的Meta分析發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加益生菌有降低犢牛糞便評分的趨勢。本試驗Meta結(jié)果表明，益生菌顯著降低糞便評分，可能是由于益生菌調(diào)整了胃腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)，提升了有益菌的相對豐度。特別是當(dāng)消化道雙歧桿菌和乳酸菌等厭氧菌數(shù)量增多，明顯抑制了大腸桿菌的生長，從而降低腸道及糞便中大腸桿菌的數(shù)量，降低腹瀉率，提高動物的抗病力和健康狀況[14,62]。

3.3 不同菌屬對犢牛的影響

犢牛飼養(yǎng)中常用的芽孢桿菌屬包括枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌等。芽孢桿菌能夠調(diào)節(jié)腸道微生物菌群和pH，促進(jìn)瘤胃纖維降解，該菌還具有產(chǎn)酶特性，能夠?qū)暳现袪I養(yǎng)成分快速降解轉(zhuǎn)化成營養(yǎng)物質(zhì)供機(jī)體利用，從而提高飼料轉(zhuǎn)化率[55]。本試驗Meta分析結(jié)果也證實了犢牛飼糧中添加芽孢桿菌屬可以顯著提高ADG和BW，同時降低F/G。乳酸桿菌屬常用的包括嗜酸性乳桿菌、屎腸球菌和雙歧桿菌等。乳酸菌可以利用碳水化合物，產(chǎn)生乳酸和乙酸等，使腸道pH降低，有效抑制大腸桿菌和沙門氏菌，改善哺乳犢牛胃腸道健康[63]。酵母菌能夠促進(jìn)瘤胃中厭氧的有益菌生長，還可以與犢牛腸道內(nèi)的有益菌協(xié)同作用，抑制大腸桿菌的定植[2]。另外，酵母菌水解產(chǎn)物具有促生長和免疫調(diào)節(jié)作用[54]。對以上3個屬的益生菌作用效果亞組分析結(jié)果顯示，芽孢桿菌屬的促生長效果更好。

3.4 影響益生菌作用效果的因素分析

亞組分析結(jié)果顯示，添加單一益生菌犢牛ADG比復(fù)合益生菌增加了29.67%，BW提高了9.29%(從2.303 kg提高到2.517 kg)。飼喂單一益生菌F/G顯著下降0.127，血清IgG含量增加了0.331 g/L，糞便評分降低了0.073。但是添加復(fù)合益生菌血清IgA含量增加了0.892 g/L，血清IgM含量增加了0.470 g/L。因此，綜合考慮，添加單一菌促進(jìn)犢牛生長發(fā)育和健康的作用效果更明顯。有研究表明，飼喂單一植物乳桿菌可以提高犢牛飼料轉(zhuǎn)化率，而飼喂復(fù)合植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌則沒有顯著影響[43]。還有研究顯示，給犢牛飼喂單一益生菌菌種對ADG和F/G的提高效果要大于復(fù)合益生菌[12,22]，飼喂單一嗜酸乳桿菌對犢牛血清IgG含量的提高幅度也大于嗜酸乳桿菌和植物乳桿菌復(fù)合益生菌的效果[24]。但Frizzo等[30]研究表明，益生菌的飼喂效果與補(bǔ)充單一菌或復(fù)合菌無關(guān)。不同研究的結(jié)論不同甚至矛盾，主要是因為各自研究中采用的菌種的來源、成分、有效含量、使用劑量、添加方法和使用頻次(每天喂1或2次)不同，而且試驗動物、試驗條件和指標(biāo)測定方法等存在差異[54]。因此，本研究結(jié)果也提示在犢牛飼養(yǎng)中，單一菌種混合作為復(fù)合益生菌使用時，各單一成分之間的組成、配合比例、使用數(shù)量、協(xié)調(diào)作用效果等需要進(jìn)一步的研究。

全乳中添加益生菌犢牛血清中IgA含量增加了0.892 g/L。另外全乳中添加益生菌犢牛的ADG(RMD=59.255 g/d)比代乳粉中添加益生菌的犢牛(RMD=29.879 g/d)提高了98.32%，體重提高了58.46%(從1.589 kg提高到2.518 kg)。糞便評分降低了130.88%(從-0.068到-0.157)。因此，全乳中使用益生菌效果優(yōu)于代乳料。這可能是因為不同研究采用的代乳料的營養(yǎng)成分(特別是蛋白質(zhì)和粗纖維水平)、衛(wèi)生指標(biāo)以及飼喂方式、飼喂數(shù)量、溫度等差異造成的[15, 54]。

3.5 本研究的局限性

本研究也存在一定的局限性。首先，我們只選取了經(jīng)過同行評審后發(fā)表的英文文獻(xiàn)，納入文獻(xiàn)數(shù)量明顯減少，但是不影響Meta分析的結(jié)論[17]。其次，針對飼糧中添加益生菌對犢牛影響的研究數(shù)量多，但各研究中添加的益生菌種類和添加水平各異，同時飼糧水平和飼養(yǎng)管理也存在差異，因而可能造成Mate分析結(jié)果有潛在異質(zhì)性。另外，添加某一相同種屬的益生菌研究較少，因此亞組分析納入的研究數(shù)量偏少。

4 結(jié) 論

本試驗對納入的34項研究進(jìn)行Meta分析，結(jié)果穩(wěn)定可靠，表明飼糧中添加益生菌可以顯著提高犢牛的生長性能，包括ADG和BW，降低F/G，還可以提高犢牛免疫性能，降低糞便評分。因此，益生菌在哺乳期犢牛飼養(yǎng)中具有較好的應(yīng)用效果。亞組分析結(jié)果表明，飼喂單一益生菌的效果優(yōu)于飼喂復(fù)合益生菌，添加在全乳中飼喂效果優(yōu)于代乳粉，芽孢桿菌屬、乳酸桿菌屬和酵母屬三者相比，芽孢桿菌屬的效果較好，本研究結(jié)果可為犢牛生產(chǎn)中科學(xué)使用益生菌提供理論參考。