范 雪， 張文杰， 任斐兒， 孫國慶， 馬 健*

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052；2.現(xiàn)代牧業(yè)（合肥）有限公司，安徽合肥 230000）

犢牛是奶牛養(yǎng)殖的未來，這一階段對未來奶牛生產(chǎn)性能的發(fā)揮至關(guān)重要。在現(xiàn)代化奶牛養(yǎng)殖場，為了提高成年奶牛的繁殖性能，同時加快犢牛瘤胃發(fā)育，通常會對犢牛進行早期斷奶（Ma等，2020）。然而犢牛在斷奶期間會經(jīng)歷飼養(yǎng)方式和飼料類型的變化，因此斷奶對犢牛來說是一個應(yīng)激。斷奶應(yīng)激會造成犢牛消化道功能紊亂，導(dǎo)致犢牛易受外界病原菌侵襲，從而增加疾病發(fā)生率，降低生長性能（Meale等，2017）。越來越多的研究證實促進早期瘤胃健康發(fā)育是緩解犢牛斷奶應(yīng)激的有效措施，優(yōu)質(zhì)粗飼料資源對犢牛瘤胃發(fā)育具有重要作用。粗飼料中的結(jié)構(gòu)性碳水化合物，尤其是中性洗滌纖維（NDF）可為瘤胃發(fā)育提供物理刺激，促進犢牛反芻，降低瘤胃上皮角質(zhì)層厚度，有利于瘤胃上皮對揮發(fā)性脂肪酸（VFA）的吸收，提高日糧養(yǎng)分利用率，進而促進犢牛健康發(fā)育（Khan等，2011）。但由于犢牛瘤胃微生物區(qū)系未發(fā)育成熟，對粗飼料的利用能力有限，因此，合理使用粗飼料資源對犢牛生長發(fā)育具有重要意義。

作為禾本科牧草，燕麥干草可溶性碳水化合物含量高，在促進犢牛瘤胃發(fā)育方面發(fā)揮著重要作用。Chen等（2021）研究表明，相比于只飼喂開食料，補飼燕麥干草可提高犢牛平均日增重（ADG）和采食量，降低瘤胃氨態(tài)氮（NH3-N）含量，提高乙酸/丙酸，改善瘤胃發(fā)酵。王坤（2021）試驗同樣證實，飼喂燕麥干草可提高水牛犢牛干物質(zhì)（DM）消化率和瘤胃pH，對采食量無明顯影響，但可提高ADG。目前，燕麥干草是多數(shù)牧場飼養(yǎng)犢牛的粗飼料資源。不同來源的粗飼料會影響反芻動物瘤胃微生物群落，進而對瘤胃發(fā)酵產(chǎn)生影響（Kong等，2010）。此外，不同飼料來源產(chǎn)生的組合效應(yīng)往往會對動物生長具有促進作用，馬健等（2015）研究證實，不同粗飼料組合可提高奶牛干物質(zhì)采食量（DMI），改善瘤胃發(fā)酵。苜蓿和燕麥干草是現(xiàn)代化奶牛養(yǎng)殖場最為常見的粗飼料資源，因此，本試驗在傳統(tǒng)補飼燕麥干草飼喂模式基礎(chǔ)上，探究苜蓿和燕麥干草組合對斷奶犢牛生長性能、瘤胃發(fā)酵、營養(yǎng)物質(zhì)消化率、血清生化及抗氧化指標(biāo)的影響，旨在為斷奶犢牛的健康養(yǎng)殖提供實踐指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 苜蓿干草產(chǎn)自美國，燕麥干草產(chǎn)自澳大利亞，兩種干草的營養(yǎng)水平見表1。開食料組成和營養(yǎng)水平見表2。

表1 燕麥和苜蓿干草營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

表2 開食料組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.2 試驗設(shè)計 選擇30頭年齡（60±5）d和體重（86.17±4.48）kg的健康荷斯坦母犢牛，隨機分為2組，每組15頭。對照組粗飼料為燕麥干草，試驗組粗飼料為燕麥和苜蓿干草（1:1混合）。預(yù)試期5 d，正式試驗60 d。

1.3 飼養(yǎng)管理 犢牛單欄飼養(yǎng)，每天在早08:00和下午17:00飼喂兩次，飼喂量是1.1倍實際需要量，以保證有剩料，自有采食，飼喂前清理掉前一天剩料。干草飼喂量為開食料投喂量的10%，將干草切短后與開食料混合均勻后進行飼喂，試驗期間自由飲水。其他管理模式按牧場常規(guī)方法進行，定期進行消毒，打掃牛舍。

1.4 樣品采集 在正式試驗第1天和60天，晨飼前對所有犢牛進行稱重，計算ADG。每天準(zhǔn)確記錄每頭犢牛的采食量，計算DMI。通過ADG和DMI計算料重比（F/G）。于正試期第60天晨飼前，利用真空采血管通過頸靜脈對所有犢牛進行采血10 mL，3200 r/min離心15 min分離血清分裝入1.5 mL離心管中，保存在-20℃冰箱待測。

在試驗第60天，晨飼后4 h利用胃管式瘤胃液采樣器采集犢牛瘤胃液。棄掉第一次采集瘤胃液，然后收集50 mL于離心管，立即測定pH。隨后用四層紗布過濾，將過濾后樣品裝入10 mL離心管中，保存在-20℃冰箱中待測。自試驗第57天02:00開始，連續(xù)3 d，在同一天每隔6 h通過直腸取樣法采集一次犢牛糞便。依次將第2天的采樣時間提前2 h，3 d共采集12份樣品（Zhao等，2017）。同時連續(xù)3 d收集投料和剩料樣品。將每頭牛的投料、剩料及糞便樣品分別進行混合，再次取樣后保存在-20℃。

1.5 樣品分析

1.5.1 血清指標(biāo) 血清解凍后用于測定血清生化和抗氧化指標(biāo)。生化指標(biāo)：總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球 蛋 白（GLB）、葡 萄 糖（GLU）、尿 素 氮（UN）、甘油三酯（TG）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）?？寡趸笜?biāo)：谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及總抗氧化能力（T-AOC）。生化指標(biāo)利用全自動生化分析儀測定，抗氧化指標(biāo)利用試劑盒（南京建成）法進行測定。

1.5.2 瘤胃發(fā)酵 利用氣相色譜儀測定瘤胃VFA含量；采用堿性次氯酸鈉-苯酚比色法測定NH3-N含量；利用BCA法蛋白定量試劑盒測定微生物蛋白（MCP）含量。

1.5.3 營養(yǎng)物質(zhì)消化率 將收糞期間采集的投料、剩料及糞便樣品在65℃烘箱烘48 h至恒重，其中糞便樣品按總重1/10取樣，每100 g樣品加10 mL濃度為10%的稀硫酸進行固氮。樣品烘干后利用粉碎機進行粉碎過篩用于測定DM、有機物（OM）、CP、粗脂肪（EE）、NDF和ADF含量。DM和EE測定方法分別參考GB/T 6435-2014和GB/T 6438-2007；利用半自動凱氏定氮儀檢測CP含量；使用索氏提取器石油醚浸提法測定EE含量；利用纖維分析儀分析NDF和ADF含量。采用酸不溶灰分（AIA）指示劑法計算營養(yǎng)物質(zhì)消化率（D，%），糞便和飼料樣品的AIA含量測定方法依據(jù)GB/T 23742-2009。計算公式如下：

式中：Ad和Af分別代表日糧和糞便中的AIA含量，%；Nd和Nf分別為日糧和糞便中的某營養(yǎng)物質(zhì)含量，%。

1.6 統(tǒng)計分析 所有試驗數(shù)據(jù)利用Excel進行初步整理，之后利用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行獨立樣本T檢驗分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。P＜0.05視為差異顯著，0.05≤P＜0.10表示有差異顯著的趨勢。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加苜蓿干草對斷奶犢牛生長性能的影響由表3數(shù)據(jù)可知，兩組間犢牛初始體重和末體重差異均不顯著（P＞0.05）。試驗組ADG和DMI顯著高于對照組（P＜0.05），分別提高了5.68%和4.53%，但F/G差異不顯著（P＞0.05）。

表3 添加苜蓿干草對斷奶犢牛生長性能的影響

2.2 添加苜蓿干草對斷奶犢牛瘤胃發(fā)酵的影響從表4可以看出，兩組間犢牛瘤胃pH及總VFA、乙酸、丙酸含量差異不顯著（P＞0.05）。與對照組相比，試驗組犢牛瘤胃NH3-N含量降低了8.54%，MCP和丁酸含量分別提高了10.55%和10.72%（P＜0.05）。此外，試驗組乙酸/丙酸有低于對照組的趨勢（P=0.057）。

表4 添加苜蓿干草對斷奶犢牛瘤胃發(fā)酵的影響

2.3 添加苜蓿干草對斷奶犢牛營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響 由表5可知，相比于對照組，試驗組NDF消化率提高了6.41%（P＜0.05），但DM、OM、CP及EE消化率在兩組間相近（P＞0.05）。此外，與對照組相比，試驗組ADF消化率略高（P=0.071）。

表5 添加苜蓿干草對斷奶犢牛營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響%

2.4 添加苜蓿干草對斷奶犢牛血清生化指標(biāo)的影響 如表6所示，兩組間血清TP、ALB、GLB、ALT、AST及ALP含量無顯著差異（P＞0.05）。試驗組GLU和TG含量顯著高于對照組（P＜0.05），分別提高了5.56%和18.18%，而UN含量顯著低于對照組（P＜0.05），降低了6.76%。

表6 添加苜蓿干草對斷奶犢牛血清生化指標(biāo)的影響

2.5 添加苜蓿干草對斷奶犢牛血清抗氧化指標(biāo)的影響 由表7可以看出，試驗組血清GSH-Px活性比對照組提高了7.17%（P＜0.05）。兩組間SOD和MDA含量無顯著差異（P＞0.05），試驗組T-AOC活性有高于對照組的趨勢（P=0.088）。

表7 添加苜蓿干草對斷奶犢牛血清抗氧化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 添加苜蓿干草對斷奶犢牛生長性能的影響斷奶應(yīng)激會導(dǎo)致犢牛免疫能力降低，使?fàn)倥３霈F(xiàn)腹瀉現(xiàn)象，降低采食量，影響生長發(fā)育。本試驗中，添加苜蓿干草可顯著提高斷奶犢牛DMI和ADG，說明添加苜蓿干草有利于促進斷奶犢牛生長，這對維持犢牛健康來說至關(guān)重要。Hill等（2008）研究報道，不同粗飼料品質(zhì)存在差異，對犢牛生長發(fā)育也會產(chǎn)生不同影響。成年動物研究表明，不同粗飼料組合比單獨飼喂能更好促進肉牛生長，ADG和DMI較高（劉華等，2020）。本試驗的促生長效果可能與粗飼料組合效應(yīng)能提高動物養(yǎng)分利用率有關(guān)。

3.2 添加苜蓿干草對斷奶犢牛瘤胃發(fā)酵的影響瘤胃pH可影響瘤胃微生物的生長和增殖，調(diào)控飼料發(fā)酵過程，正常pH一般為6～7（馮仰廉，2004）。研究發(fā)現(xiàn)，不同粗飼料組合導(dǎo)致瘤胃pH差異顯著（張丹丹等，2021）。本試驗中兩組犢牛瘤胃pH接近，均在正常范圍內(nèi)，本研究結(jié)果與前人研究結(jié)果存在差異的可能原因是動物生長狀態(tài)不同。試驗組瘤胃NH3-N濃度低于對照組，這提示添加苜蓿草可改善斷奶犢牛對NH3-N的利用。NH3-N是合成MCP的主要原料。有趣的是，試驗組MCP含量高于對照組，這與NH3-N結(jié)果相對應(yīng)。這可能是因為粗飼料組合能刺激犢牛瘤胃微生物生長，促進微生物對NH3-N的利用，進而合成更多MCP。

瘤胃VFA是反芻動物的重要能量來源，Schwab等（2002）試驗指出，日糧NDF水平對瘤胃總VFA含量沒有顯著影響，本試驗結(jié)果與其一致。前面提到促進幼齡反芻動物瘤胃健康發(fā)育對提高其生長性能至關(guān)重要，瘤胃發(fā)育與VFA產(chǎn)生密切相關(guān)，尤其是丙酸和丁酸（馮仰廉，2004）。本試驗中，試驗組丁酸含量顯著高于對照組，乙酸/丙酸有低于對照組的趨勢。對反芻動物而言，丁酸是瘤胃上皮的主要能量來源，對其發(fā)育有重要影響，瘤胃中較高的VFA含量，尤其是丁酸含量對瘤胃發(fā)育有積極作用（馮仰廉，2004）。因此，試驗組丁酸含量的增加可能有利于促進斷奶犢牛瘤胃發(fā)育。Demeyer（1981）指出，日糧中NDF水平高時，瘤胃相關(guān)纖維降解菌活性增強，乙酸含量提高，從而導(dǎo)致乙酸/丙酸升高。燕麥干草NDF含量高于苜蓿干草，因此，對照組乙酸/丙酸高于試驗組，這與前人研究結(jié)果一致。

3.3 添加苜蓿干草對斷奶犢牛營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響 研究證實不同粗飼料組合可提高動物對粗纖維利用率。范逸婷等（2021）研究表明，在玉米青貯日糧中添加花生秧，可提高奶牛NDF和ADF消化率。張吉鹍和劉建新（2007）研究了反芻動物秸稈日糧中補飼苜蓿干草的組合效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)補飼苜蓿干草能提高動物消化率。與前人研究結(jié)果一致，本試驗中，添加苜蓿干草可提高犢牛NDF和ADF消化率。通常來說，養(yǎng)分消化率的改善可導(dǎo)致ADG的提高，這與前面ADG數(shù)據(jù)相對應(yīng)。對照組纖維消化率低的原因可能是燕麥干草纖維含量高于苜蓿干草，大量纖維攝入使瘤胃內(nèi)流速加快，纖維在消化道停留時間變短導(dǎo)致其消化率降低（Kendall等，2009）。瘤胃微生物可將日糧養(yǎng)分進行發(fā)酵產(chǎn)生MCP和小肽，這些物質(zhì)易被機體吸收利用，提高養(yǎng)分消化率。瘤胃發(fā)酵結(jié)果表明，添加苜蓿干草可提高犢牛瘤胃MCP含量，可能有助于犢牛消化率的改善。

3.4 添加苜蓿干草對斷奶犢牛血清生化和抗氧化指標(biāo)的影響 血清TP、ALB、GLB、GLU和UN含量是蛋白質(zhì)和能量代謝的重要指標(biāo)，TG可反映脂類代謝。此外，ALT、AST、ALP對肝功能有重要影響，在一定程度可反映肝功能的強弱（Vrankoviác等，2018）。在本試驗中，兩組間TP、ALB、GLB、ALT、AST和ALP含量無明顯差異，表明飼喂不同粗飼料對犢牛器官功能無消極影響。一般來說，GLU是動物的主要能量來源，試驗組GLU濃度顯著高于對照組，這有助于犢牛生長性能發(fā)揮。血清GLU濃度提高說明機體脂肪沉積和蛋白質(zhì)合成代謝增強，試驗組GLU濃度增加可能與較高的DMI有關(guān)，機體內(nèi)能量貯備增加，也可能與肝臟糖異生增強有關(guān)（Stanley等，2002）。血清UN濃度與機體氮沉積及蛋白質(zhì)利用率呈負相關(guān)關(guān)系（張俊瑜等，2020）。本試驗血清UN結(jié)果證實，試驗組犢牛蛋白質(zhì)沉積較高，有利于生長性能提高。此外，試驗組TG含量高于對照組，表明苜蓿干草有助于維持斷奶犢牛脂類代謝，提高脂肪沉積，從而提高ADG。

犢牛由于經(jīng)歷了斷奶應(yīng)激，機體清除自由基能力下降，細胞產(chǎn)生的大量自由基破壞免疫細胞功能，影響犢牛生長。在本試驗中，試驗組GSHPx活性高于對照組，T-AOC活性有高于對照組的趨勢。任春燕等（2020）試驗表明，日糧NDF含量可在一定程度提高犢?？寡趸芰?，這是因為纖維可清除超氧陰離子自由基等，抑制脂類氧化。張藝（2005）研究了苜蓿蛋白的抗氧化能力，研究發(fā)現(xiàn)，苜蓿蛋白可增強機體GSH-Px和SOD活性，降低MDA水平，表明苜蓿蛋白具有抗氧化功能。本試驗結(jié)果表明，添加苜蓿干草可提高斷奶犢?？寡趸芰?，原因可能是苜蓿干草含有的類胡蘿卜素等活性物質(zhì)，被犢牛采食利用后激活了與抗氧化有關(guān)的酶，這對緩解犢牛斷奶應(yīng)激，提高生長性能具有重要作用。

4 結(jié)論

在補飼燕麥干草基礎(chǔ)上，添加苜蓿干草可改善斷奶犢牛瘤胃發(fā)酵，提高纖維消化率，增強機體抗氧化能力，最終提高生長性能。