扎拉嘎，黎 明，滿 達，李云鵬，唐和斯，雙 金*

（1.內(nèi)蒙古圣牧高科牧業(yè)有限公司，呼和浩特 010010；2.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，呼和浩特 010018）

動物生產(chǎn)上普遍飼喂脂肪以增加飼糧能量濃度，進而提高生產(chǎn)性能。最近研究的重點開始轉(zhuǎn)向飼喂更多的特定必需脂肪酸，以改變動物生產(chǎn)性能及其產(chǎn)品的脂肪酸組成，其中值得關(guān)注的是飼喂必需脂肪酸對動物繁殖的可能影響。飼喂必需脂肪酸不僅能夠改善能量平衡，而且還改變了機體脂肪酸成分——生殖激素，尤其是為孕酮（progesterone，P）及雌激素（estradiol，E2）等類固醇類激素提供了基本的分子成分［1］。研究表明，上述反應(yīng)包括但不限于：開始排卵、恢復(fù)周期、改善發(fā)情的可見癥狀、增加卵巢的血流量以促進卵泡的生長。W.F.Marei等［2］研究表明，體外成熟培養(yǎng)液中添加適量的α-亞麻酸（ω-3多不飽和脂肪酸的母體）可促進牛卵母細胞核成熟、提高卵母細胞達到第二次減數(shù)分裂中期階段的比例及受精后的發(fā)育能力及囊胚質(zhì)量，而且α-亞麻酸處理卵丘卵母細胞復(fù)合體（cumulus-oocyte complexes，COCs）后，可促進前列腺素E2（PGE2）的合成。在發(fā)情期內(nèi)PGE2能增加促性腺激素釋放激素（GnRH）的釋放，促進黃體生成激素（LH）和卵泡生成激素（FSH）的分泌；還能調(diào)節(jié)靶細胞對激素的敏感性而影響激素效應(yīng)［1］；PGE2還可促進排卵，同時增強絲裂原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MAPK）的磷酸化水平，揭示α-亞麻酸可能通過影響PGE2的合成，進而激活MAPK信號通路，促進卵母細胞生長［3］，增加卵泡P和E2的分泌［1］。奶牛飼喂高水平ω-3多不飽和脂肪酸（ω-3PUFA）的飼糧，可以增加卵泡液內(nèi)ω-3PUFA組成，提高ω-3PUFA／ω-6PUFA的比例，進而促進卵母細胞的生長［4］。

目前還未見飼糧中添加α-亞麻酸對母羊發(fā)情周期內(nèi)生殖激素含量影響方面的報道。為此，本試驗以母羊為試驗對象，擬通過在其飼糧中添加α-亞麻酸，了解其對母羊生殖激素分泌的影響，為提高母羊生產(chǎn)效益提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 α-亞麻酸的制備

α-亞麻酸，內(nèi)蒙古武川縣所產(chǎn)亞麻籽經(jīng)過80℃炒熟、粉碎，獲取α-亞麻酸含量達到53%的產(chǎn)品。

1.2 試驗動物及分組

2～3歲蒙古羊20只，體重為（40±3）kg，體況良好，來源于內(nèi)蒙古自治區(qū)蘇尼特左旗。將20只羊隨機分為2組，每組10只，組間體重差異不顯著（P＞0.05）。

1.3 試驗設(shè)計

基礎(chǔ)飼糧參照NRC（2007年）標(biāo)準(zhǔn)［5］配制，營養(yǎng)水平進行計算調(diào)整，對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組在基礎(chǔ)飼糧中添加3%α-亞麻酸。試驗期為50 d，其中預(yù)試期5 d，逐漸調(diào)整飼糧；正試期為45 d。飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 飼糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Tab.1 Diet composition and nutritional level（DM basis）

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗?zāi)秆蛉谏犸暎拷M一欄。飼喂方式為每天上午和下午定量飼喂全混合飼糧（TMR）各1次，自由飲水。認(rèn)真觀察母羊采食、反芻情況，發(fā)現(xiàn)異常羊只要查找原因并及時處置，做好記錄。

1.5 樣品的采集與制備

預(yù)試期5 d后，給每只母羊肌內(nèi)注射1 mL氯前列腺烯醇（PG），隔8 d再注射PG 1 mL，6 d后給每只羊安裝陰道栓，11 d后撤陰道栓并肌內(nèi)注射孕馬血清促性腺激素（PMSG）400 IU。每組隨機選取6只母羊，在撤栓前1天及發(fā)情周期第1，10，20天采血，3 500 r／min離心10 min，分離血清，置于-20℃冰箱中保存，待測。

1.6 測定項目

卵泡生成激素（follice-stimulating hormone，F(xiàn)SH）、黃體生成激素（luteinizing-hormone，LH）、雌二醇（E2）、孕酮（P），均用放射免疫分析法測定（試劑盒來自西安寶信生物科技有限公司）。

1.7 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用單因子方差分析（期間）和配對重復(fù)觀察值相等t檢驗（組間），均值的多重比較采用鄧肯氏法。

2 結(jié)果與分析

母羊發(fā)情周期內(nèi)生殖激素含量測定結(jié)果見表2。

2.1 母羊血清中E2含量變化

見表2、圖1。

由表2和圖1可以看出：（1）組間比較。在撤栓前1天和發(fā)情周期第1天母羊血清E2含量試驗組顯著高于對照組（P＜0.05）；而發(fā)情周期第10，20天，試驗組雖然略高于對照組，但組間差異不顯著（P＞0.05）。（2）時間點間比較。隨著時間，試驗組和對照組母羊血清E2含量均呈先降低后略升高的趨勢。與撤栓前相比，對照組和試驗組發(fā)情周期第10，20天母羊血清E2含量顯著和極顯著降低（P＜0.05和P＜0.01）。

圖1 母羊血清中E2含量變化趨勢Fig.1 Changes of serum E2 content in ewe

2.2 母羊血清中P含量變化

見表2、圖2。

由表2和圖2可以看出：（1）組間比較。在撤栓前1天和發(fā)情周期第10天母羊血清P含量試驗組顯著高于對照組（P＜0.05），發(fā)情周期第1，20天組間差異不顯著（P＞0.05）。（2）時間點間比較。隨著時間，試驗組和對照組母羊血清P含量均呈先降低后升高的趨勢。對照組和試驗組發(fā)情周期第20天母羊血清P含量顯著高于撤栓前1天和周期第1天（P＜0.05）。而且發(fā)情周期第10天后母羊血清P含量都處在很高水平。

表2 母羊發(fā)情周期內(nèi)生殖激素含量測定結(jié)果Tab.2 Determination results of reproductive hormone content in ewe during estrus cycle

圖2 母羊血清中P含量變化趨勢Fig.2 Changes of serum P content in ewe

2.3 母羊血清中LH含量變化

見表2、圖3。

由表2和圖3可以看出：（1）組間比較。在撤栓前1天母羊血清LH含量試驗組顯著高于對照組（P＜0.05），其余時間點組間均差異不顯著（P＞0.05）。（2）時間點間比較。隨著時間，試驗組和對照組母羊血清LH含量均呈先降低后升高的趨勢。對照組和試驗組血清LH含量均在撤栓前1天最高，顯著高于發(fā)情周期第10，20天（P＜0.05）。

圖3 母羊血清中LH含量變化趨勢Fig.3 Changes of serum LH content in ewe

2.4 母羊血清中FSH含量變化

見表2、圖4。

圖4 母羊血清中FSH含量變化趨勢Fig.4 Changes of serum FSH content in ewe

由表2和圖4可以看出：（1）組間比較。在撤栓前1天母羊血清FSH含量試驗組顯著高于對照組（P＜0.05），其余時間點組間均差異不顯著（P＞0.05）。（2）時間點間比較。隨著時間，試驗組和對照組母羊血清FSH含量均呈先降低后略升高的趨勢。對照組和試驗組撤栓前1天均最高，顯著高于發(fā)情周期第1，10，20天（P＜0.05）。

3 討論

首先，由母羊血清生殖激素的濃度差異看，添加α-亞麻酸的試驗組均高于對照組。α-亞麻酸是（ω-3PUFA）的母體，在動物體內(nèi)可轉(zhuǎn)化成二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA），但其轉(zhuǎn)化率還要受體內(nèi)ω-6PUFA（母體是亞油酸）的競爭［6］。同時，動物體內(nèi)類二十烷酸的代謝途徑都要依靠ω-3PUFA和ω-6PUFA的平衡來實現(xiàn)［3］。它們在體內(nèi)的平衡對于穩(wěn)定生物膜功能、調(diào)控基因表達、維持細胞因子和脂蛋白平衡及促進生長發(fā)育和免疫等方面都起著重要作用［7］。但過去由于過分強調(diào)了ω-6 PUFA在這種平衡中的作用，又引發(fā)了新的不平衡［8］。如，目前母羊精補料多為玉米-豆粕型配方，其脂肪酸組成中ω-6PUFA組成很高，相反ω-3PUFA組成卻很低。導(dǎo)致母羊飼糧中脂肪酸組成不平衡，影響母羊的繁殖性能。α-亞麻酸和亞油酸是動物卵泡、卵母細胞內(nèi)含量最為豐富的PUFA［3］。S.Matoba等［9］研究表明，牛卵泡液α-亞麻酸含量與卵母細胞發(fā)育能力呈正相關(guān)。還有W.F.Marei等［2］研究表明，體外成熟培養(yǎng)液添加適量的α-亞麻酸促進了牛卵母細胞核成熟，提高了卵母細胞達到第二次減數(shù)分裂中期階段的比例、受精后的發(fā)育能力及囊胚質(zhì)量，而且α-亞麻酸處理卵丘卵母細胞復(fù)合體（cumulus-oocyte complexes，COCs）后，促進了PGE2的合成。在發(fā)情期內(nèi)PGE2能增加促性腺激素釋放激素（GnRH）的釋放，促進LH和FSH的分泌；還能調(diào)節(jié)靶細胞對激素的敏感性而影響激素的效應(yīng)［1］；PGE2還可促進排卵，同時增強MAPK的磷酸化水平，揭示α-亞麻酸可能通過影響PGE2的合成，進而激活MAPK信號通路促進卵母細胞生長［3］。研究還表明，奶牛飼喂高水平ω-3PUFA的飼糧，增加了卵泡液內(nèi)ω-3PUFA組成，提高了ω-3／ω-6PUFA的比例，進而促進了卵母細胞的生長［4］。由此增加了卵泡P和E2的分泌［1］，部分E2進入血液循環(huán)，丘腦下部和腦垂體對E2的低濃度產(chǎn)生反饋，分泌更多的FSH，刺激顆粒細胞，使得E2的分泌持續(xù)增加，最終達到排卵前的峰值，啟動LH分泌，觸發(fā)排卵。

其次，由發(fā)情周期內(nèi)生殖激素濃度的變化看，母羊血清E2濃度的高峰圍繞在撤栓前1天和發(fā)情周期第1天左右的時間段出現(xiàn)，符合母羊排卵前血清E2濃度最高的生理變化規(guī)律；P的濃度由發(fā)情周期第10天左右進入高位態(tài)勢，說明早期胚胎已由囊胚期進入著床并結(jié)束賦植過程，同時卵巢進入黃體期。而血清LH和FSH已完成卵泡成熟與排卵的任務(wù)，隨之進入下降階段。

4 結(jié)論

本試驗結(jié)果表明：母羊清E2含量在撤栓前1天最高，P含量在發(fā)情周期第10天左右進入高位態(tài)勢、之后降低，血清LH和FSH含量也呈降低趨勢；通過在飼糧中添加α-亞麻酸，母羊血清中的生殖激素（包括E2、P、LH和FSH含量）水平均有提高。說明在飼料中補充α-亞麻酸能夠促進母羊繁殖相關(guān)激素的分泌。