穆紅 徐文鑫 楊俊榮

胃癌是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，患者死亡率高居癌癥相關(guān)死亡率的第二位。胃癌的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，其中幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）感染被WTO列為胃癌Ⅰ類致癌因子，其與胃癌的發(fā)生有著最為密切的關(guān)系[1-3]。本文著重研究增殖抗原-67（proliferation maker-67，Ki-67）、胎盤型谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶-π（glutathione-S-transfarase-π，GST-π）、拓 撲 異構(gòu) 酶Ⅱα（topoisomerase Ⅱα，TOPOⅡα） 及 甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉(zhuǎn)移酶（methylguanine-DNA methyltransferase，MGMT）在胃癌組織中的表達(dá)及其與Hp感染的關(guān)系，探索其在胃癌的發(fā)病機(jī)制及與患者預(yù)后方面的意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本文收集南京醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院2016年3月-2021年3月在外檢中遇到的85例胃癌根治手術(shù)切除標(biāo)本，對(duì)患者的臨床資料、腫瘤分化程度、病理分期、Ki-67，GST-π、TOPOⅡα及MGMT在胃癌組織中的表達(dá)狀況等進(jìn)行回顧性研究分析。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①原發(fā)性胃癌；②病理確診為胃癌；③既往未接受過正規(guī)抗Hp感染治療；④術(shù)前均未行放、化療及其他針對(duì)胃癌的治療。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴發(fā)其他惡性腫瘤；②臨床資料不完整。本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

（1）對(duì)石蠟包埋組織切片做常規(guī)HE染色及W-S銀染色法染色顯示Hp。（2）采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)胃癌組織中GST-π、TOPOⅡα、MGMT及Ki-67抗原的表達(dá)，所用試劑均購(gòu)自北京中杉金橋公司，并采用EnVision兩步法進(jìn)行染色。①免疫組化染色陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：在胞質(zhì)或胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，其中無著色為0分，淺黃色為1分，深黃色為2分，棕黃或深褐色為3分。②著色范圍判定標(biāo)準(zhǔn)：無著色為0分，著色范圍＜1/3為1分，著色范圍1/3～2/3為2分，著色范圍＞2/3或彌漫著色為3分。③按照著色強(qiáng)度及著色范圍評(píng)分相加作為免疫組化最終評(píng)判結(jié)果：0分為“-”，2分為“+”，3～4分為“2+”，5～6分為“3+”。Ki-67免疫組化染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：“-”為陽性瘤細(xì)胞數(shù)＜10%，“+”為10%～50%，“2+”為51%～75%，“3+”為76%～90%，“4+”為＞90%。④結(jié)果的判定由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師完成，評(píng)分的平均值為最終得分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 23.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Spearman相關(guān)分析法分析Hp感染與各免疫組化檢測(cè)指標(biāo)表達(dá)的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

85例胃癌患者中，Hp陽性62例（72.9%，Hp陽性組），Hp陰性23例（27.1%，Hp陰性組）。Hp陽性組與Hp陰性組性別、年齡、腫瘤分期及分化程度比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 Hp陽性組與Hp陰性組一般資料比較

2.2 胃癌組織Ki-67表達(dá)情況

85例患者中，Ki-67“-”2例，“+”17例，“2+”38例，“3+”25例，“4+”3例。Hp陽性組胃癌組織Ki-67陽性率（100%，62/62）高于Hp陰性組（91.30%，21/23），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.521，P=0.019）；相關(guān)性分析表明，Ki-67的表達(dá)與Hp感染呈正相關(guān)（r=0.680，P=0.000），見表2。Ki-67在胃癌組織中的表達(dá)分級(jí)，見圖1。

圖1 胃癌組織Ki-67的表達(dá)（免疫組化染色，×400）

表2 兩線胃癌組織Ki-67表達(dá)情況（例）

2.3 胃癌組織GST-π表達(dá)情況

85例患者中，GST-π“-”20例，“+”27例，“2+”28例，“3+”10例。Hp陽性組胃癌組織GST-π表達(dá)陽性率（91.9%，57/62）高于Hp陰性組（34.8%，8/23），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=30.456，P=0.000）；相關(guān)性分析表明，GST-π的表達(dá)與Hp感染呈正相關(guān)（r=0.599，P=0.000），見表3。胃癌組織GST-π表達(dá)分級(jí)，見圖2。

圖2 胃癌組織GST-π的表達(dá)（免疫組化染色，×400）

表3 兩組胃癌組織GST-π表達(dá)情況（例）

2.4 胃癌組織TOPOⅡα表達(dá)情況

85例胃癌患者中，TOPOⅡα“-”1例，“+”18例，“2+”14例，“3+”52例。Hp陽性組胃癌組織TOPOⅡ陽性率（100%，62/62）高于Hp陰性組（95.6%，22/23），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=54.738，P=0.000）；相關(guān)性分析表明，TOPOⅡ表達(dá)與Hp感染呈正相關(guān)（r=0.779，P=0.000），見表4。胃癌組織TOPOⅡ表達(dá)分級(jí)，見圖3。

圖3 胃癌組織TOPOⅡα表達(dá)情況（免疫組化染色，×400）

2.5 胃癌組織MGMT表達(dá)情況

85例胃癌患者中，MGMT“-”7例，“+”26例，“2+”39例，“3+”13例。Hp陽性組胃癌組織MGMT表達(dá)陽性率（96.8%，60/62）高于Hp陰性組（78.2%，18/23），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=16.508，P=0.001）；相關(guān)性分析表明，胃癌組織MGMT表達(dá)與Hp感染呈正相關(guān)（r=0.431，P=0.000），見表5。胃癌組織MGMT表達(dá)分級(jí)，見圖4。

表5 兩組胃癌組織MGMT表達(dá)情況（例）

圖4 胃癌組織MGMT的表達(dá)（免疫組化染色，×400）

3 討論

本文85例胃癌患者中，Hp感染率高達(dá)72.9%，表明其與胃癌的發(fā)生和發(fā)展具有明顯的相關(guān)性[4-6]。Ki-67是一個(gè)能很好地反映細(xì)胞增殖狀況的指標(biāo)[7]，其主要表達(dá)于細(xì)胞核，且只在G1、S、G2期的細(xì)胞中表達(dá)Ki-67[8]。TOPOⅡα主要位于細(xì)胞核的基質(zhì)中，是DNA復(fù)制過程中關(guān)鍵的核酶之一[9]。TOPOⅡα的表達(dá)活性與細(xì)胞周期及細(xì)胞增殖水平相關(guān)[10]，并具有兩個(gè)功能，一是作為檢測(cè)細(xì)胞增殖水平的指標(biāo)，表達(dá)于S-G2/M期細(xì)胞；二是作為某些抗癌藥物的靶點(diǎn)。本文Hp感染陽性組胃癌組織Ki-67和TOPOⅡα陽性率均高于Hp感染陰性組，且兩者表達(dá)均與Hp感染呈正相關(guān)。表明Hp可能通過促進(jìn)細(xì)胞的增殖而促進(jìn)胃癌的發(fā)生和發(fā)展。

谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（glutathione S-transferase，GST）是人體內(nèi)重要的解毒酶，在GST家族中，GST-π占90%以上。GST-π能催化谷胱甘肽（glutathione，GSH）的巰基與各種親核物質(zhì)（化學(xué)致癌物、烷化劑、蒽環(huán)類抗腫瘤藥物）結(jié)合，并以硫醚連接的谷胱甘肽結(jié)合物（無毒）的形式經(jīng)膽汁和尿液排出體外。GST-π表達(dá)增強(qiáng)時(shí)，可通過抑制細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1（apoptosis signalregulating kinase 1，ASK1）和 c-jun 氨基末端激酶 1（c-jun-N-terminal kinase 1，JNK1）來抑制促細(xì)胞分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）通路，從而使JNK1和ASK1等誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡路徑被抑制，并使腫瘤細(xì)胞內(nèi)化療藥物潴留量明顯減少，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生一定的耐藥性[11]。GST-π在減少機(jī)體氧化應(yīng)激，清除體內(nèi)的氧自由基，穩(wěn)定生物遺傳物質(zhì)，清除機(jī)體毒性產(chǎn)物、保護(hù)細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性及調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化中起著重要的作用。本研究結(jié)果顯示，Hp陽性組胃癌組織GST-π表達(dá)陽性率高于Hp陰性組，且表達(dá)強(qiáng)度與Hp感染呈正相關(guān)，反映了腫瘤耐藥性的增加。Hp感染能破壞胃黏膜的屏障功能，可能引起了機(jī)體的反饋調(diào)節(jié)，使GST-π表達(dá)增強(qiáng)，從而有利于保護(hù)胃黏膜免受Hp的侵害[12]。

人體具有多種DNA修復(fù)系統(tǒng)（DNA repair system），其中最主要的修復(fù)方式是直接修復(fù)，其可修復(fù)由烷化劑引起的DNA損傷。O6-甲基鳥嘌呤-DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶（O6-methylguanine DNA methyltransferase，MGMT）是DNA直接修復(fù)蛋白，能將受損的DNA的O6-mG位的烷化基團(tuán)轉(zhuǎn)移到MGMT自身的半胱氨酸殘基上，從而完成對(duì)損傷的DNA的修復(fù)[13-14]。這也是造成癌細(xì)胞對(duì)烷化劑類藥物產(chǎn)生耐藥性的原因之一。烷化劑藥物殺傷腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)制主要是通過對(duì)腫瘤細(xì)胞造成DNA的烷基化損傷（甲基化、乙基化、氯乙基化等），從而阻斷腫瘤細(xì)胞的DNA復(fù)制，以殺傷腫瘤細(xì)胞[15]。本研究結(jié)果表明，Hp陽性組胃癌組織MGMT陽性表達(dá)率高于HP陰性組，且表達(dá)強(qiáng)度與Hp感染呈正相關(guān)。說明由于MGMT的升高，有可能會(huì)引起瘤細(xì)胞對(duì)烷化劑類抗癌藥物的耐藥性，及早根除Hp有可能降低癌細(xì)胞中的MGMT水平，從而降低腫瘤對(duì)烷化劑的耐藥性。

綜上所述，胃癌組織Ki-67、GST-π、TOPOⅡα、MGMT表達(dá)與Hp感染有關(guān)，其可能參與及影響胃癌的增殖過程及耐藥機(jī)制。