摘要：從非洲豬瘟第一例發(fā)生到目前為止，已經(jīng)過去四年多的時(shí)間，很多養(yǎng)殖場都遭受了不同程度的損失，并且對(duì)我國的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失，生物安全級(jí)別也達(dá)到了前所未有的高度，為了能夠協(xié)助部分發(fā)生非洲豬瘟的養(yǎng)殖場盡快進(jìn)行復(fù)養(yǎng)，筆者對(duì)養(yǎng)殖場內(nèi)環(huán)境的洗消情況進(jìn)行了評(píng)估：對(duì)于評(píng)估后的結(jié)果令人擔(dān)憂，很多場未能按照復(fù)養(yǎng)的要求進(jìn)行清洗消毒，造成復(fù)養(yǎng)接連失敗。

關(guān)鍵詞：非洲豬瘟病毒：復(fù)養(yǎng)：環(huán)境評(píng)估

非洲豬瘟病毒是一個(gè)基因組大，復(fù)雜而古老的DNA病毒，它也非常容易變異，一般的消毒劑都可以將其殺死，非洲豬瘟病毒耐低溫，不耐高溫，低溫血液中可以存活5～6年的時(shí)間，常溫下可存活10多天的時(shí)間；但不耐高溫，60℃的溫度幾十分鐘就可以把它殺死；非洲豬瘟病毒的傳播主要依靠直接或者間接接觸傳播，但也有報(bào)道非洲豬瘟病毒也可以通過空氣短距離傳播，在規(guī)?；i場尤其在風(fēng)機(jī)的帶動(dòng)下，非洲豬瘟病毒很有可能通過空氣短距離傳播，筆者曾在一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的規(guī)模場的出風(fēng)口處檢測到非洲豬瘟病毒的核酸，這也印證了非洲豬瘟病毒可以在外力的作用下可以通過空氣短距離的傳播，這對(duì)于非洲豬瘟的防控又增加了難度。目前的生物安全高度雖然提高到一個(gè)很高的高度，但仍然時(shí)不時(shí)還是有養(yǎng)殖場發(fā)生疫情，并且復(fù)盤時(shí)無法找到發(fā)生疫情的原因；所以復(fù)養(yǎng)一個(gè)艱難的過程，復(fù)養(yǎng)之前一定經(jīng)過分析本場是如何發(fā)生疫情的，這樣才能避免下次發(fā)生同樣的漏洞；復(fù)養(yǎng)的成功幾率就會(huì)增加。洗消過程中最好使用4%火堿進(jìn)行，避免污染物污染到其它地方。

2018年8月3日，中國第一例非洲豬瘟事件在遼寧沈陽被OIE（現(xiàn)WOAH）所報(bào)道，然而，實(shí)際上這不一定是最早的發(fā)病案例，因?yàn)樵?個(gè)月之前，已經(jīng)在沈陽郊區(qū)已經(jīng)出現(xiàn)過類似癥狀的豬只發(fā)病[1]。比如，3月24日，在鄰?。质。┓欠ㄙ徺I的一些斷奶仔豬就表現(xiàn)出類非洲豬瘟癥狀，死亡率高達(dá)28%。7月6日，該養(yǎng)豬場老板將余下的45頭仔豬賣給附近的其他養(yǎng)殖場，結(jié)果很快全部死亡，且觀察到的主要臨床癥狀及病理變化同急性非洲豬瘟所致癥狀一樣。采集2頭死亡仔豬的脾臟組織做檢測，在電鏡下，觀察到了類非洲豬瘟病毒顆粒樣，且PCR檢測組織樣品分析結(jié)果為脾臟、肝臟和腎臟都呈非洲豬瘟陽性。

從報(bào)道的第一例非洲豬瘟到現(xiàn)在已經(jīng)過去四年多的時(shí)間，為了滿足普通百姓日常的消費(fèi)，很多地方都在非瘟后時(shí)代積極地復(fù)養(yǎng)[2]；但復(fù)養(yǎng)并不是一帆風(fēng)順，無論規(guī)?；瘓鲞€是中小養(yǎng)殖場在復(fù)養(yǎng)前會(huì)進(jìn)行認(rèn)真的洗消，有的甚至用火焰消毒，但卻忽略了對(duì)消毒后效果的評(píng)估，筆者通過大半年對(duì)一些經(jīng)過洗消后的養(yǎng)殖場進(jìn)行環(huán)境評(píng)估[3-6]，經(jīng)過近兩年的環(huán)境評(píng)估發(fā)現(xiàn)很多的養(yǎng)殖場在洗消后空欄一段時(shí)間（3～10個(gè)月）仍然檢測到非洲瘟豬瘟核酸片段為陽性，這包含了規(guī)模化豬場和中小養(yǎng)殖場。

1 材料及方法

1.1 樣品來源

樣品來源于遼寧省某些規(guī)模化洗消后的豬場。

1.2 試劑及材料

AXYGENmi n i核酸提取試劑盒，非洲豬瘟檢測試劑盒及所用實(shí)驗(yàn)耗材均由金宇保靈生物藥品公司技術(shù)服務(wù)部提供，農(nóng)場生物安全柜。

1.3 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)前進(jìn)行溝通并實(shí)地對(duì)豬場清洗消毒的效果進(jìn)行眼觀評(píng)估，確定后再進(jìn)行采集樣品，穿上防護(hù)服，帶上乳膠手套及一次性手套，戴上口罩，然后對(duì)每棟豬舍進(jìn)行采集樣品；每個(gè)部位用一張棉柔巾進(jìn)行擦拭，棉柔巾在擦拭前用3mL左右的純凈水將其弄濕（濕潤但不滴水），然后對(duì)棟舍不同部位進(jìn)行采集樣品，每個(gè)位點(diǎn)采集完樣品后單獨(dú)放入自封密閉袋中等待后續(xù)處理。

1）樣品處理。將采集后的樣品放入生物安全柜中，對(duì)自封袋中的樣品進(jìn)行處理，加入適量的純凈水反復(fù)揉使其混勻，從中取出1. 5mL的樣品放入離心管中，將所有的樣品按照上述步驟操作后放入離心機(jī)中離心，離心后取上清液200？L放入離心管中。

2） DNA提取。樣品的DNA提取按照AXYGEN公司的AxyPrepBody Fluid Vi ral說明書操作。

3） qPCR檢測。利用明日達(dá)試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)體系如表1：

反應(yīng)條件如下：50℃ （UNG酶反應(yīng)）2min；95℃（Taq酶活化）5min；95℃（變性）10s；45cycle 60℃（退火、延伸采集熒光）30s。

2 結(jié)果與分析

從2019年6月到當(dāng)前，筆者已檢測了380份環(huán)境樣品，陽性檢出率2.1%，檢出的CT值大多在30～42之間（表2），個(gè)別也有20多的，這個(gè)主要是由于場里的病毒載量比較高，未進(jìn)行徹底清洗及消毒導(dǎo)致差別比較大，如果經(jīng)過反復(fù)認(rèn)真洗消及干燥的情況下，大多數(shù)的CT值比較高；雖然檢測出非洲豬瘟病毒的核酸，但目前無法判斷病毒是否存活，這也從側(cè)面反映出場里的洗消狀況；很多經(jīng)過認(rèn)真反復(fù)洗消及干燥的情況下是檢測不到核酸的。部分樣品qPCR結(jié)果見圖1：

3 小結(jié)與討論

非洲豬瘟的發(fā)生給我國的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失，但同時(shí)也使我國養(yǎng)豬業(yè)生物安全的高度得到了很大的提高，但通過采集的樣品發(fā)現(xiàn)檢出率相對(duì)比較高的地方都是一些邊角不容易清洗和不容易清洗干凈的地方，檢出率最高的點(diǎn)就是漏糞板和化糞池及飼料袋表面，當(dāng)然這個(gè)也是因場而異；有些發(fā)病比較輕微的養(yǎng)殖場，由于病毒載量比較低，經(jīng)過認(rèn)真清洗消毒空欄后，熒光定量PCR檢測出CT值相對(duì)比較高；發(fā)病比較嚴(yán)重的養(yǎng)殖場病毒載量比較高，經(jīng)過認(rèn)真清洗消毒空欄后熒光定量PCR檢測出CT值相對(duì)比較低；所以對(duì)于想要復(fù)養(yǎng)的養(yǎng)殖場在做過認(rèn)真清洗消毒后，最好能夠經(jīng)過環(huán)境評(píng)估后再進(jìn)行進(jìn)豬。筆者曾經(jīng)對(duì)一個(gè)規(guī)?；酿B(yǎng)殖場進(jìn)行環(huán)境評(píng)估，該場發(fā)病比較輕微，經(jīng)過洗消后空欄達(dá)到10個(gè)月的時(shí)間，仍然在化糞池中檢測到非洲豬瘟病毒核酸片段陽性，所以對(duì)于清洗消毒空欄后最好能夠進(jìn)行一下環(huán)境評(píng)估，目前的非瘟和以前的情況又不太一樣，毒力沒有之前那么強(qiáng)，導(dǎo)致現(xiàn)在的非瘟想要拔牙難度非常大，以前早期拔牙可以通過口腔鼻腔及肛拭子，可以及早發(fā)現(xiàn)感染的陽性豬只，迅速進(jìn)行剔除帶毒的豬，但現(xiàn)在由于弱毒的出現(xiàn)，導(dǎo)致口腔鼻腔和肛拭子無法檢測到病毒，所以也就無法及時(shí)發(fā)現(xiàn)?，F(xiàn)在的非瘟弱毒導(dǎo)致臨床出現(xiàn)的癥狀也沒有之前那么典型，現(xiàn)在的有些弱毒會(huì)出現(xiàn)皮膚的潰爛，所以在發(fā)現(xiàn)有這種情況的時(shí)候及時(shí)懷疑是不是又非瘟弱毒存在。

特別對(duì)于中小養(yǎng)殖場由于豬舍條件簡陋，這樣會(huì)增加清洗消毒的難度；目前對(duì)于打算復(fù)養(yǎng)的養(yǎng)殖場，筆者建議對(duì)于條件比較好的養(yǎng)殖場能夠做到認(rèn)真清洗消毒，經(jīng)過空欄一段時(shí)間后，經(jīng)過環(huán)境評(píng)估以后再進(jìn)行進(jìn)豬；另外消毒的效果會(huì)受到溫度的影響，特別對(duì)于冬季北方溫度能達(dá)到零度以下，這樣洗消就會(huì)非常困難，建議把豬舍溫度升高，另外用熱水進(jìn)行清洗和消毒；這樣對(duì)于環(huán)境中的病毒能夠起到很好的效果，并且復(fù)養(yǎng)之前對(duì)于豬舍進(jìn)行有效的改造，不同圈舍之間最好用實(shí)體墻進(jìn)行隔開，料槽不再是通體料槽，地面整潔平整，便于清洗和消毒。

在復(fù)養(yǎng)環(huán)境評(píng)估過程中一定要注意回顧本場發(fā)生的原因，這樣有助于后續(xù)查缺補(bǔ)漏，避免后續(xù)再次出現(xiàn)相同的漏洞，另外豬場還要注意老鼠方面的問題，因?yàn)槔鲜笠矔?huì)在非瘟傳播過程中起到一個(gè)間接傳播的作用，還有一些可以間接傳播的因素也需要注意；當(dāng)然肯定有疑問存在，檢測到非洲豬瘟核酸片段能不能代表就是活病毒，如果經(jīng)過很長時(shí)間還能在環(huán)境中檢測到核酸片段，筆者認(rèn)為這很有可能是活病毒存在；因?yàn)椴《緯?huì)慢慢降解，那么環(huán)境中能夠檢測到的幾率應(yīng)該非常?。凰匀绻軌驒z測到非洲豬瘟核酸片段即判定為活病毒，這僅代表個(gè)人意見。

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