摘要：為掌握貓子宮蓄膿綜合征的微生物學(xué)致病因素，對12只子宮蓄膿患貓進(jìn)行了細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定，結(jié)果獲得28株分離菌，其中大腸埃希氏菌8株，腸球菌8株；金黃色葡萄球菌、運(yùn)動克雷伯菌、變形桿菌各3株；中間葡萄球菌、銅綠假單胞菌、厭氧消化鏈球菌各1株，表明引發(fā)貓子宮蓄膿綜合征的病原菌較為復(fù)雜，以腸道條件致病菌居多，為子宮蓄膿患貓的抗感染治療提供了方向。

關(guān)鍵詞：貓；子宮蓄膿；診斷；治療

子宮蓄膿綜合征是指子宮蓄膿、子宮內(nèi)膜炎、子宮膿腫等多種疾病的癥候群，表現(xiàn)子宮內(nèi)蓄積大量炎性滲出物，包括清亮透明的液體、血水、膿液，并伴有子宮內(nèi)膜增生性炎癥[1]。貓子宮蓄膿綜合征的發(fā)病原因比較復(fù)雜，通常是多種因素共同作用，以內(nèi)分泌因素和微生物感染為主[2]。保守治療適用于病情較輕的開放型子宮蓄膿病例、患貓?bào)w況差不適合手術(shù)的病例以及主人強(qiáng)烈拒絕手術(shù)治療的病例，手術(shù)摘除子宮和卵巢是根治子宮蓄膿綜合征的有效方法，相比保守治療，療效迅速且不易復(fù)發(fā)[3，4]。兩種治療方法均需要準(zhǔn)確應(yīng)用抗生素抗感染，因此掌握貓子宮蓄膿綜合征感染的病原菌種類及特點(diǎn)非常必要。

1 材料

1.1 樣品

采自動物醫(yī)院12只患子宮蓄膿的患貓，共計(jì)12份。

1.2細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定試劑

脫纖綿羊血、TSA瓊脂、麥康凱瓊脂均購自北京陸橋生物技術(shù)有限公司；革蘭氏染色液由大連市動物疫病預(yù)防控制中心配制；觸酶試劑、氧化酶試劑、凍干兔血漿、微量生化鑒定管購自北京陸橋生物技術(shù)有限公司。

1.3儀器設(shè)備與耗材

普通生化培養(yǎng)箱，二氧化碳培養(yǎng)箱，生物顯微鏡，厭氧產(chǎn)氣袋與厭氧罐，高壓滅菌器，細(xì)菌接種器械（剪刀、鑷子、手術(shù)刀、接種環(huán)、酒精燈等）。

2 試驗(yàn)方法

2.1樣品采集

對于進(jìn)行卵巢子宮切除術(shù)的病例，先用酒精棉擦拭子宮體，再用手術(shù)刀片燒烙外表面，切開一個(gè)小口，用一次性無菌注射器收集子宮內(nèi)容物作為待檢樣品。對于保守治療的病例，用滅菌導(dǎo)尿管插入子宮頸，注入少量無菌生理鹽水再迅速抽回，收集子宮沖洗物作為待檢樣品。

2.2樣品鏡檢

采集的樣品先涂片，革蘭氏染色鏡檢，對可能存在的細(xì)菌做初步判斷。

2.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)

每份樣品分別放置在一個(gè)麥康凱瓊脂平板，兩個(gè)5%綿羊血TSA瓊脂平板上用四分區(qū)劃線法做分離培養(yǎng)[5]。接種好的麥康凱瓊脂平板置于37℃普通大氣條件下培養(yǎng)，一個(gè)血瓊脂平板置于37℃、5% CO2條件下培養(yǎng)，另一個(gè)放入?yún)捬醍a(chǎn)氣袋中加入氧氣吸收劑，迅速密封好置于厭氧罐中37℃厭氧培養(yǎng)。

2.4 菌株純化與鑒定

對不同培養(yǎng)基及不同培養(yǎng)條件下獲得的獨(dú)立菌落進(jìn)行形態(tài)、大小、顏色、溶血性、色素產(chǎn)生等情況觀察，涂片革蘭氏染色鏡檢觀察染色特性及菌體形態(tài)，挑取單個(gè)菌落轉(zhuǎn)移接種進(jìn)行純化，純化兩次后根據(jù)菌株培養(yǎng)特征、鏡檢特征、觸酶、氧化酶及葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)等結(jié)果初步分群或科屬，選擇相應(yīng)的微量生化鑒定管，包括腸桿菌科生化鑒定管、葡萄球菌屬生化鑒定管、鏈球菌屬生化鑒定管、腸球菌生化鑒定管、非發(fā)酵菌生化鑒定管等[5]。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 鏡檢結(jié)果

對采集到的樣品涂片染色鏡檢，所有樣品都能看到明顯的細(xì)菌，多數(shù)樣品同時(shí)看到G桿菌和G+球菌，同時(shí)可見大量變性的白細(xì)胞和少數(shù)上皮細(xì)胞。

3.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果

每份樣品分離到的細(xì)菌1～4株不等，12份樣品總計(jì)分離到28株細(xì)菌，對分離菌株進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，順序編號。

1）1、4、7、10、12、13、15、19、20、26、27號菌株在麥康凱瓊脂平板和綿羊血瓊脂平板上均生長良好，24h后在麥康凱瓊脂平板上呈粉紅色不透明、圓形、隆起、邊緣整齊的中等大小菌落，在血瓊脂平板上呈灰白色不透明圓整、稍凸起、中等大小濕潤菌落，無溶血環(huán)，鏡檢均為G一陰性桿菌．疑為腸桿菌科細(xì)菌。

2）3、14、23號菌在麥康凱瓊脂平板和綿羊血瓊脂平板上均生長良好，24h后在麥康凱瓊脂平板上呈白色半透明、圓整、稍隆起、中等大小的菌落，培養(yǎng)基變成黃色，在血瓊脂平板上呈濕潤的薄膜狀菌苔，不溶血，鏡檢為G陰性桿菌，疑為乳糖陰性腸桿菌科細(xì)菌。 3）2、5、6、9、11、21、25、28號菌在綿羊血瓊脂平板5% C02條件下生長良好，24h后形成直徑1～1. 5mm左右圓形、隆起、灰白色、不透明、光滑菌落，形成a溶血環(huán)。在麥康凱瓊脂上24h未見菌落形成，48h后可見粉紅色針尖大小圓形隆起的光滑菌落。該菌鏡檢為G+球菌，呈單個(gè)、成對或短鏈排列。疑為腸球菌屬細(xì)菌。

4）8、18、24號菌在綿羊血瓊脂平板上生長良好，24h形成直徑1～2mm，圓形、光滑、邊緣整齊、凸起、不透明的黃白色菌落，可見明顯的β溶血環(huán)。鏡檢為G+球菌，不規(guī)則葡萄狀成簇排列。麥康凱平板上不生長，疑為葡萄球菌屬細(xì)菌。16號菌在綿羊血瓊脂平板上生長良好，菌落比上一組細(xì)菌稍大，呈奶白色，無溶血環(huán)，鏡檢為G+球菌，不規(guī)則葡萄狀成簇排列，麥康凱平板上不生長，疑為葡萄球菌屬細(xì)菌。

5）17號菌在綿羊血瓊脂和麥康凱瓊脂平板上均可生長，在綿羊血瓊脂平板上生長好，24h即可形成圓形、濕潤、大而扁平、邊緣不整的菌落，可形成β溶血環(huán)，時(shí)間長后，細(xì)菌產(chǎn)色素，培養(yǎng)基呈黑綠色。鏡檢為G桿菌。本菌在TSA瓊脂上產(chǎn)綠色素明顯，在麥康凱瓊脂上生長較慢，48h可見白色、扁平、不規(guī)整的小菌落。疑似銅綠假單胞菌。

6） 22號菌在綿羊血瓊脂平板上厭氧培養(yǎng)72h后形成灰白色、光滑、輕微凸起、不透明、不溶血的小菌落，培養(yǎng)物具有特殊的糖果氣味，鏡檢為G+球菌，成對、短鏈或成堆排列。

3.3 菌株生化鑒定結(jié)果

1）乳糖陽性腸科菌科細(xì)菌。1、4、7、10、12、13、15、19、20、26、27號菌株用腸桿菌科微量生化管進(jìn)行鑒定，1、4、10、12、13、20、26、27號菌符合大腸埃希氏菌的生化特征，鑒定為大腸埃希氏菌；7、15、19號菌不完全符合大腸埃希氏菌的生化特征，通過查腸桿菌科細(xì)菌生化鑒定編碼手冊，這三株菌符合克雷伯菌屬運(yùn)動克雷伯菌的生化特征。

2）乳糖陰性腸桿菌科細(xì)菌。3、14、23號菌氧化酶陰性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，接種到沙門氏菌選擇培養(yǎng)基ss瓊脂上，37℃培養(yǎng)24h形成白色、半透明、微凸、圓整、帶黑心的菌落，疑似沙門氏菌，用沙門氏菌A-F多因子血清做凝集試驗(yàn)，結(jié)果所有菌株均不凝集，用腸桿菌科微量生化鑒定管進(jìn)行生化鑒定，苯丙氨酸陽性，排除了沙門氏菌，結(jié)果均符合變形桿菌的生化特征[5]。

3）腸球菌屬細(xì)菌。2、5、6、9、11、21、25、28號菌為在綿羊血瓊脂平板和麥康凱瓊脂上均可生長的G+短鏈球菌，用腸球菌屬微量生化鑒定管鑒定均符合糞腸球菌的生化特征。

4）葡萄球菌屬細(xì)菌。8、18、24和16號菌均為G+不規(guī)則聚集排列的球菌，觸酶試驗(yàn)均為陽性，疑似葡萄球菌屬細(xì)菌，其中8、18、24號菌具有β溶血性，16號菌無溶血性，8、18、24號菌血漿凝固酶試驗(yàn)陽性，16號菌血漿凝固酶試驗(yàn)陰性，用葡萄球菌屬微量生化鑒定管進(jìn)行生化試驗(yàn)，結(jié)果8、18、24號菌符合金黃色葡萄球菌的生化特征，16號菌符合中間葡萄球菌的生化特征。

5）銅綠假單胞菌。17號菌在綿羊血平板和麥康凱平板上均可生長，產(chǎn)綠色素的G桿菌，氧化酶陽性，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，區(qū)別于腸桿菌科細(xì)菌[5]，用非發(fā)酵菌微量生化鑒定管進(jìn)行生化試驗(yàn)，結(jié)果符合銅綠假單胞菌的生化特征。

6）厭氧消化鏈球菌。22號菌為G+厭氧球菌，委托大連市動物疫病預(yù)防控制中心進(jìn)行鑒定，結(jié)果為厭氧消化鏈球菌。

4 結(jié)論

12只子宮蓄膿綜合征患貓總計(jì)分離到28株細(xì)菌，其中大腸埃希氏菌8株，腸球菌8株，占比最高，均為29%；其次是金黃色葡萄球菌3株，運(yùn)動克雷伯菌3株，變形桿菌3株，各占比11%；中間葡萄球菌1株，銅綠假單胞菌1株，厭氧消化鏈球菌1株，各占比3%。

12只患貓二重以上細(xì)菌感染達(dá)7只，占比58. 3%；三重及以上感染4只，占比33. 3%；其中大腸埃希氏菌和腸球菌參與的混合感染比例最高，達(dá)7只，占比58. 3%。金黃色葡萄感染貓3只，占比25%，對比臨床癥狀金黃色葡萄球菌感染貓全身癥狀較重。

5 討論

經(jīng)細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)子宮蓄膿綜合征患貓感染菌種類較多，以腸道條件致病菌居多，致病菌以金黃色葡萄球菌為主，二重及以上感染普遍，提示貓子宮蓄膿綜合征的發(fā)生除了內(nèi)分泌紊亂，細(xì)菌感染因素不容忽視：如生活環(huán)境衛(wèi)生，發(fā)情期及配種時(shí)外生殖器衛(wèi)生，子宮周圍組織慢性炎癥等。細(xì)菌分離鑒定結(jié)果同時(shí)說明子宮蓄膿患貓子宮卵巢切除術(shù)后仍需進(jìn)行全身的抗生素治療，以消除體內(nèi)炎癥和潛在的術(shù)后感染。

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