摘要：為了解興文縣禽流感病毒在家禽中的免疫效果和感染流行情況，通過采集轄區(qū)內(nèi)12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)家禽規(guī)模養(yǎng)殖場、散養(yǎng)戶、農(nóng)貿(mào)市場和活禽屠宰點(diǎn)的660份禽血清樣本和660份禽拭子樣本，在實驗室以血凝（HA）和血凝抑制試驗（HD檢測血清中禽流感病毒H5亞型、H7亞型的抗體含量，并以實時熒光定量RT-PCR方法檢測拭子中是否存在禽流感病毒H5亞型、H7亞型核酸。結(jié)果顯示：660份禽血清樣品中禽流感H5亞型抗體個體和群體合格率分別為89.24%、82.2g%，禽流感H7亞型抗體個體和群體合格率分別為97.73%、87.50%; 660份禽拭子樣品中檢出禽流感病毒H5亞型核酸陽性樣品15份，陽性檢出率為2.27%，禽流感H6亞型病毒核酸陽性樣品6份，陽性檢出率為0.95%，所有病毒陽性檢出點(diǎn)均來自活禽屠宰點(diǎn)，未檢出禽流感H7亞型病毒核酸陽性樣品。結(jié)果表明：興文縣的禽流感H5和H7免疫抗體水平均符合國家強(qiáng)制免疫水平要求，且規(guī)模場抗體合格率優(yōu)于農(nóng)村散戶，家禽養(yǎng)殖環(huán)節(jié)無禽流感病毒核酸（H5、H6和H7亞型）檢出?；钋菔袌隽魍ōh(huán)節(jié)中均檢測了禽流感病毒H5、H6、H7亞型，主要以禽流感病毒H5亞型居多，尤其是屠宰點(diǎn)的屠宰案板、放血槽、脫毛機(jī)以及衛(wèi)生，且管理和衛(wèi)生條件較差的地方存在一定傳播風(fēng)險。建議繼續(xù)開展高致病性禽流感強(qiáng)制免疫，加強(qiáng)養(yǎng)殖戶和高危人員宣傳，落實活禽市場“1110”制度，加快鄉(xiāng)鎮(zhèn)家禽屠宰點(diǎn)規(guī)范化和企業(yè)化建設(shè)，以降低興文縣禽流感發(fā)生風(fēng)險。

關(guān)鍵詞：禽流感：興文縣：監(jiān)測：分析

禽流感（Avian i nfl uenza，Al）是由甲型流感病毒（Avian influenza vi rus，AIV）感染禽類而引起的禽類傳染病，其中雞、火雞、鴨、鵝等多種禽類易感，但在雞、火雞中引起的發(fā)病率和死亡率較高[1]。禽流感的傳染源主要為患禽流感或攜帶禽流感病毒的雞、鴨、鵝等家禽，其病毒可在糞便、污染的籠具和水等環(huán)境中存活較長時間，研究表明鳥類在禽流感傳播過程起到協(xié)助作用[2]。按照病毒致病力大小又分為高致病性（HPAI，H5、H7亞型為主）和低致病性（IPAI，H6、H9亞型為主）[3]。由于禽流感病毒的血凝素結(jié)構(gòu)等特點(diǎn)，在感染禽類后其病毒會在復(fù)制過程中發(fā)生基因重配，致使結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，極易造成人等其他動物感染。近年來，全球高致病性禽流感情況復(fù)雜、形勢嚴(yán)峻，一些國家高致病性禽流感疫情嚴(yán)重[4]，2021年我國也報告了多起高致病性禽流感疫情，從流行毒株上看，流行的高致病性禽流感病毒毒株主要以H5N8和N5N1亞型為主，毒株變異速度加快，防疫形勢嚴(yán)峻復(fù)雜，禽類養(yǎng)殖行業(yè)損失巨大[5]。為準(zhǔn)確把握興文縣禽流感防控形勢，克服麻痹思想、厭戰(zhàn)情緒和僥幸心理，根據(jù)《宜賓市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局關(guān)于關(guān)于開展“冬春高致病性禽流感專項監(jiān)測”的通知》要求，興文縣對轄區(qū)12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的規(guī)模養(yǎng)禽場、散養(yǎng)戶、農(nóng)貿(mào)市場活禽屠宰點(diǎn)進(jìn)行隨機(jī)抽取采樣，以了解禽流感的免疫效果和流行情況，為下一步全縣禽流感防控工作提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣本來源

興文縣轄區(qū)內(nèi)12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)隨機(jī)抽選重點(diǎn)養(yǎng)殖場所（種禽場、蛋雞養(yǎng)殖場和規(guī)模烏雞養(yǎng)禽場）3處，每處采集禽血清10份和咽喉、泄殖腔雙拭子5份；隨機(jī)抽選家禽散養(yǎng)戶5處，每處采集禽血清5份和咽喉、泄殖腔雙拭子3份；隨機(jī)抽選農(nóng)貿(mào)市場活禽屠宰點(diǎn)5處，每處采集籠具、脫毛機(jī)、案板、放血桶、活禽咽喉及其泄殖腔雙拭子（隨機(jī)采集5只活禽混合為一支采樣管）各1份（表1）。

1.2 主要儀器與試劑

FHT101-32全自動核酸提取儀，購于濟(jì)凡生物科技有限公司；Mic-M0001536熒光PCR儀器，購于現(xiàn)代生物科技有限公司；TG16MW高速離心機(jī)，購于湖南赫西儀器設(shè)備有限公司；DSC-1 300A2生物安全柜，購于蘇州博萊爾凈化設(shè)備有限公司；LS-50LD自動高壓滅菌器，購于江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司；Y502-G45 FineMag快速磁珠法病毒DNA/RNA提取試劑盒（磁珠法，批號20210810）購于濟(jì)凡生物科技有限公司；禽流感H5亞型核酸檢測試劑盒（熒光PCR法、批號20220112105），禽流感H6亞型核酸檢測試劑盒（熒光PCR法、批號20220112110），禽流感H7亞型核酸檢測試劑盒（熒光PCR法、批號20220112108），禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗抗原Re-13株與陽性血清（批號20220513、批號20220501）．H7亞型血凝抑制試驗抗原Re-4株與陽性血清（批號20220513、批號20220501），均購置于哈爾濱國生生物科技股份有限公司。

1.3 檢測方法及判定

1）抗體檢測。按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部印發(fā)的《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GBIT18936-2020），采用HA和Hl試驗，對禽血清進(jìn)行禽流感H5和H7亞型抗體檢測[5-8]．讀取每個樣品滴度數(shù)據(jù)，記錄抗體效價。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為以完全抑制4HAU抗原的最高血清稀釋倍數(shù)判為該血清的Hl效價，當(dāng)陽性對照血清的Hl效價與已知效價誤差不超過1個滴度，陰性對照血清效價不高于2log2時，實驗成立。被檢禽血清Hl效價≤3log2判定為抗體陰性，=41 092判定為抗體可疑（可疑樣品重驗，重驗效價≤3log2判定為抗體陰性，≥4log2判定為抗體陽性），≥5log2判定為抗體陽性，陽性樣品記錄為個體免疫合格，以戶為單位群體合格率≥70%為免疫群體合格。

2）核酸檢測。將禽拭子按照通用型病毒核酸提取試劑盒（磁珠法）說明書操作提取病毒核酸后，以實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄一聚合份酶鏈反應(yīng)法（RT-PCR），按照試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作，分別檢測H5、H6、H7亞型核酸[9-11]。有效性判定為陰性對照CT值gt;38或無CT值，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期，陽性對照有典型S性擴(kuò)增曲線且CT值≤30，樣品結(jié)果為樣品CT值≤35或有明顯指數(shù)增長判定為陽性，樣品CT值gt;35且≤38為可疑，需進(jìn)行復(fù)核，復(fù)核實驗結(jié)果仍然出現(xiàn)樣品CT值gt;35且≤38則判定為陽性，否則為陰性，樣本CT值gt;38或無CT為陰性。

1.4 數(shù)據(jù)分析

將檢測有關(guān)數(shù)據(jù)錄入Excel軟件進(jìn)行歸納整理，分析不同群體、場所等樣品來源點(diǎn)中禽類樣品抗體合格情況、核酸陽性率和禽流感病毒流行風(fēng)險[12，13]。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清學(xué)

檢測的660份禽血清中，禽流感H5亞型免疫合格589份、禽流感H7亞型免疫合格612份。其中重點(diǎn)養(yǎng)殖場所（種禽場、蛋雞養(yǎng)殖場和規(guī)模烏雞養(yǎng)禽場）采集的360份血清中，禽流感H5亞型個體免疫合格336份、H7亞型禽流感個體免疫合格350份。散養(yǎng)戶處采集的300份血清中，H5亞型禽流感個體免疫合格253份、H7亞型禽流感個體免疫合格262份。結(jié)果統(tǒng)計顯示禽流感H5亞型個體抗體合格率89. 24%，以戶為單位的群體抗體合格率82. 29%；禽流感H7亞型個體抗體合格率97. 73%，以戶為單位的群體免疫合格率87. 50%（表2）。從檢測數(shù)據(jù)來看，重點(diǎn)養(yǎng)殖場所（種禽場、蛋雞養(yǎng)殖場或規(guī)模烏雞養(yǎng)禽場）的禽流感H5和H7亞型的平均個體抗體合格率和以戶為單位的群體抗體合格率均高于散養(yǎng)戶，禽流感H7亞型抗體效價高于H5亞型，有少數(shù)散養(yǎng)戶未監(jiān)測到H5、H7亞型禽流感抗體。

2.2 病原學(xué)

檢測的1，320份（養(yǎng)殖環(huán)節(jié)：拭子360份；屠宰環(huán)節(jié)：環(huán)境樣品240份和拭子60份）樣品中，檢出禽流感H5亞型病毒核酸陽性樣品15份，主要分布在活禽屠宰點(diǎn)的籠具、屠宰案板、脫毛機(jī)、放血槽，其中籠具陽性檢出率偏高；檢出禽流感H6亞型6份，其中活禽咽喉泄殖腔拭子檢出陽性2份，為某個屠宰點(diǎn)售賣的活禽肉鴨，環(huán)境中僅在3個屠宰點(diǎn)位的籠具中檢出；未檢出H7亞型禽流感病毒陽性樣品（表3）。

3 討論

近幾年，禽流感疫情不僅對我國養(yǎng)禽業(yè)帶來極大經(jīng)濟(jì)損失，也影響了養(yǎng)殖戶產(chǎn)業(yè)發(fā)展和養(yǎng)殖信心，同時還會給人的健康帶來一定的威脅。有調(diào)查研究顯示家禽中的禽流感病毒可以通過基因重排，為感染人類的禽流感病毒提供基因，或直接突破種間屏障感染人[14]。2021年我國國內(nèi)個別地區(qū)發(fā)現(xiàn)H5亞型高致病性禽流感病毒，同時顯現(xiàn)出野禽感染H5N8亞型高致病性禽流感疫情[15]。據(jù)世界動物衛(wèi)生組織統(tǒng)計，新型H5N8和H5N1病毒自2020年1月以來在全球已累計導(dǎo)致兩億多只家禽死亡或被撲殺。病原學(xué)監(jiān)測表明，同時禽流感各亞型可通過野鳥向家禽中傳播。

此次對種禽場、肉蛋雞養(yǎng)殖場或規(guī)模養(yǎng)禽場等重點(diǎn)場所的禽流感抗體和病原檢測，以隨機(jī)抽樣的方式進(jìn)行，可以總體反映全縣禽流感的免疫情況和流行態(tài)勢。檢測結(jié)果表明，興文縣規(guī)模養(yǎng)禽場和散養(yǎng)戶的H5、H7亞型禽流感抗體免疫合格率均大于70%以上，達(dá)到了農(nóng)業(yè)農(nóng)村部的強(qiáng)制免疫抗體水平要求。未在種禽場、蛋雞養(yǎng)殖場和規(guī)模養(yǎng)禽場以及禽類散養(yǎng)戶中檢出禽流感病毒核酸，說明全縣養(yǎng)殖環(huán)節(jié)在推行所有家養(yǎng)禽類實施禽流感（H5+H7）三價滅活疫苗強(qiáng)制免疫后，禽類抗體水平保持合格穩(wěn)定，禽流感防控有效。全縣禽類重點(diǎn)場所H5和H7群體抗體合格率（97. 22%和97. 22%）明顯高于散養(yǎng)戶（73. 33%和81. 67%），究其原因在于重點(diǎn)場所主要為種禽場、肉蛋雞養(yǎng)殖場或規(guī)模養(yǎng)禽場，其養(yǎng)殖規(guī)模已基本成形，管理更加規(guī)范，專業(yè)技術(shù)水平高，養(yǎng)殖經(jīng)驗豐富，且生物安全防護(hù)意識較高，能自主開展程序化免疫，免疫的積極主動性也相對較高，重視力度大。而散養(yǎng)戶的防疫意識還相對淡薄，對禽流感免疫工作重視不足，單純依靠春秋兩季集中免疫，且在前一批禽類出售后一批禽類還未進(jìn)行禽流感免疫，因此散養(yǎng)戶抗體合格率相對較低，甚至出現(xiàn)無抗體的現(xiàn)象，存在禽流感侵襲風(fēng)險。近年來，職能機(jī)構(gòu)改革，縣級撤銷畜牧獸醫(yī)局成立畜牧產(chǎn)業(yè)中心和鄉(xiāng)鎮(zhèn)撤銷畜牧獸醫(yī)站并入農(nóng)服中心，造成畜牧系統(tǒng)弱化，畜禽疫病防控力量逐級減弱，加上基層村動物防疫員年齡偏高，年輕人員因補(bǔ)助低、待遇差，不愿進(jìn)入動物防疫員行業(yè)，最終造成部分散養(yǎng)戶畜禽未免疫。

此次檢出禽流感病毒核酸的場點(diǎn)均為活禽交易市場，通過對所有陽性檢出點(diǎn)走訪調(diào)查，活禽屠宰點(diǎn)大部分僅對籠具糞便、放血池、地面等簡單清掃沖洗，對籠具、脫毛機(jī)等較為頻繁使用處清洗不徹底，衛(wèi)生條件較差，同時市場日常消毒不是很徹底，沒有定期全面消毒。禽流感病毒在這種條件下存活加強(qiáng)，加之市場從縣外、市外等到處收售禽類，活禽來源復(fù)雜、地點(diǎn)不一，有文獻(xiàn)顯示在有交易市場活禽接觸史和暴露史的人群感染禽流感的幾率較大叫，該縣活禽市場存在一定的禽流感傳播風(fēng)險。4結(jié)論本次監(jiān)測表明，繼續(xù)推行各類養(yǎng)殖場開展高致病性禽流感0H5+H7）三價滅活疫苗的強(qiáng)制免疫仍是防范禽流感發(fā)生和傳播的有效措施，同時還應(yīng)針對生物安全條件較差的散養(yǎng)戶加強(qiáng)防控宣傳，加強(qiáng)養(yǎng)殖業(yè)主和高危人員的防范主體意識。興文縣活禽屠宰點(diǎn)檢測出一定比例的禽流感病毒核酸陽性，說明要針對禽流感病毒制定具有針對性的綜合防控措施，如活禽交易市場”1110\"政策、家禽全覆蓋強(qiáng)制免疫和引種落地申報等，同時做好市場環(huán)節(jié)的消毒滅源，加快興文縣的活禽屠宰點(diǎn)規(guī)范化、企業(yè)化建設(shè)，對于禽流感防控尤為重要。

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