曹蓉蓉，劉燕，陳浩

(榆林市藥品檢驗所，陜西榆林 719000)

對羥基苯甲酸酯類又稱尼泊爾金酯，為白色結(jié)晶粉末，具有抗菌能力好、用量小、毒性低，pH 應(yīng)用范圍廣等特點[1-2]，為化妝品中常用防腐劑，能有效抑制化妝品中微生物滋生，防止營養(yǎng)物質(zhì)被破壞，具有延長產(chǎn)品保質(zhì)期的作用。但是長期吸入此類物質(zhì)對身體有害，對眼睛、皮膚、上呼吸道等有刺激作用[3-4]。因此我國化妝品衛(wèi)生規(guī)范中對對羥基苯甲酸酯類防腐劑有最高限量的規(guī)定。

筆者按照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015 年版)中對羥基苯甲酸酯含量測定方法[5]和國家計量技術(shù)規(guī)范JJF 1059.1—2012 《測量不確定度評定與表示》[6]中不確定度評定的基本程序，結(jié)合實際檢測工作條件和相關(guān)文獻[7-16]，采用高效液相色譜法測定對羥基苯甲酸甲酯含量，通過不確定度來源分析，對高效液相色譜測定化妝品中對羥基苯甲酸甲酯含量的不確定度進行了評定，并對每個影響因素進行數(shù)據(jù)計算及分析，得出最終不確定度結(jié)果，為評價含量測定的可靠性提供科學(xué)依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜：Agilent 1260 型，DAD 檢測器，美國安捷倫科技有限公司。

天平：(1) BSA224S 型，分度值為0.1 mg，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；(2) MS205DU 型，感量為0.01 mg，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司。

超聲波清洗器：AS5150A 型，天津奧特賽恩斯儀器有限公司。

自動純水蒸餾器：LHP-18-2 型，重慶力德高端水處理設(shè)備研發(fā)有限公司。

酸度計：PB-21 型，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司。

對羥基苯甲酸甲酯標準物質(zhì)：純度為99.8%（質(zhì)量分數(shù)），擴展不確定度為0.3%(k=2)，批號為G128079，德國Dr. Ehrenstorfer 有限公司。

甲醇、乙腈：色譜純，西格瑪奧德里奇有限公司。

磷酸二氫鈉、氯化十六烷三甲胺、磷酸：優(yōu)級純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

化妝品樣品：某美白保濕乳液，市售。

1.2 色譜條件

色 譜 柱：C18柱(250 mm×4.6 mm，10 μm，美國安捷倫科技有限公司)；進樣體積：5 μL；經(jīng)檢測波長：254 nm；柱溫：22 ℃；流動相：0.05 mol/L 磷酸二氫鉀-甲醇-乙腈溶液(體積比為50∶35∶15)，添加氯化十六烷三甲胺至濃度為0.002 mol/L，并用磷酸調(diào)pH 至3.5，流量為1.5 mL/min。

1.3 溶液配制

對羥基苯甲酸甲酯標準儲備溶液：準確稱取對羥基苯甲酸甲酯標準物質(zhì)16.07 mg 于10 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至標線，搖勻。

對羥基苯甲酸甲酯系列標準工作溶液：精密量取對羥基苯甲酸甲酯標準儲備液2 mL 于10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至標線，即得1#標準溶液；量取對羥基苯甲酸甲酯標準儲備液1 mL 于10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至標線，作為2#標準溶液；量取2#標準溶液5 mL 于10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至標線，作為3#標準溶液。以此類推，逐級移取上級標準溶液5 mL 于10 mL 容量瓶中，稀釋至標線，即得對羥基苯甲酸甲酯系列標準工作溶液。

1.4 樣品處理

準確稱取1.0 g 樣品，置于具塞比色管中，水浴去除乙醇等揮發(fā)性有機溶劑，加甲醇至10 mL，振搖，超聲提取15 min，離心。經(jīng)0.45 μm 濾膜過濾，濾液作為樣品溶液。

1.5 實驗方法

分別精密移取對羥基苯甲酸甲酯標準溶液、樣品溶液各5 μL，按1.2 色譜條件進樣測定，利用外標法以色譜峰面積計算樣品溶液中對羥基苯甲酸甲酯含量。

2 數(shù)學(xué)模型及測量不確定度的來源

2.1 數(shù)學(xué)模型

對羥基苯甲酸甲酯含量的計算見下式：

2.2 測量不確定度來源

2.2.1 對羥基苯甲酸甲酯標準物質(zhì)引入的不確定度

(1)對羥基苯甲酸甲酯標準物質(zhì)純度引入的不確定度。從標準物質(zhì)證書上查得對羥基苯甲酸甲酯標準物質(zhì)的純度為99.89%(質(zhì)量分數(shù))，擴展不確定度U=±0.3%(k=2)，則相對標準不確定度：

2.2.2 標準曲線擬合引入的不確定度

(1)標準溶液配制過程量器引入的不確定度。溫度變化引入的相對不確定度計算同“2.2.1 項下”，則環(huán)境溫度引入的相對標準不確定度：

對羥基苯甲酸甲酯系列標準溶液配制過程分別使用了10 mL 容量瓶6 次，1、2 mL 移液器各1 次，5 mL 移液器4 次，3 種量器的容量允差及合成相對標準不確定度見表1。

表1 量器引入的相對標準不確定度

將表1 中各不確定度分量合成，得玻璃量器引入的相對標準不確定度：

式中：s——殘差標準偏差；

B1——線性方程斜率；

p——平行測定次數(shù),p=4；

n——系列標準工作溶液的濃度點數(shù)，n=12；

ρy——樣品溶液中對羥基苯甲酸甲酯的質(zhì)量濃度，μg/mL；

對6 種不同濃度標準溶液分別平行測定2 次，計算結(jié)果見表2。

表2 標準曲線擬合實驗數(shù)據(jù)

將表2 測定數(shù)據(jù)代入式(2)、(3)計算，得到標準曲線擬合引入的標準不確定度：

對樣品溶液進行4 次測定，由標準曲線計算得到樣品中對羥基苯甲酸甲酯質(zhì)量濃度為203.28 μg/mL，則標準曲線擬合引入的相對標準不確定度：

2.2.3 樣品處理引入的不確定度

稱 樣2 次，稱 樣 質(zhì) 量(mx) 分 別 為1 005.2、1 001.2 mg，采用減量法稱重，稱量引入的不確定度計算兩次，則相對標準不確定度：

2.2.4 高效液相色譜儀引入的不確定度

2.2.5 測量重復(fù)性引入的不確定度

對一樣品重復(fù)測量6 次，精密稱取6 份樣品各測定2 次(n=6，N=2)，結(jié)果見表3。

表3 樣品色譜峰面積重復(fù)性測定結(jié)果

由表3 數(shù)據(jù)計算得重復(fù)測定樣品引入的相對不確定度：

2.3 樣品測定結(jié)果

由線性方程計算出樣品中對羥基苯甲酸甲酯的質(zhì)量濃度，代入式(1)可得樣品中對羥基苯甲酸甲酯的含量為2 026.32 μg/g。

2.4 不確定度的合成

以上各不確定分量互不相關(guān)，則樣品中對羥基苯甲酸甲酯含量的相對標準不確定度：

2.5 擴展不確定度

取包含因子k=2(近似95%置信概率)，則對羥基苯甲酸甲酯含量擴展不確定度U=ku(x)=36.20 μg/g。

2.6 結(jié)果表示

對羥基苯甲酸甲酯的含量為(2 026.32±36.20)μg/g。

3 結(jié)語

通過分析不確定度的來源，發(fā)現(xiàn)5 方面不確定度因素可以影響化妝品中對羥基苯甲酸甲酯的含量測定結(jié)果，其中對羥基苯甲酸甲酯標準物質(zhì)稱量和系列標準溶液配制過程是測量不確定度的主要來源，而樣品測量重復(fù)性對不確定度影響最小。試驗結(jié)果表明，由于標準工作溶液試驗點數(shù)增加、樣品重復(fù)測定次數(shù)較多以及儀器的穩(wěn)定狀態(tài)較好，故上述因素對合成不確定度的影響較小。在標準溶液的配制過程中，由于溶液稀釋采用量器較多，導(dǎo)致量器校準引入的不確定度最大。實驗時可以通過增加標準物質(zhì)稱樣量、對照品純度校正、減少溶液稀釋步驟、增加儀器靈敏度等方法降低測量不確定度的影響。