雷 熙，劉晨曦，賀三剛，彭新榮，毛林軍，劉明軍，齊·阿拉達(dá)爾*

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)院，烏魯木齊 830052；2.新疆畜牧科學(xué)院生物技術(shù)研究所'烏魯木齊 830026）

肌肉生長抑制素（myostatin，MSTN）屬于TGF β超家族中的成員，位于綿羊、山羊、牛和人的2號染色體上[1]。MSTN基因含有3個外顯子和2個內(nèi)含子，編碼375個氨基酸[2，3]。MSTN基因在許多組織中均可表達(dá)相應(yīng)的產(chǎn)物，但主要在骨骼肌中高表達(dá)，該基因突變時將會導(dǎo)致肌肉發(fā)生不同程度的增生或者肥大，甚至導(dǎo)致“雙肌現(xiàn)象”[4]。研究發(fā)現(xiàn)，MSTN基因?qū)ε餐拙d羊、新西蘭特克塞爾羊、夏洛萊羊肌肉的厚度，以及比利時特克塞爾羊肌肉的發(fā)育強(qiáng)壯程度都具有極其重要的影響[5，6]。MSTN基因突變失去抑制肌細(xì)胞生長的功能，使肌肉含量增加，進(jìn)而提高肉產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)效益，MSTN基因已在脊椎動物（哺乳動物、魚類等）和無脊椎動物（蝦類 、貝類等）中開展了相關(guān)研究，且被選作經(jīng)濟(jì)物種遺傳改良的重要候選基因。

1900年初，特克塞爾羊（Texel）產(chǎn)于特克塞爾島（荷蘭），通過長期的挑選與繁殖，Texel產(chǎn)羔量高，對不同氣候環(huán)境有較好的適應(yīng)性。其羊肉品質(zhì)好，肌肉發(fā)達(dá)，瘦肉率和胴體分割率高，市場競爭力強(qiáng)[7'8]。特克賽爾羊作為一類肉羊品種引入我國后主要用來對本地品種羊的父本利用和改良，促使本地羊的生長速度和產(chǎn)肉性能得到改善。以及在研究中發(fā)現(xiàn)其帶有分子標(biāo)記位點(diǎn)MSTN基因。

阿勒泰羊（ALTay）屬于地方優(yōu)良品種，主要產(chǎn)于新疆北部，是哈薩克羊品種的分支，其具有產(chǎn)肉脂能力強(qiáng)、耐粗飼、體格高大和適于放牧等特性[9]。阿勒泰羊的尾巴屬于脂臀型羊，周歲羊尾脂約占胴體重的13%～20%[10]，具有尾脂過大的不足。在放牧條件下，碩大的尾脂可以幫助阿勒泰羊抵御漫長而嚴(yán)寒的冬季。但隨著集約化養(yǎng)殖程度的提高，以及人們對高品質(zhì)肉的青睞，脂臀型品種羊由于含有過多的尾脂，越來越受到養(yǎng)殖者和消費(fèi)者的排斥，大量脂肪沉積極大的降低了飼料轉(zhuǎn)化率，造成生產(chǎn)效率降低，生產(chǎn)成本增加。顧志良等[11]的研究表明MSTN基因的功能與骨骼肌的生長發(fā)育有關(guān)，更重要的是可能參與脂肪的沉積和代謝。

綜上所述，MSTN基因?qū)游锏纳L發(fā)育有著重要作用，為了提高綿羊的生產(chǎn)性能和肉品質(zhì)，鑒于此，本文采用特克賽爾羊具有雙?。∕STN）純合型的公羊作為父本和阿勒泰母羊進(jìn)行雜交來生產(chǎn)的后代208只橫交F2代羔羊作為研究對象，對其胴體體尺、不同部位肌肉重等胴體性狀進(jìn)行分析，以期為提高綿羊綜合生產(chǎn)性能提供理論依據(jù)，為科學(xué)評價綿羊生長發(fā)育提供了更多的參考方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物

試驗(yàn)動物均來自新疆畜牧科學(xué)院生物技術(shù)研究中心所屬的綿羊繁育試驗(yàn)基地。選取特克塞爾×阿勒泰橫交F2代羔羊 （即特克塞爾公羊與阿勒泰母羊雜交獲得F1代羊，F(xiàn)1代公羊和F1代母羊交配獲得橫交F2代羔羊），共208只。該群體均在相同營養(yǎng)水平和管理條件下進(jìn)行飼養(yǎng)，屠宰前進(jìn)行相同方案進(jìn)行肥育。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 MSTN基因3’UTR區(qū)g＋6723G-A位點(diǎn)的鑒定

鑒定方法參照實(shí)驗(yàn)室孫亞偉博士論文[12]，本試驗(yàn)基因型數(shù)據(jù)均來自孫亞偉博士研究生畢業(yè)論文。

1.2.2 體重、體尺及胴體相關(guān)性狀指標(biāo)測量

分別采用電子秤和測尺、測杖對體重、體尺及胴體性狀等指標(biāo)進(jìn)行測定。育肥結(jié)束后，對試驗(yàn)羊只按照國家標(biāo)準(zhǔn)屠宰操作規(guī)程（DB65／T 2787-2007）進(jìn)行，胴體冷卻30 min后，按照農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)羔羊肉肉質(zhì)量分級標(biāo)準(zhǔn)（NY 116-2006）[13]所述方法對胴體進(jìn)行劈半和分割。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 22.0版本軟件的GLM軟件包進(jìn)行單因素方差分析。依據(jù)Liu[14]所述方法，分析基因型效應(yīng)對體重、體尺及胴體性狀的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 橫交F2代羊體重指標(biāo)比較

通過對橫交F2代羔羊體重和屠宰指標(biāo)統(tǒng)計分析，如表1和表2所示，橫交F2代羔羊體重平均值達(dá)到45 kg，胴體重平均為23 kg左右，符合正常的生理發(fā)育水平。屠宰后，尾巴脂肪僅為619 g，相較于哈薩克羊，其尾脂顯著降低。哈薩克羊?qū)儆谥窝?，其尾部脂肪較大，其成年母羊尾脂可達(dá)2 kg左右，通過引入特克塞爾羊父本，培育至F2代后，其尾脂顯著降低。

表1 橫交F2代羊體重指標(biāo)比較

表2 橫交F2代羊體尺指標(biāo)比較

2.2 橫交F2代羊MSTN基因3'UTR g＋6723G＞A位點(diǎn)基因型、等位基因頻率分析

MSTN基因3'UTR的SNP位點(diǎn)（g＋6723G＞A）檢測到3種基因型 ，A、G兩個等位基因。見表3，其中AA基因型頻率為0.135，其中公羊占AA基因型0.077，母羊占0.058；AG基因型頻率為0.592，其中公羊占AG基因型0.313，母羊占0.279；GG基因型頻率為0.274，其中公羊占GG型0.111，母羊占0.163，這3種基因型中基因型頻率以AG型最高，AA型最低，AA型和AG型公羊的基因頻率都比母羊高。在該群體中，MSTN基因3'UTR的（g＋6723G＞A）位點(diǎn)上的等位基因G較等位基因A占優(yōu)勢，GG基因型為優(yōu)勢基因型。

表3 橫交F2代羊MSTN基因3'UTR g＋6723G＞A位點(diǎn)基因頻率和基因型頻率

2.3 橫交F2代羊不同基因型間體重、體尺指標(biāo)關(guān)聯(lián)分析

將橫交F2代羊不同基因型與其生長性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，由表4、表5可知，MSTN基因3'UTR的（g＋6723G＞A）位點(diǎn)AA基因型的體重、胴體重、左帶臀腿重量顯著高于GA與GG基因型（P<0.05），GG基因型尾部脂肪顯著高于AA基因型（P<0.05），GA基因型尾部脂肪與GG基因型無顯著性差異（P＞0.05），在不同基因型間AA與GG基因型出生重、眼肌長、臀寬差異顯著（P<0.05），其他指標(biāo)無顯著性差異（P＞0.05）。

表4 橫交F2代羊不同基因型間體重比較

表5 橫交F2代羊不同基因型體尺指標(biāo)比較

2.4 橫交F2代羊不同基因型間不同性別體重、體尺指標(biāo)關(guān)聯(lián)分析

將橫交F2代羊不同基因型不同性別間進(jìn)行分析，由表6、表7可知，公羊AA基因型體重、胴體重、左帶臀腿重量、左5肋全重顯著高于GG基因型（P<0.05），母羊AA基因型體重、胴體重、左帶臀腿重量、左5肋全重也顯著高于GG基因型（P<0.05），其他指標(biāo)無顯著性差異（P＞0.05）。

表6 不同基因型間不同性別體重指標(biāo)比較

表7 不同基因型間不同性別的體尺指標(biāo)比較

3 討 論

生長特性一般受微效應(yīng)多基因控制，微效多基因不僅受單個多態(tài)位點(diǎn)的影響，且還受多態(tài)位點(diǎn)之間聚合效應(yīng)的影響。研究發(fā)現(xiàn)，MSTN基因與皮下脂肪厚度、肌肉重量、屠宰率等性狀均有顯著關(guān)聯(lián)性[15]。Bignell等[16]在79只東佛里生羊中檢測到MSTN基因3'UTR發(fā)生g＋6723 G＞A突變，推測MSTN基因?qū)|佛里生羊的肌肉或乳腺發(fā)育有一定影響，但由于缺乏表型記錄，沒有進(jìn)行確定突變效果的關(guān)聯(lián)分析。相關(guān)研究表明，MSTN基因?qū)游锏墓趋兰】偭科鹬匾{(diào)節(jié)作用，若其功能被下調(diào)，則會引起骨骼肌出現(xiàn)異常肥大[17]。本文選擇以特克塞爾羊?yàn)楦副九c阿勒泰羊?yàn)槟副倦s交進(jìn)行雙肌（MSTN）基因的導(dǎo)入，通過同期發(fā)情和人工授精方式繁殖獲得F1代羊，F(xiàn)1代公羊和F1代母羊交配獲得不同基因型的橫交F2代羊，對其體重體尺、胴體重指標(biāo)統(tǒng)計分析，其生長性狀符合正常的生理發(fā)育水平。結(jié)果表明MSTN基因3'UTR的（g＋6723G＞A）位點(diǎn)AA基因型的體重、胴體重、左帶臀腿重量顯著高于GA與GG基因型（P<0.05），GG基因型尾部脂肪顯著高于AA基因型（P<0.05），相較于哈薩克羊，其尾脂顯著降低。在不同基因型間AA與GG基因型出生重、眼肌長、臀寬存在差異顯著（P<0.05），橫交F2代羊不同基因型不同性別間進(jìn)行分析，公羊AA基因型體重、胴體重、左帶臀腿重量、左5肋全重顯著高于GG基因型（P<0.05），母羊AA基因型體重、胴體重、左帶臀腿重量、左5肋全重也顯著高于GG基因型（P<0.05），其他指標(biāo)無顯著差異（P＞0.05）。表明MSTN基因3'UTR的（g＋6723G＞A）位點(diǎn)能顯著提高體重，這與前人相關(guān)研究結(jié)果相符[18]。橫交F2代羊中MSTN 3'UTR的（g＋6723G＞A）SNP位點(diǎn)有三種基因型?；蛐皖l率以AG型最高，AA型最低。A和G的等位基因頻率分別為0.430和0.570，G為優(yōu)勢等位基因，本研究結(jié)果與馬麗娜等[19]研究寧夏灘羊肌肉抑制素（MSTN）基因的遺傳多樣性及其與生長性狀的相關(guān)性的結(jié)果相似。本文通過分析橫交F2代羊MSTN基因g＋6723G＞A位點(diǎn)對綿羊的生長性狀，發(fā)現(xiàn)MSTN基因g＋6723G＞A位點(diǎn)與其生長性狀顯著相關(guān)，為今后的綿羊新品種選育工作提供參考數(shù)據(jù)。

4 結(jié) 論

生產(chǎn)的橫交F2代羊具有典型的雙親本特征，本文對橫交F2代羊體重、體尺以及胴體性狀比較分析。結(jié)果表明，通過引入特克塞爾羊父本，培育至F2代后，其尾脂顯著降低。橫交F2代羔羊體重平均值達(dá)到45 kg，胴體重平均為23 kg左右，符合正常的生理發(fā)育水平。屠宰后，尾巴脂肪僅為619 g，相較于哈薩克羊，其尾脂顯著降低。

經(jīng)過MSTN基因3'UTR（g＋6723G＞A）SNP位點(diǎn)的檢測有A、G兩個等位基因，三種基因型，其中基因型頻率以AG型最高，AA型最低。A和G的等位基因頻率分別為0.430和0.570，G等位基因?yàn)閮?yōu)勢等位基因；MSTN基因3'UTR g＋6723G＞A位點(diǎn)AA基因型的體重、胴體重、左帶臀腿重量顯著高于GA與GG基因型（P<0.05），GG基因型尾部脂肪顯著高于AA基因型（P<0.05）。MSTN基因g＋6723G＞A位點(diǎn)對綿羊的生長性狀有影響，可利用該位點(diǎn)進(jìn)行與生產(chǎn)性狀相關(guān)的標(biāo)記輔助選擇，為分析遺傳多樣性提供充分的信息。