任 娟，李 舵，薛 文，秦 菊，努爾麥麥提·阿穆提，蘇曉慧，美熱木古麗·巴依待拉提，烏那爾汗·吉斯汗，王 文

（新疆維吾爾自治區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，烏魯木齊 830000）

2019 年8 月10 日，經(jīng)國(guó)家外來(lái)動(dòng)物疫病研究中心確診，新疆維吾爾自治區(qū)伊犁哈薩克自治州送檢的病料為L(zhǎng)SDV 核酸陽(yáng)性，這是我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)LSD 病例。 牛結(jié)節(jié)性皮膚病在新疆伊犁州發(fā)生后，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部下發(fā)了關(guān)于做好牛結(jié)節(jié)性皮膚病防控工作的緊急通知，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部下發(fā)了關(guān)于做好牛結(jié)節(jié)性皮膚病防控工作的緊急通知，要求抓緊做好山羊痘疫苗的免疫效力評(píng)價(jià)工作，在專用疫苗沒(méi)有研制成功之前，建議借鑒國(guó)外做法，采用國(guó)家批準(zhǔn)的山羊痘疫苗（按照山羊的5 倍劑量）對(duì)病牛所在縣及其相鄰縣全部牛只進(jìn)行緊急免疫。

新疆維吾爾自治區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心自2019 年牛結(jié)節(jié)性皮膚病在伊犁州發(fā)生以來(lái)，對(duì)全疆14個(gè)地（州、市）的牛開(kāi)展監(jiān)測(cè)，重點(diǎn)地區(qū)為伊犁州、博州、塔城地區(qū)、阿勒泰地區(qū)與哈薩克斯坦接壤的邊境縣（市）。每年5 月到8 月吸血蟲(chóng)媒活躍季節(jié)開(kāi)展一次主動(dòng)監(jiān)測(cè)。同時(shí)做好被動(dòng)監(jiān)測(cè)，要求任何單位和個(gè)人發(fā)現(xiàn)疑似牛結(jié)節(jié)性皮膚病病例，立即向當(dāng)?shù)貏?dòng)物疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)報(bào)告，當(dāng)?shù)貏?dòng)物疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)采集病料和全血樣品送自治區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)檢測(cè)。

本文分析2019 年-2021 年的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，掌握高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)牛結(jié)節(jié)性皮膚病感染情況，評(píng)估新疆牛群免疫狀態(tài)，及時(shí)預(yù)警，提出可行的防控措施，為制定牛結(jié)節(jié)性皮膚病防控政策提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2019 年-2020 年，自治區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心在全區(qū)14 個(gè)地（州、市）采集血清和抗凝血樣品，2021 年在博州、塔城地區(qū)、阿勒泰地區(qū)、伊犁州采集血清和抗凝血樣品，樣品數(shù)量見(jiàn)下文中各表。

1.2 檢測(cè)方法與結(jié)果判定

1.2.1 檢測(cè)方法

1.2.1.1 抗體檢測(cè) 采集全血分離血清用于抗體檢測(cè)'采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法。

1.2.1.2 病毒核酸檢測(cè) 采集抗凝血用于病原學(xué)檢測(cè)，采用熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法。

1.2.2 結(jié)果判定

1.2.2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果判定 根據(jù)IDVET 羊痘檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書中對(duì)實(shí)驗(yàn)有效性和結(jié)果判定的說(shuō)明進(jìn)行判定。在下列情形下實(shí)驗(yàn)有效：陽(yáng)性對(duì)照的平均吸光度值（OD 值）大于0.350，陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照平均吸光度值 （OD 值） 比值大于 3。 對(duì)于每個(gè)樣品， 計(jì)算其 S／P 百分比 （S／P%)，S／P%=（ODSample-ODNC）÷（ODPC-ODNC）×100，每個(gè)樣品得出一個(gè) S／P%。 見(jiàn)表 1。

表1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果判定

1.2.2.2 熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)結(jié)果判定 根據(jù)青島立見(jiàn)診斷技術(shù)發(fā)展中心牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒熒光PCR 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書，當(dāng)樣品的擴(kuò)增結(jié)果有典型的擴(kuò)增曲線且Ct 值＜40 時(shí)，可判定為牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒核酸陽(yáng)性；當(dāng)樣品的擴(kuò)增結(jié)果無(wú)Ct 值時(shí)，可判定為牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒核酸陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

2.1.1 各縣（市、區(qū)）血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

2019 年共監(jiān)測(cè)來(lái)自全疆21 個(gè)縣（市、區(qū)）的1 315 份血清樣品，36 份抗體陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率2.74%。見(jiàn)表2。

表2 2019 年各縣（市、區(qū)）血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

續(xù)上表

2020 年共監(jiān)測(cè)來(lái)自全疆 36 個(gè)縣 （市、 區(qū)） 的 2 549 份血清樣品，294 份抗體陽(yáng)性， 抗體陽(yáng)性率11.53%。 見(jiàn)表 3。

表3 2020 年各縣（市、區(qū)）血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

續(xù)上表

2021 年共監(jiān)測(cè)來(lái)自 F、A、L、B 的 14 個(gè)縣（市、區(qū)）的 1 656 份血清樣品，237 份抗體陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率14.31%。 見(jiàn)表 4。

表4 2021 年各縣（市、區(qū)）血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

2.1.2 全疆各地（州、市）血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

2019 年全疆 14 個(gè)地（州、市），從 C、D、J、L、M 5 個(gè)地（州、市）檢出抗體陽(yáng)性樣品共 36 份，另外 9 個(gè)地（州、市）未檢出抗體陽(yáng)性樣品。 見(jiàn)表5。

表5 2019 年各地（州、市）血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

2020 年全疆 14 個(gè)地（州、市），從 C、L、F 3 個(gè)地（州、市）檢出抗體陽(yáng)性樣品共 294 份，另外 11 個(gè)地（州、市）未檢出抗體陽(yáng)性樣品。 見(jiàn)表6。

表6 2020 年各地（州、市）血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

2021 年共監(jiān)測(cè)來(lái)自 F、A、L、B 的 1 656 份血清樣品，4 個(gè)地（州、市）均檢出抗體陽(yáng)性樣品，共 237 份抗體陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率14.31%。 其中，F(xiàn) 抗體陽(yáng)性率最高，A 抗體陽(yáng)性率最低。 見(jiàn)表7。

表7 2021 年各地（州、市）血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

2.2 病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

2019 年共監(jiān)測(cè)來(lái)自全疆14 個(gè)地（州、市）的1 722 份抗凝血樣品，牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒核酸均為陰性。2020 年共監(jiān)測(cè)來(lái)自全疆14 個(gè)地（州、市）的1 523 份抗凝血樣品，牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒核酸均為陰性。2021 年共監(jiān)測(cè)來(lái)自F、A、L、B 的1 638 份抗凝血樣品，牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒核酸均為陰性。 見(jiàn)表8。

表8 2019 年-2020 年各地（州、市）病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

3 討 論

全疆開(kāi)展免疫工作的4 個(gè)地（州）為F、A、L、B，從血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果看，這4 個(gè)地（州）抗體陽(yáng)性率不高。機(jī)體對(duì)山羊痘活疫苗的免疫應(yīng)答主要以細(xì)胞免疫應(yīng)答為主，體液免疫應(yīng)答為輔。 山羊痘活疫苗的缺點(diǎn)是皮內(nèi)接種操作困難，基層防疫人員容易將疫苗注入皮下或肌肉，會(huì)造成免疫效果不佳或免疫失敗。

監(jiān)測(cè)樣品為一一對(duì)應(yīng)的血清和抗凝血，即同時(shí)采集同一頭牛的血清和抗凝血分別開(kāi)展血清學(xué)監(jiān)測(cè)和病原學(xué)監(jiān)測(cè)。 使用IDVET 羊痘檢測(cè)試劑盒，無(wú)法區(qū)分野毒感染抗體和免疫抗體，從病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果均為陰性，且無(wú)臨床病例(發(fā)熱'消瘦，淋巴結(jié)腫大'皮膚水腫、局部形成堅(jiān)硬的結(jié)節(jié)或潰瘍)報(bào)告這一點(diǎn)看，疫苗起到了一定的保護(hù)作用。 各地（州、市）血清陽(yáng)性率差異較大，與采樣時(shí)間、接種疫苗的方法有關(guān)。

4 結(jié) 論

牛結(jié)節(jié)性皮膚病是我國(guó)新發(fā)疫病，目前國(guó)內(nèi)對(duì)該病的研究報(bào)道不多。 牛結(jié)節(jié)性皮膚病和羊痘感染機(jī)體后，機(jī)體的免疫應(yīng)答都主要以細(xì)胞免疫應(yīng)答為主，所以疫苗免疫的效果不僅限于體液免疫應(yīng)答的抗體水平高低，更重要的是細(xì)胞免疫應(yīng)答的各種效應(yīng)性淋巴細(xì)胞及多種細(xì)胞因子的反應(yīng)過(guò)程。 應(yīng)更多地從細(xì)胞免疫應(yīng)答的角度探索對(duì)疫苗免疫效果進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法， 轉(zhuǎn)變?nèi)藗儐我坏刂匾曮w液免疫抗體的保護(hù)力，而忽視細(xì)胞免疫應(yīng)答對(duì)機(jī)體保護(hù)作用的做法。