鄢 一

（葫蘆島市中心醫(yī)院，遼寧 葫蘆島 125001）

產(chǎn)前診斷是現(xiàn)代臨床上產(chǎn)科應(yīng)用十分常見的診斷方式[1]，其主要目的是盡可能降低現(xiàn)代人口的出生缺陷率，使現(xiàn)代人口的綜合素質(zhì)能夠得到有效提高。雖然染色體病癥在目前臨床上還尚無有效且良好的治療方式，但進(jìn)行有效的產(chǎn)前診斷能夠避免染色體異?；純旱某錾鶾2]。傳統(tǒng)的染色體核型分析技術(shù)對于染色體疾病具有極高的診斷準(zhǔn)確率，屬于染色體疾病的診斷金標(biāo)準(zhǔn)，這種診斷方式是臨床上應(yīng)用最為廣泛且效果最優(yōu)的產(chǎn)前診斷技術(shù)，但這種診斷技術(shù)不僅診斷周期較長，且各項操作流程極為繁瑣，對相關(guān)操作技術(shù)人員的要求也較高，故而在臨床上難以推廣使用[3-4]。利用FISH可以在無菌狀態(tài)下對羊膜分裂間期的細(xì)胞進(jìn)行直接的檢測，并能對最常用的異倍體進(jìn)行早期的產(chǎn)前檢查，并對可能存在的缺陷進(jìn)行早期的羊膜細(xì)胞核型分析。FISH能夠?qū)ξ磁囵B(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行直接檢測，這種診斷方式能夠有效縮短檢測時間，大大提高了臨床的診斷效率，而目前臨床上已經(jīng)越來越普遍應(yīng)用這種診斷方式，對胎兒染色體異常進(jìn)行產(chǎn)前診斷[5-6]。這種診斷方式操作簡單，對于技術(shù)人員的要求較低，并且在部分臨床研究中認(rèn)為，這種診斷方式的診斷準(zhǔn)確率較高，可適用于多種兒童的染色體異常診斷[7]。本文探究將FISH應(yīng)用于產(chǎn)前診斷染色體嵌合體中的效果，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2018年9月至2020年2月作為研究時段，在該時段選取我院收治的600例存在產(chǎn)前診斷指征的產(chǎn)婦進(jìn)行羊膜穿刺術(shù)，獲得其羊水細(xì)胞后，分別對其進(jìn)行染色體異常診斷。納入標(biāo)準(zhǔn)：①孕周為19～24+6周。②單胎妊娠。③具有胎兒畸形高危因素，如高齡妊娠、先天性心臟病家族史、妊娠期糖尿病等。④對研究知情同意，自愿配合研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在認(rèn)知障礙。②先兆流產(chǎn)。③中途失訪，脫落研究。將患者資料錄入Excel表格后進(jìn)行資料分析，我院統(tǒng)計學(xué)人員分析患者資料。

1.2 方法 本次研究中所有產(chǎn)婦在入院后簽署知情同意書并接受相關(guān)的健康知識教育，在超聲引導(dǎo)下對產(chǎn)婦進(jìn)行羊膜穿刺術(shù)。將最初的1 mL羊水去除后，避免出現(xiàn)母體細(xì)胞污染，隨后取出羊水25 mL，將其中20 mL作為細(xì)胞培養(yǎng)，其余5 mL進(jìn)行FISH檢測。

細(xì)胞遺傳學(xué)診斷：將在無菌操作條件下取出的20 mL羊水裝入無菌離心管內(nèi)進(jìn)行10 min離心，收集羊水細(xì)胞，采用貼壁細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行7～14 d的培養(yǎng)確認(rèn)細(xì)胞生長狀況良好后，對培養(yǎng)皿中加入秋水仙堿、收集羊水細(xì)胞后常規(guī)制片，由醫(yī)務(wù)人員對其進(jìn)行觀察。

FISH檢測：采用雅培公司生產(chǎn)的FISH探針進(jìn)行定位，對其中的熒光信號進(jìn)行分析，確認(rèn)綠色與紅色熒光信號。

1.3 觀察指標(biāo) 本次研究中，按照試劑和說明對患者細(xì)胞進(jìn)行處理，玻片處理、雜交、洗片、復(fù)染均在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察分析，每個雜交區(qū)域應(yīng)當(dāng)隨機(jī)至少記錄50個信號強且無重疊的雜交細(xì)胞。90.00%以上的細(xì)胞確認(rèn)正常，則記錄為正常標(biāo)本，而其中60.00%細(xì)胞若出現(xiàn)異常，則記錄為異常標(biāo)本。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 本研究選擇SPSS 20.0 For windows開展統(tǒng)計學(xué)分析；應(yīng)用t值對計量數(shù)據(jù)進(jìn)行檢驗；應(yīng)用χ2對計數(shù)數(shù)據(jù)進(jìn)行檢驗；P＜0.05提示數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

在本次研究完成后，對所有患者進(jìn)行染色體核型分析，共計存在71例染色體異常情況，染色體異常率為11.83%，其中染色體非整倍體例數(shù)為58例（81.69%），存在4例漏診情況；FISH診斷中確診染色體異常為67例，染色體異常率為11.17%，其中染色體非整倍體例數(shù)67例（100.00%），其中8例嵌合體異常完全確認(rèn)，無漏診情況，最終兩種診斷結(jié)果比較無顯著性差異（χ2=0.1310，P=0.7173）。見表1。

表1 胎兒畸形的兩種產(chǎn)前篩查方法結(jié)果比較

3 討 論

胎兒的染色體嵌合是影響胎兒出生質(zhì)量的一個主要原因，其原因可能是由于父母的遺傳原因，也可能是由于胎盤等原因造成的。胎兒是否有嵌合現(xiàn)象，如有絨毛或羊水染色體的染色體異常，則應(yīng)考慮是否有嵌合。但是，在基因測試中是否存在著染色體嵌合，這給臨床醫(yī)師帶來了很大的困難，因此，要了解其起源、形成機(jī)制等問題，為產(chǎn)前診斷奠定基礎(chǔ)。

目前，隨著我國產(chǎn)前技術(shù)水平的提高，有關(guān)胎盤是否能夠真實地表現(xiàn)出胚胎的遺傳特征的爭論也越來越多。羊水穿刺手術(shù)很困難，與取樣方式和術(shù)者的技術(shù)水準(zhǔn)有關(guān)，很有可能會出現(xiàn)母體污染。而FISH可以對染色體的特征進(jìn)行分析，從而判斷其是否為非整倍體，從而對胎兒的染色體異常情況進(jìn)行確診。FISH使產(chǎn)前確診的周期縮短到24～48 h。因此，理解染色體嵌合的起源，形成機(jī)制和測試的意義是非常關(guān)鍵的。本研究通過對染色體嵌合的分類、機(jī)制和對胎兒檢查效果的分析，以期更好地了解胎兒的缺陷，為臨床提供科學(xué)的指導(dǎo)。

采用穿刺方法獲得絨毛、羊水、臍帶血等胎兒細(xì)胞進(jìn)行遺傳學(xué)診斷，能夠有助于現(xiàn)代優(yōu)生優(yōu)育理念的推廣[8]。細(xì)胞培養(yǎng)以及染色體核型分析依然是對染色體病癥進(jìn)行診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。染色體核型分析在臨床上具有極高的準(zhǔn)確性及敏感度，可達(dá)99.5%左右，但羊水細(xì)胞通常需要經(jīng)過7～14 d的培養(yǎng)后才能進(jìn)行分析，這不僅對產(chǎn)婦和家屬造成了極大的心理壓力，也會對醫(yī)務(wù)人員造成額外的工作壓力[9]。羊膜腔羊水穿刺術(shù)的危險性較低，由于采集時間的差異，所得到的結(jié)果也不盡相同。羊膜腔穿刺是當(dāng)前的常規(guī)產(chǎn)前檢查方法，因為其來源廣泛，包括胎兒泌尿生殖道、呼吸器官以及代表不同胚層的上皮組織。其主要是將羊膜質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行免疫，經(jīng)過7～8 d的時間，再進(jìn)行制片及染色體類型的測定，最后確定胚胎的染色體類型。從胚胎的發(fā)生情況看，羊膜的中胚層細(xì)胞與胎兒的真正的染色體狀況是最相近的。羊膜腔的檢查能準(zhǔn)確地顯示出胚胎的染色體狀況。因此，在做絨毛活組織檢查時，必須進(jìn)行羊膜腔的檢查以確定是否存在有染色體嵌合癥。而FISH作為一種新型的分子生物學(xué)技術(shù)，具有快速、簡便、安全、靈敏度高、特異性高等特點，在細(xì)胞遺傳學(xué)、間期遺傳學(xué)、DNA序列檢測等方面有著重要的作用。FISH是以DNA為基礎(chǔ)，將DNA或RNA探針與已變性的單鏈RNA進(jìn)行互補配對，由具有熒光基團(tuán)的抗體來鑒別，或?qū)⑵渑c靶基因結(jié)合，再由螢光基將其與靶基因連接，在螢光顯微鏡下，直接在細(xì)胞核、染色體或切片上發(fā)現(xiàn)靶基因的位置，F(xiàn)ISH能夠?qū)θ焉?6周以后的孕婦的羊水間期細(xì)胞進(jìn)行檢測[10]，能夠?qū)Ξa(chǎn)婦進(jìn)行穿刺后24 h內(nèi)的快速診斷，明確胎兒13、18、21、X和Y染色體數(shù)目異常。在目前臨床研究中發(fā)現(xiàn)這5對染色體的非整倍體占所有胎兒染色體異常的60.00%～80.00%，并且占所有染色體異?；顙氲?5.00%，所以對這5對染色體進(jìn)行診斷，能夠快速明確胎兒是否存在染色體異常狀況，對于緩解孕婦和家屬的心理壓力來說有積極意義。

在本次研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用與FISH能夠檢出染色體異常67例，確診率為11.17%，與染色體核型分析方案對比差異未見統(tǒng)計學(xué)意義。并且在FISH中對染色體非整倍體的確診率為100.00%，未見出現(xiàn)漏診情況。FISH在應(yīng)用過程中，應(yīng)用5 mL左右的羊水即可獲得準(zhǔn)確的診斷[11]。這種新型的診斷方式，所有檢測均可在48 h內(nèi)完成，大大降低了醫(yī)務(wù)人員的工作壓力，并且這種診斷方式的操作和分析較為簡便，對于工作人員的素質(zhì)要求較低，無須對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，不僅能夠?qū)罴?xì)胞進(jìn)行檢測，還能夠?qū)α鳟a(chǎn)組織、胎兒組織進(jìn)行檢測，具有較高的可用性[12]。

產(chǎn)前診斷染色體嵌合體主要是利用絨毛細(xì)胞的染色體圖譜，在對細(xì)胞的中期分裂階段進(jìn)行鑒別時，由于材料較多，細(xì)胞間的分離數(shù)量較小，導(dǎo)致其檢測的準(zhǔn)確性受限。利用FISH可以與中間分裂階段和間期進(jìn)行雜交，可以得到許多具有雜合的細(xì)胞，從而可以快速準(zhǔn)確地診斷X、Y、13、18、21號染色體的異常。利用全絲標(biāo)記的探針、X、Y、13、18、21號染色體的標(biāo)記探針和全染探針對孕中期的羊水細(xì)胞進(jìn)行了熒光原位雜交，應(yīng)用熒光技術(shù)對胎兒進(jìn)行早期診斷，有利于預(yù)防胎兒異常和智力低下染色體異常胎兒應(yīng)選擇及時終止妊娠。

染色體核型分析是診斷染色體相關(guān)疾病的重要方式，可以在顯微鏡下，直觀的觀察染色體數(shù)量和異常結(jié)構(gòu)，是當(dāng)今臨床診斷染色體疾病的金標(biāo)準(zhǔn)[13]。有研究提出[14]，傳統(tǒng)細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷是預(yù)防染色體異?；純撼霈F(xiàn)的重要途徑。隨著近年來產(chǎn)前診斷技術(shù)的不斷完善，很多研究發(fā)現(xiàn)，在羊水與絨毛培養(yǎng)中，容易出現(xiàn)嵌合問題，但是其中部分為假性嵌合。如何判定并且識別嵌合的真假度已成為現(xiàn)階段研究的重要問題。染色體微陣列比較基因組雜交檢測是以微陣列技術(shù)為基礎(chǔ)，包括基于比較基因組雜交的微陣列、基于單核苷酸多態(tài)性的微陣列[15]。FISH將熒光標(biāo)記的特異性寡核苷酸片段作為探針，利用熒光系統(tǒng)檢測，定位分析DNA定性以及相對定位分析。與核型分析技術(shù)相比，F(xiàn)ISH的直觀性更強，特異性更高，F(xiàn)ISH可以對未培養(yǎng)羊水細(xì)胞間期細(xì)胞進(jìn)行直接檢測，還可以快速進(jìn)行產(chǎn)前診斷。尤其是針對羊水核型少者直接進(jìn)行FISH檢測，可以更好的對胎兒情況進(jìn)行判定。

綜上所述，染色體核型分析能夠完全確認(rèn)染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常，而FISH在產(chǎn)前診斷中的效率和成功率較高，但單獨應(yīng)用FISH，可能會出現(xiàn)小概率的誤診情況，故而在臨床上盡可能選擇兩種診斷方式聯(lián)合應(yīng)用的方案，這樣才能使產(chǎn)前診斷發(fā)揮最大化的診斷效能。