劉瑞巧，杜寶蘭，孟欣宇

1.北京市華都峪口禽業(yè)有限責(zé)任公司，北京 101206；2.國家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系平谷綜合試驗站，北京 101206

馬立克氏?。∕D）又名神經(jīng)淋巴瘤病，是由細(xì)胞結(jié)合性皰疹病毒引起的傳染性腫瘤??；本病主要以外周神經(jīng)、內(nèi)臟器官、虹膜及皮膚等發(fā)生淋巴樣浸潤，并發(fā)展成淋巴瘤；臨床表現(xiàn)以免疫抑制、神經(jīng)性障礙、內(nèi)臟器官腫瘤、虹膜色素消失、瞳孔縮小和皮膚羽囊結(jié)節(jié)為主。其易感雞群為未經(jīng)疫苗免疫的雛雞。因本病無有效治療方法，故加強對本病的預(yù)防具有十分重要的意義，孵化場將1 日齡雛雞馬立克氏病疫苗免疫作為控制本病的有效手段，免疫接種后可使損失降低至5%以下。免疫效果主要受疫苗質(zhì)量、儲存、融化、稀釋、注射部位和劑量、雛雞出殼后的免疫時間、生產(chǎn)場衛(wèi)生情況、疫苗干擾等因素的影響，任一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都會對免疫效果造成影響，導(dǎo)致免疫失敗。下面根據(jù)免疫環(huán)節(jié)，淺談如何做好孵化場雛雞1 日齡馬立克氏病疫苗的有效免疫，避免免疫失敗的發(fā)生。

1 疫苗采購

目前國產(chǎn)雞馬立克氏病疫苗產(chǎn)品有雞馬立克氏病Ⅰ+Ⅲ型二價活疫苗（CVI988+FC126 株）、雞馬立克氏病活疫苗（814 株）、雞馬立克氏病活疫苗（CVI988/Rispens 株）、雞馬立克氏病活疫苗（CVI988株）、雞馬立克氏病火雞皰疹病毒活疫苗（FC126株）、雞馬立克氏病火雞皰疹病毒耐熱保護(hù)劑活疫苗。其中，需要液氮保存的CVI988 株、814 株的馬立克疫苗因保護(hù)效果好而在國內(nèi)被廣泛使用[1]。疫苗采購及入庫時確保疫苗的高質(zhì)量。

1.1 疫苗廠家

選擇優(yōu)質(zhì)廠家確保采購疫苗質(zhì)量。采購疫苗時必須從有資質(zhì)的獸藥廠家進(jìn)行采購。進(jìn)貨前，查驗疫苗廠家的《獸藥經(jīng)營許可證》《生物制品經(jīng)營許可證》等信息，購入的疫苗瓶包裝上要有批準(zhǔn)文號、生產(chǎn)日期、GMP 認(rèn)證等信息。

1.2 疫苗采購計劃

孵化場根據(jù)雛雞生產(chǎn)計劃制定雛雞免疫計劃及疫苗采購計劃，并嚴(yán)格按照計劃采購；采購時做到疫苗與稀釋液配套進(jìn)貨。

1.3 疫苗入庫

要求疫苗在規(guī)定的條件下運輸，為確保接收的疫苗質(zhì)量，到貨后技術(shù)人員先查看疫苗的運輸條件，條件不符合標(biāo)準(zhǔn)拒收；接貨時檢查購進(jìn)疫苗法定的批準(zhǔn)文號、批簽發(fā)檢驗報告書、生產(chǎn)批號、生產(chǎn)日期、有效期等信息；卸貨后做好疫苗購進(jìn)驗收記錄，包括進(jìn)貨數(shù)量、供貨單位、購貨日期、疫苗生產(chǎn)日期、質(zhì)量檢查報告及驗收人簽名等。

2 疫苗儲存

2.1 儲存環(huán)境

關(guān)注疫苗儲存大環(huán)境，在疫苗儲存方面，孵化場要設(shè)立通風(fēng)效果好、干燥、衛(wèi)生、遠(yuǎn)離熱源的疫苗專用庫，并由專人負(fù)責(zé)，每日對儲存環(huán)境進(jìn)行查看。

關(guān)注疫苗儲存的液氮環(huán)境。冰凍馬立克疫苗的病毒是一種特殊的病毒，必須保存在活的細(xì)胞中才有免疫作用，細(xì)胞死亡后，病毒隨即死亡，疫苗失去有效作用，-196 ℃的液氮可以長時間保持細(xì)胞活性[1]，疫苗需保存在-196 ℃的液氮中。任何導(dǎo)致疫苗暴露在液氮之外的操作都會引起疫苗溶解而失效。疫苗儲存時，要確保疫苗保存在液氮罐內(nèi)液氮面以下，一般液氮面高于疫苗面8～10 cm，并且垂直存放，做到定期對保存疫苗的液氮罐補充液氮。以35 L的液氮罐為例，疫苗提斗柄長度31 cm，如果液氮罐口離液面的距離大于31 cm，疫苗就會暴露在空氣中，導(dǎo)致疫苗溶解而影響疫苗效價，為保證保存質(zhì)量，要求液氮罐口離液面的距離必須控制在26 cm內(nèi)[2]，負(fù)責(zé)人每天使用木尺測量液氮面高度，及時添加液氮。如保存的過程中出現(xiàn)液氮意外泄露或者蒸發(fā)，疫苗失效不能繼續(xù)使用，需及時丟棄。

關(guān)注疫苗稀釋液的儲存環(huán)境。疫苗專用稀釋液為清亮、紅色、無雜質(zhì)的透明液體，需儲存在干燥、衛(wèi)生、常溫環(huán)境中，并根據(jù)生產(chǎn)日期規(guī)律存放、使用，稀釋液若保存過程質(zhì)量出現(xiàn)問題，發(fā)現(xiàn)變色或有雜質(zhì)，應(yīng)棄用。

2.2 儲存時間

疫苗的有效期為24 個月，超過有效期不能起到預(yù)期的免疫效果，會造成免疫失敗，應(yīng)嚴(yán)禁使用。

首先要做到有計劃地采購，在制定疫苗采購計劃時，要嚴(yán)格按照疫苗的使用計劃進(jìn)行訂購，以保證所用疫苗在有效期內(nèi)用完，防止由于采購不當(dāng)造成儲存時間長而引起的疫苗失效；其次在疫苗庫管理方面，要設(shè)立專門的疫苗檔案，疫苗庫負(fù)責(zé)人在疫苗接收卸貨時，檢查疫苗生產(chǎn)時間、失效時間，做好接收記錄；收貨后存放時，應(yīng)將生產(chǎn)日期最早的疫苗放在庫房最外面，根據(jù)生產(chǎn)日期進(jìn)行規(guī)律存放；疫苗使用時，按照疫苗生產(chǎn)日期規(guī)范使用，定期檢查疫苗庫存、疫苗生產(chǎn)日期，確保庫內(nèi)疫苗均在有效期范圍內(nèi)免疫。

3 雛雞免疫時間

馬立克氏病疫苗要求雛雞出殼后24 h 內(nèi)接種完畢，雛雞出殼超過24 h，免疫保護(hù)率降低。為保證雛雞按時免疫，首先要在孵化期內(nèi)縮短雛雞出殼的間隔時間，做到雛雞出雛整齊度高；其次要做到集中出雛，縮短雛雞處理時間，確保所有雛雞出殼24 h 內(nèi)免疫。

精準(zhǔn)孵化，縮短雛雞出殼的間隔時間。蛋雞標(biāo)準(zhǔn)的孵化時間為504 h，不同品種、日齡、蛋重的種蛋對孵化參數(shù)的需求有一定的差距。首先實現(xiàn)所有孵化器的雛雞整齊度高。在生產(chǎn)計劃編制時，根據(jù)種蛋品種、日齡、蛋重進(jìn)行分級。精準(zhǔn)生產(chǎn)計劃，實現(xiàn)分品種、日齡、蛋重的專機孵化；精準(zhǔn)孵化參數(shù)，實現(xiàn)對不同品種、日齡、蛋重的種蛋孵化參數(shù)的調(diào)整，縮短孵化設(shè)備之間出殼時間的差異，實現(xiàn)每臺機器的出雛時間一致。其次實現(xiàn)單臺孵化器內(nèi)的雛雞整齊度高，做好孵化器內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，及時檢查風(fēng)機、加溫加濕系統(tǒng)、保溫、護(hù)板、翻蛋等，降低孵化車內(nèi)部的溫差，確保不同位置胚蛋積溫值一致，縮短孵化器內(nèi)部雛雞出殼的間隔時間。

集中出雛，縮短雛雞處理時間。孵化場在雛雞處理時，應(yīng)采取集中出雛的生產(chǎn)模式，縮短第一只雛雞與最后一只雛雞的處理時間，做到所有雛雞24 h 內(nèi)免疫接種，保證免疫質(zhì)量。若當(dāng)批次出雛數(shù)量多，不能保證按時免疫完畢，孵化廳可采取分批次入孵的方式進(jìn)行操作。

4 免疫器材準(zhǔn)備

免疫前需對免疫所使用的器材進(jìn)行嚴(yán)格衛(wèi)生消毒。稀釋、注射等免疫器材是直接接觸疫苗的工具，解凍、稀釋及接種過程中衛(wèi)生不合格會導(dǎo)致馬立克病疫苗品質(zhì)下降、影響免疫效果。免疫前，稀釋疫苗和接種用的注射器、針頭等器材，首先用清水沖洗干凈，然后用121 ℃高壓滅菌至少15 min 或置沸水浴中消毒至少20 min，最后用生理鹽水沖洗后使用，沖洗過程不能接觸化學(xué)消毒劑。在免疫過程中所有的針頭和注射器做到1 h 更換1 次。

5 疫苗準(zhǔn)備

馬立克疫苗的準(zhǔn)備工作包括疫苗的融化、稀釋，要求嚴(yán)格，且整個疫苗的融化、稀釋要在1.5 min 內(nèi)完成。在摘取疫苗的過程中不能影響液氮罐中存儲的疫苗。

1）取苗：取苗時，操作人員戴上保護(hù)手套及面罩，一只手提起液氮中的疫苗提桶，從液氮罐中提出一小筒苗，并從其中取出1 根鋁桿，同時從上面摘取1 瓶疫苗，觀察疫苗瓶是否完好，其余疫苗立即放回液氮罐中，蓋好液氮罐。取苗時不能將整個提桶提出液氮罐外。

2）融化：將取出的疫苗迅速放到37 ℃或27 ℃（根據(jù)疫苗廠家要求）標(biāo)準(zhǔn)的恒溫水浴鍋中，輕輕搖動疫苗瓶，使疫苗在1 min 內(nèi)迅速溶解。

3）稀釋：溶解完畢后，用干凈紙巾擦干瓶口后開瓶，再用已抽取稀釋液的注射器（18G 針頭）緩慢吸出疫苗，將疫苗沿著稀釋液瓶壁緩慢加入稀釋液中，推入過程不能產(chǎn)生氣泡。再次抽取混有疫苗的稀釋液沖洗疫苗瓶及瓶蓋，不少于3 次。最后輕輕晃動稀釋液瓶子，使疫苗混合均勻。疫苗融化完后必須使用，絕不允許將融化的疫苗重新冰凍。

6 疫苗注射

6.1 疫苗有效時間

疫苗稀釋后，需要在有效時間內(nèi)進(jìn)行免疫，一般控制在30 min 內(nèi)，不得超過60 min。在免疫時間管理方面，首先做好免疫人員的匹配，疫苗配備結(jié)束后，疫苗袋上標(biāo)記配制結(jié)束后的時間、疫苗使用結(jié)束時間、配藥人員姓名等信息。

6.2 免疫部位

雛雞頸背部正中1/3 處皮下注射免疫，注射方式有手動注射、半自動注射、自動注射3 種模式。免疫前根據(jù)不同的模式進(jìn)行注射部位的確定、調(diào)整，并做到及時檢查。

6.3 注射劑量

每2 000 羽份疫苗用400 mL 無菌稀釋液稀釋，用20 號或21 號針頭接種，每只雛雞按照0.2 mL（1 羽份）免疫，疫情危險區(qū)可提高至每只0.24 mL，做到注射劑量準(zhǔn)確。注射針頭劑量檢查很關(guān)鍵，免疫前調(diào)試免疫設(shè)備、并用塑料量管測定注射操作的每把/臺注射器的注射劑量，測量方式為在塑料管0.6 mL 上端的凹面畫線，連續(xù)注射3 次，看是否達(dá)到0.6 mL。在注射過程中，每隔1 h 測定1次。在保證免疫效果的基礎(chǔ)上，避免疫苗浪費，出雛完畢前正確評估所需疫苗數(shù)量。免疫完畢后，當(dāng)批次用剩下的疫苗要遺棄。

7 免疫質(zhì)量檢查

免疫時，做到有效免疫，防漏免、空免。免疫前向馬立克疫苗稀釋液中加入0.01%的馬立克疫苗無菌藍(lán)色專用染液，檢查有無漏免、滲液、出血等情況，如出現(xiàn)漏免或滲液應(yīng)及時補免，對出血雞只淘汰，同時查找原因，及時調(diào)整免疫設(shè)備；免疫過程觀察疫苗瓶內(nèi)的疫苗情況，避免發(fā)生注射針頭堵針現(xiàn)象；關(guān)注疫苗稀釋瓶內(nèi)的疫苗量，做到及時更換疫苗，防止出現(xiàn)空瓶注射。

8 免疫雞群衛(wèi)生管理

雛雞出殼前、出殼后、入舍前、入舍后的有效消毒有利于雞只對馬立克氏疫苗建立起良好的免疫應(yīng)答。孵化過程中做好孵化廳內(nèi)環(huán)境、孵化器、出雛器、雛雞處理設(shè)備及附屬設(shè)備的衛(wèi)生；雛雞處理前對雛雞處理場地、運輸工具等進(jìn)行徹底消毒；養(yǎng)殖戶引進(jìn)雛雞前也要對雞舍熏蒸消毒，引進(jìn)后帶雞消毒，及時殺滅空氣中的病原體。

9 關(guān)于其他疫苗的混合使用

雛雞1 日齡馬立克疫苗免疫不能在馬立克疫苗專用稀釋液中加入其他疫苗、抗生素、維生素等，以免降低藥效，造成無效免疫。

10 結(jié) 語

綜上所述，免疫有效率受采購疫苗質(zhì)量、保存、免疫操作、免疫劑量、免疫時間、雞群衛(wèi)生等方面的影響，無論哪方面出現(xiàn)問題，都會造成不同程度的免疫失敗。孵化場配備專業(yè)的防疫免疫人員，經(jīng)過培訓(xùn)考核合格后持證上崗，做到定期培訓(xùn)、隨時檢查，通過對疫苗采購、質(zhì)量保證、環(huán)境衛(wèi)生方面加強管理，做到雛雞有效免疫。